HLA-DR CAR-T组合物以及制备方法和使用方法技术

提供了针对HLA‑DR的CAR‑T组合物。某些提供的HLA‑DR CAR组合物展现出对对象HLA‑DR多态性区域的低亲和力。还提供了与HLA‑DR CAR‑T相关的各种体外和体内方法以及试剂。本文所述方法可以包括例如，HLA‑DR结合表征，T细胞增殖，以及使用本文所提供的HLA‑DR CAR‑T预防和/或治疗性处理癌症。

HLA-DR car-t composition, preparation method and use method

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】HLA-DRCAR-T组合物以及制备方法和使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年2月21提交的美国专利申请第62/461,632号的优先权权益，通过引用将该申请的公开内容全文纳入本文。
技术介绍
癌症至今仍是世界上主要的死亡原因之一。最近的统计数据报道称全球人口有13％死于癌症。根据国际癌症研究机构(IARC)的估计，2012年全球新发癌症病例1410万例，癌症死亡人数820万例。到2030年，由于人口增长和老龄化以及接触诸如吸烟、不健康饮食和缺乏身体活动等风险因素，全球负担预计将增加至2170万新癌症病例和1300万癌症死亡人数。此外，癌症治疗的痛苦和医疗开支导致癌症患者及其家人生活品质降低。经嵌合抗原受体(CAR-T)工程改造的T细胞具有治疗疾病诸如癌症的治疗性潜力。CAR-T治疗赋予T细胞有力的靶向亲和力(affinity)和信号转导功能。然而，CAR-T治疗令人印象深刻的功效通常伴随着严重的副作用，诸如细胞因子释放综合症(CRS)。因此，存在对于开发副作用减少的CAR-T治疗和策略为满足的需求。
技术实现思路
本公开提供了这样的工程改造的T细胞，其表达包含HLA-DR抗原结合结构域的嵌合抗原受体(CAR)。本公开提供了这样的理解，可以基于HLA-DR结合结构域对于来自对象的T细胞的结合特性选择、工程改造和/或优化包含HLA-DR抗原结合结构域的CAR(HLA-DRCAR)。在一些实施方式中，HLA-DR结合结构域对HLA-DR多态性表位具有特异性。本公开包含这样的认识，即以低亲和力结合来自对象的细胞(例如，T细胞)的HLA-DRCAR可以对治疗某些疾病和/或紊乱提供有效疗法。在一些实施方式中，本公开提供了包含嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中CAR包含HLA-DR抗原结合结构域，其中T细胞与对象是自体同源的，并且其中HLA-DR抗原结合结构域以低亲和力结合来自对象的T细胞。在一些实施方式中，HLA-DR抗原结合结构域是MVR-scFv或其变体。在一些实施方式中，本公开提供了治疗癌症的方法，其包括给予对象包含或递送本公开的HLA-DRCART细胞的组合物。在一些实施方式中，本公开提供了产生自体同源工程改造T细胞的方法，其包括：(a)获得HLA-DR抗原结合结构域，其中HLA-DR抗原结合结构域以低亲和力结合来自对象的HLA-DR，和(b)在获自对象的T细胞中表达包含HLA-DR抗原结合结构域的嵌合抗原受体(CAR)，从而产生自体同源工程改造T细胞。在一些实施方式中，本公开提供了制备自体同源工程改造T细胞的方法，其包括：提供或获得HLA-DR抗原结合结构域与来自对象的T细胞结合的分析；如果结合小于阈值，那么工程改造来自对象的T细胞以表达包含HLA-DR抗原结合结构域的CAR。在一些实施方式中，自体同源工程改造T细胞以适当的刺激在12天的培养中扩增至少15倍、至少20倍、至少25倍或更多。在一些实施方式中，包含这样CAR的自体同源工程改造T细胞以适当的刺激在12天的培养中扩增至少15倍、至少20倍、至少25倍或更多，所述CAR包含以小于阈值的结合与来自对象的T细胞结合的HLA-DR抗原结合结构域。在一些实施方式中，包含这样CAR的自体同源工程改造T细胞以适当的刺激在12天的培养中扩增至少20倍，所述CAR包含以小于阈值的结合与来自对象的T细胞结合的HLA-DR抗原结合结构域。在一些实施方式中，适当的刺激包括将T细胞暴露于CD3特异性抗体和/或HLA-DR表达细胞。在一些实施方式中，HLA-DR抗原结合结构域与来自对象的T细胞结合的分析是结合亲和力(affinity)的直接测量(例如，KD)。在一些实施方式中，HLA-DR抗原结合结构域与来自对象的T细胞结合的分析是HLA-DR抗原结合结构域与T细胞功能性亲合力(avidity)的测量。在一些实施方式中，功能性亲合力与触发T细胞应答所需的抗原剂量成反比。在一些实施方式中，HLA-DR抗原结合结构域与T细胞功能性亲合力的测量包括离体定量T细胞功能，例如，IFN-γ产生，细胞毒性活性(裂解靶细胞的能力)或增殖。在一些实施方式中，HLA-DR抗原结合结构域与T细胞功能性亲合力的测量包括确定诱导T细胞半最大应答(EC50)的HLA-DR抗原结合结构域的浓度。在一些实施方式中，提供的方法包括制备和/或产生自体同源工程改造T细胞，其表达包含HLA-DR抗原结合结构域的HLA-DRCAR。在一些实施方式中，HLA-DR抗原结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有1、2或3条重链CDR，所述重链CDR包含SEQIDNO:2-4中任一项所示的重链CDR序列，轻链可变区具有1、2或3条轻链CDR，所述轻链CDR包含SEQIDNO:6-8中任一项所示的轻链CDR。在一些实施方式中，HLA-DR抗原结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有SEQIDNO:2所示的重链CDR1；SEQIDNO:3所示的重链CDR2；和SEQIDNO:4所示的重链CDR3；所述轻链可变区具有SEQIDNO:6所示的CDR1；SEQIDNO:7所示的轻链CDR2；和SEQIDNO:8所述的CDR3。在一些实施方式中，HLA-DR抗原结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与SEQIDNO:1所示序列80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同性的氨基酸序列；所述轻链可变区具有与SEQIDNO:5所示序列80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同性的氨基酸序列。在一些实施方式中，HLA-DRCAR包含：i)HLA-DR抗原结合结构域，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有SEQIDNO:2所示的重链CDR1；SEQIDNO:3所示的重链CDR2；和SEQIDNO:4所示的重链CDR3；所述轻链可变区具有SEQIDNO:6所示的CDR1；SEQIDNO:7所示的轻链CDR2；和SEQIDNO:8所述的CDR3；ii)跨膜结构域；和iii)细胞内信号转导结构域，其在抗原与HLA-DR抗原结合结构域结合时导致T细胞活化。在一些实施方式中，HLA-DRCAR包含：1)HLA-DR抗原结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与SEQIDNO:1所示序列80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同性的氨基酸序列；所述轻链可变区具有与SEQIDNO:5所示序列80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同性的氨基酸序列；ii)跨膜结构域；和iii)细胞内信号转导结构域，其在抗原与HLA-DR抗原结合结构域结合时导致T细胞活化。在一些实施方式中，HLA-DRCAR还包含T细胞受体-ζ(TCR-ζ)的胞内结构域。在一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中，所述CAR包含HLA-DR抗原结合结构域，其中所述T细胞与对象是自体同源的，并且其中所述HLA-DR抗原结合结构域以低亲和力结合来自所述对象的T细胞。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170221 US 62/461,6321.一种包含嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中，所述CAR包含HLA-DR抗原结合结构域，其中所述T细胞与对象是自体同源的，并且其中所述HLA-DR抗原结合结构域以低亲和力结合来自所述对象的T细胞。


2.如权利要求1所述的T细胞，其中，所述HLA-DR抗原结合结构域是MVR-scFv或其变体。


3.如权利要求1或2所述的T细胞，其中，所述HLA-DR抗原结合结构域包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区具有与SEQIDNO:1中所示序列至少90％相同的氨基酸序列，而所述轻链可变区具有与SEQIDNO:5中所示序列至少90％相同的氨基酸序列。


4.如权利要求1-3中任一项所述的T细胞，其中，所述CAR还包含T细胞受体-ζ(TCR-ζ)的胞内结构域。


5.如权利要求1-4中任一项所述的T细胞，其中，所述CAR还包含CD8α跨膜结构域和/或4-1BB信号转导结构域。


6.如权利要求1-5中任一项所述的T细胞，其中，所述T细胞对B细胞具有杀伤功效，其比T细胞对EBVLCL的杀伤功效低2倍或3倍。


7.一种药物组合物，其包含：权利要求1-6中任一项所述的T细胞；和药学上可接受的运载体。


8.一种治疗癌症的方法，其包括：
向对象给予包含或递送权利要求1-6中任一项所述的T细胞的组合物。


9.一种产生自体同源遗传工程改造T细胞的方法，其包括：
(a)获得HLA-DR抗原结合结构域，其中所述HLA-DR抗原结合结构域以低亲和力结合来自对象的HLA-DR，和
(b)在获自所述对象的T细胞中表达包含所述HLA-DR抗原结合结构域的嵌合抗原受体(CAR)，从而产生自体同源工程改造T细胞。


10.一种制备自体同源遗传工程改造T细胞的方法，其包括：
提供或获得HLA-DR抗原结合结构域与来自对象的T细胞结合的分析；和
如果结合小于阈值，那么工程改造来自所述对象的T细胞以表达包含HLA-DR抗原结合结构域的CAR。


11.如权利要求9或10所述的方法，其中，所述HLA-DR抗原结合结构域是MVR-scFv或其变体。


12.如权利要求9-11中任一项所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：权炳世，韩忠勇，
申请(专利权)人：优特力克斯有限公司，国家癌症中心，
类型：发明
国别省市：韩国;KR