一种还原型谷胱甘肽的检测方法技术

一种还原型谷胱甘肽的检测方法，涉及谷胱甘肽。提供简单有效、检测灵敏度高的一种还原型谷胱甘肽的检测方法。以合成的含二硫键的双官能团有机小分子作为连接分子，构建了表面修饰荧光分子的纳米金探针。结合荧光共振能量转移FRET技术和还原型谷胱甘肽能够还原二硫键的性质，实现对还原型谷胱甘肽的检测。与现有方法相比，检测方法简单有效，对还原型谷胱甘肽的检测灵敏度高，所用的试剂都廉价易得，且绿色环保。

A detection method of reduced glutathione

【技术实现步骤摘要】
一种还原型谷胱甘肽的检测方法
本专利技术涉及谷胱甘肽，尤其是涉及一种还原型谷胱甘肽的检测方法。
技术介绍
谷胱甘肽(glutathione,r-glutamylcysteingl+glycine,GSH)作为细胞内含量最丰富的非蛋白硫醇，是目前研究最广泛的小分子硫醇。细胞内大部分(＞95％)的谷胱甘肽以还原型GSH存在，而少部分为氧化型GSSG。生物体内还原型谷胱甘肽含量的异常变化，与阿尔茨海默症、囊性纤维化、肝脏损伤等多种疾病的发生有着密切的关系。因此，研究对还原型谷胱甘肽的检测方法，对疾病诊断、药物治疗等方面有着重要的意义。目前已经开发的对还原型谷胱甘肽的检测方法有高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳(CE)、表面增强拉曼(SERS)法和比色法等。高效液相色谱法(HPLC)和毛细管电泳(CE)对GSH检测的灵敏度高，但耗时长且对仪器有一定的要求。表面增强拉曼(SERS)法和比色法检测时间较短，但是对GSH检测的灵敏度低，检出限一般在μM级别。因此开发一种简单有效、检测灵敏度高的还原型谷胱甘肽检测方法，具有重要的科学意义和临床应用价值本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种还原型谷胱甘肽的检测方法，其特征在于包括以下步骤：/n1)以2-氨基乙硫醇(C

【技术特征摘要】
1.一种还原型谷胱甘肽的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
1)以2-氨基乙硫醇(C2H7NS)和3-巯基丙酸(C3H6O2S)为原料，在H2O2和氨水的参与下，合成两端分别为氨基和羧基的含二硫键的双官能团有机小分子(Linker)，然后异硫氰酸荧光素(FITC)和双官能团有机小分子(Linker)在有机溶剂中反应，生成Linker-FITC，通过离心浓缩，去除多余的反应溶剂；
2)制备纳米金颗粒，加入聚赖氨酸(ε-Polylysine,PLL)静置过夜反应，通过离心除去游离的聚赖氨酸后，加入水重悬，得到表面修饰聚赖氨酸的纳米金(Au@PLL)；
3)通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(sulfo-NHS)反应活化Linker-FITC上的羧基，进而与Au@PLL上的氨基发生缩合反应，经过离心除去体系中未反应的(Linker-FITC)，将沉淀用超纯水重新分散，得到最终用于检测纳米金探针(Au@PLL/Linker-FITC)；
4)不同浓度梯度的GSH与纳米金探针恒温水浴中反应后，取100mL反应体系加入96孔酶标板进行荧光光谱检测，测定得到GSH标准曲线，检出限为1nM。


2.如权利要求1所述一种还原型谷胱甘肽的检测方法，其特征在于在步骤1)中，所述含二硫键的双官能团有机小分子(Linker)的结构式如下：





3.如权利要求1所述一种还原型谷胱甘肽的检测方法，其特征在于在步骤1)中，所述2-氨基乙硫醇(C2H7NS)和3-巯基丙酸(C3H6O2S)的当量比为1︰1；
所述异硫氰酸荧光素(FITC)和双官能团有机小分子(Linker)的当量比为1.2︰1。


4.如权利要求1所述一种还原型谷胱甘肽的检测方法，其特征在于在步骤1)中，所述有机溶剂采用甲醇和三乙胺混合溶液，甲醇和三乙胺的当量比...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵玉芬，王敏凝，蔡华欢，李福来，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35