评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法、检测装置及检测试剂盒制造方法及图纸

提供一种评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法，藉由检测个体的体外生物样品以执行。所述方法包含检测体外生物样品中是否存在非结构蛋白质1，得到第一检测结果；检测体外生物样品中是否存在复合物，得到第二检测结果，其中复合物包含非结构蛋白质1与凝血酶，或是包含非结构蛋白质1与凝血酶原；及藉由第一检测结果及第二检测结果评估个体登革热病毒的感染严重程度。还提供一种用于评估个体的登革热病毒感染严重程度的检测装置及检测试剂盒。

Methods, detection devices and detection kits for assessing the severity of dengue virus infection in individuals

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法、检测装置及检测试剂盒
本专利技术是关于一种评估个体的登革热病毒感染严重程度(severity of dengue virus infection)的方法。本专利技术也关于一种用于评估个体的登革热病毒感染严重程度的检测装置(detection device)及检测试剂盒(detection kit)。
技术介绍
登革热(dengue fever)是一种经由登革热病毒(dengue virus，DENV)的感染所引起的蚊媒热带病(mosquito-borne tropical disease)。依据世界卫生组织(World Health Organization，WHO)所发布的登革热的临床处理手册(Handbook for Clinical Management of Dengue)，感染登革热病毒的病患可依严重程度(severity)而区分为下列三群：(1)A群(group A)病患，其特征为不具有警示症状(warning signs)，例如不具有腹部疼痛或压痛(abdominal pain or tenderness)、持续性呕吐(persistent vomiting)、临床体液蓄积(clinical fluid accumulation)或黏膜出血(mucosal bleed)；(2)B群(group B)病患，其特征为具有上述警示症状；及(3)C群(group C)病患，其特征为严重血浆渗漏(severe plasma leakage)而造成休克(shock)及体液蓄积并呼吸窘迫(respiratory distress)、严重出血(severe bleeding)或严重器官损伤(severe organ impairment)。登革热病毒是一种黄病毒科(Flaviviridae)、黄病毒属(Flavivirus)的单股正链RNA病毒(single positive-stranded RNA virus)，依据抗原性(antigenicity)的不同主要可区分为四种血清型(serotype)，包括DENV-1、DENV-2、DENV-3及DENV-4。受到登革热病毒感染的个体会出现口鼻出血(mouth and nose bleeding)、头痛(headache)、呕吐(vomiting)、红疹(rash)及肌肉与关节疼痛(muscle and joints pain)等症状，严重者甚至会产生止血异常(abnormal hemostasis)、登革出血热(dengue hemorrhage fever，DHF)及登革热休克综合征(dengue shock syndrome，DSS)。因此，防治登革热已成为本领域的研究人员所重视的课题。登革热病毒的基因组(genome)包括大约11,000个碱基(base)而可编码衣壳蛋白C(capsid protein C)、膜蛋白M(membrane protein M)及包膜蛋白E(envelope protein E)等三种结构蛋白质(structural protein)及非结构蛋白质1(NS1)、非结构蛋白质2A(NS2A)、非结构蛋白质2B(NS2B)、非结构蛋白质3(NS3)、非结构蛋白质4A(NS4A)、非结构蛋白质4B(NS4B)及非结构蛋白质5(NS5)等七种非结构蛋白质(nonstructural protein，NS)，其中非结构蛋白质仅在受感染的宿主细胞中发现到。已有研究指出，非结构蛋白质1(NS1)在登革热病毒复制中扮演重要的角色，并且与登革热所引起的症状(例如登革出血热)有密切关联(Libraty D.H.et al.(2002),J.Infect.Dis.,186:1165-1168；Fan J.et al.(2014),Virol.Sin.,29:162-169)。NS1是一种46至50kDa的糖蛋白(glycoprotein)，其在受感染的哺乳动物细胞中表达并且呈分泌型(secreted form)及膜结合型(membrane-associated form)。由于NS1与登革热之间的密切关联性，已有研究人员以NS1作为检测个体是否受到登革热病毒感染的重要标记(marker)。例如，有文献报导，检测NS1对于登革热病毒感染的早期诊断是重要的(Badave G.K.et al.(2015),Int.J.Curr.Microbiol.App.Sci.,4:779-784)。目前已知用于检测登革热病毒感染的方法主要是单独地利用抗NS1特异性抗体(anti-NS1specific antibody)，并通过免疫方式进行检测。然而，已知方法中不论是将病毒自病患体内分离，或是藉由反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)来判断感染的病毒类型，都是极为耗时、高成本，且高度依赖实验室器材才能进行的检测手段，应用范围相当狭隘。除此之外，已知的检测方法必须在条件严谨的环境下操作，以免稍有不慎造成污染，影响检测结果。更重要的是，仅单独以NS1为检测标记灵敏度(sensitivity)不足，往往造成误诊或延误治疗等后果。此外，已有研究是利用特异性结合包含NS1与凝血酶(thrombin)的复合物(complex)或是包含NS1与凝血酶原(prothrombin)的复合物的抗体来检测登革热病毒感染。例如，TW I428598 B揭示一种黄病毒科病毒感染的检测方法，藉由检测生物样本是否含有由NS1与凝血酶两种蛋白质或NS1与凝血酶原两种蛋白质所形成的复合物，以判断患者是否感染登革热病毒。US 2016/0363590 A1揭示一种利用如嗅介蛋白4(olfactomedin 4)或NS1的蛋白质标记(protein marker)来早期预测严重性登革热或出血性登革热(hemorrhagic dengue)的方法。在上述的
技术介绍
中是通过检测体外生物样品(in vitro biological sample)中是否存在包含NS1与凝血酶的复合物或是包含NS1与凝血酶原的复合物来判断个体是否有感染登革热病毒。然而，登革热的严重程度存在相当大的差异，最严重者可能会导致死亡。若患者仅得知自己感染登革热病毒而无法进一步了解感染的严重程度，很可能会忽视病况而延误治疗的时机。因此，若能开发出一种通过检测体外生物样品来评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法、检测装置及检测试剂盒，将会对登革热的治疗策略带来突破。
技术实现思路
鉴于已知方法及技术仅能通过检测体外生物样品中是否存在包含NS1与凝血酶的复合物或是包含NS1与凝血酶原的复合物来判断个体是否有感染登革热病毒，而无法快速鉴定患者的登革热病毒感染的严重程度，导致患者忽视病况，甚而延误治疗的时机。在本专利技术中，申请人发现且经由实验证实：依据本专利技术的方法可准确地检测个体的登革热病毒感染而具有高灵敏度及高准确率，且当体外生物样品中同本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法，藉由检测所述个体的体外生物样品以执行，所述方法包含：/n检测所述体外生物样品中是否存在非结构蛋白质1，得到第一检测结果；/n检测所述体外生物样品中是否存在复合物，得到第二检测结果，其中所述复合物包含非结构蛋白质1与凝血酶或是包含非结构蛋白质1与凝血酶原；及/n藉由所述第一检测结果及所述第二检测结果评估所述个体登革热病毒的感染严重程度。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】一种评估个体的登革热病毒感染严重程度的方法，藉由检测所述个体的体外生物样品以执行，所述方法包含：
检测所述体外生物样品中是否存在非结构蛋白质1，得到第一检测结果；
检测所述体外生物样品中是否存在复合物，得到第二检测结果，其中所述复合物包含非结构蛋白质1与凝血酶或是包含非结构蛋白质1与凝血酶原；及
藉由所述第一检测结果及所述第二检测结果评估所述个体登革热病毒的感染严重程度。


如权利要求1所述的方法，其中当所述生物样品中同时存在有所述包含非结构蛋白质1与凝血酶的复合物及所述包含非结构蛋白质1与凝血酶原的复合物当中之一及非结构蛋白质1时，表示所述个体是带有登革热病毒感染的B群病患或带有登革热病毒感染的C群病患。


如权利要求1所述的方法，其中检测所述体外生物样品中是否存在非结构蛋白质1是藉由使用特异性辨识非结构蛋白质1的抗体而进行检测。


如权利要求1所述的方法，其中检测所述体外生物样品中是否存在所述复合物是藉由使用特异性辨识所述复合物的抗体而进行检测。


如权利要求3或4所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。


如权利要求1所述的方法，其中所述生物样品包括下列之一：血液、尿液、唾液及淋巴液。


如权利要求1所述的方法，其中所述个体是哺乳动物。


如权利要求7所述的方法，其中所述哺乳动物是人类。


如权利要求1所述的方法，其中所述非结构蛋白质1是分泌蛋白或膜结合蛋白。
...

【专利技术属性】
技术研发人员：何宗宪，庄咏钧，许博智，郑又玮，刘清泉，叶才明，
申请(专利权)人：何宗宪，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71