【技术实现步骤摘要】
一种磺达肝葵钠中间体的合成方法
本申请涉及医药
,特别是涉及一种磺达肝葵钠中间体的合成方法。
技术介绍
磺达肝癸钠(Fondaparinuxsodium),商品名称为是法国SanofiWinthropIndustric研制生产的目前唯一一个化学合成的肝素类寡糖抗凝药物,CAS号为114870-03-0。这是基于肝素与抗凝血酶III(AntithrombinIII,ATIII)特异性结合的作用位点核心五糖的结构而合成的超低分子肝素,结构如下:相比于未分级和低分子量肝素,磺达肝素可以极大地降低肝素诱导的血小板减少症发病率,因此在临床上使用更加安全。然而,黄达肝素的化学合成涉及到不同类型的多个保护基操作和选择性硫酸化,反应步数多,分离纯化困难,导致合成效率较低,如总合成步数多达60步,总产率小于0.1%,这也导致其成为了最贵的肝素类药物,极大地限制了其更为广泛的使用。化学酶法合成,模拟肝素的生物合成途径,兼有化学合成的灵活性和生物酶法的高效性,反应无需保护基操作且区域、立体选择性专一,对于降低磺达肝素的成本以及实现大规模生产具有重要的意义。特别是磺达肝素的三糖中间体,见式(I),含有多硫酸基和艾杜糖醛酸以及还原端的α-甲基苷,是现有磺达肝素生产的主要困难和核心部分。因此,需要对此中间体的合成方法进行开发。申请内容解决的技术问题:本申请需要解决的技术问题是现有技术中反应步数多,分离纯化困难,导致合成效率较低等技术问题,提供一种磺达肝葵钠中间体的合成 ...
【技术保护点】
1.一种磺达肝葵钠中间体的合成方法,其特征在于,反应条件如下:/n
【技术特征摘要】
1.一种磺达肝葵钠中间体的合成方法,其特征在于,反应条件如下:
第一步,从化合物(II)出发,经过糖基转移酶催化引入三氟乙酰氨基葡萄糖糖基供体得到化合物(III):所述化合物(II)为起始反应物,用量为1.2mmol;所述三氟乙酰氨基葡萄糖糖基供体为尿苷二磷酸2-位三氟乙酰胺基葡萄糖糖基供体,用量为1.5mmol;所述糖基转移酶为PmHS2,用量为20μg/mL;所述化合物(II)、尿苷二磷酸2-位三氟乙酰胺基葡萄糖糖基供体与糖基转移酶PmHS2在含有25mmol、pH7.2的Tris和15mmolMnCl2的缓冲溶液中室温下反应15小时,反应通过HPLC进行监测,产物通过C18反相柱分离,产率为90%,得到化合物(III);
第二步,将化合物(III)经过糖基转移酶催化引入葡萄糖醛酸糖基供体,得到化合物(IV):所述葡萄糖醛酸糖基供体为尿苷二磷酸葡萄糖醛酸糖基供体,将1.2mmol化合物(III)、1.5mmol尿苷二磷酸葡萄糖醛酸糖基供体与20μg/mL糖基转移酶PmHS2在含有25mmol、pH7.2的Tris和15mmolMnCl2的缓冲溶液中室温下反应15小时,反应通过HPLC进行监测,产物通过C18反相柱分离,产率为91%,得到化合物(IV);
第三步:重复第一步和第二步,将化合物(IV)经过糖基转移酶PmHS2催化三氟乙酰氨基葡萄糖糖基供体,产率为91%,再经过糖基转移酶PmHS2催化葡萄糖醛酸糖基供体,产率为89%,得到化合物(V);
第四步,将化合物(V)碱性水解脱除三氟乙酰基,用磺酰胺基转移酶NST将氨基磺酰胺化得到化合物(VI):将1.0equiv化合物(V)加入0.1M的氢氧化锂溶液中,在冰水浴下反应2小时,用HPLC检测三氟乙酰基完全脱除后,用10%稀盐酸将反应体系pH调至7.0,再加入pH7.0、50mM的MES溶液50mL,在37℃反应12-15小时,反应产物通过高效液相色谱Q-Sepharose分离得到化合物(VI)0.95g,产率为96%,所述pH7.0、50mM的MES溶液50mL中含有10ug/mL的N-硫酸基转移酶NST和1mM的PAPS;
第五步,将位于化合物(VI)糖链中间位置的葡萄糖醛酸结构通过C5消旋酶进行糖环5位的消旋,然后用2-氧-硫酸转移酶将糖醛酸2-位磺酸化得到化合物(VII):将0.95g、0.87mmol化合物(VI)溶解在含有0.2mM的氯化钙、10μg/mLC5消旋酶、10μg/mL2-氧-硫酸转移酶和50mM、pH7.0的MES磷酸缓冲溶液100mL中,在37℃下反应2小时,反应产物通过高效液相色谱Q-Sepharose分离得到化合物(VII)0.82g,85%产率;
第六步,将化合物(VII)用6-氧-硫酸转移酶-1(6-OST-...
【专利技术属性】
技术研发人员:林蕾,张幸,张立慧,宋萍,黄和,
申请(专利权)人:南京师范大学,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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