一种细点圆趾蟹下脚料抗菌肽的制备方法技术

本发明专利技术属于抗菌肽技术领域。本发明专利技术公开了一种细点圆趾蟹下脚料抗菌肽的制备方法，其包括前处理、酶解、酶解后处理和提纯等步骤，其中提纯步骤中依次采用C18固相萃取柱、葡聚糖凝胶柱和半制HPLC色谱柱对细点圆趾蟹下脚料酶解产物中抗菌肽进行分离提纯，制得细点圆趾蟹下脚料抗菌肽。本发明专利技术中细点圆趾蟹下脚料抗菌肽的制备方法工艺简单且成本较低；采用C18固相萃取柱、葡聚糖凝胶柱和半制备HPLC分离纯化对细点圆趾蟹下脚料酶解产物中抗菌肽富集分离，操作方便且抗菌肽纯度较高、易于工业化生产，所制备的抗菌肽的抑菌效果较强。

【技术实现步骤摘要】
一种细点圆趾蟹下脚料抗菌肽的制备方法
本专利技术涉及抗菌肽
，尤其是涉及一种细点圆趾蟹下脚料抗菌肽的制备方法。
技术介绍
抗菌肽是一类分子量较小，一般分子量为2000～7000Da，由12～50个氨基酸残基组成，结构较为松散，具有抗菌活性。从第一个不具有完全意义上的抗菌肽Gramicidin被Hotchkiss发现以来，御素、天蚕素、蛙皮素等抗菌肽相继被发现。近十几年来，抗菌肽的功能作用逐渐受到关注。到现在为止，已经有超过5000多种抗菌肽被发现并分离鉴定，且研究数量每年都在快速增加。抗菌肽具有热稳定性、光谱抗菌和不产生耐药性等优点，有望取代抗生素成为一种新型的细菌抑制剂。近年来，随着海洋资源的衰退与快餐业的高速发展，新的蛋白资源开发迫在眉睫，低值细点圆趾蟹(Ovalipespunctatus)开发利用逐渐进入水产加工者的视野。细点圆趾蟹经蒸煮、人工挑取蟹螯和头胸部的大块蟹肉，再加工成冷冻蟹肉罐头和蟹肉糜。由于细点圆趾蟹具有个头小、肌肉组织松散等特点，加工过程中产生许多含肉下脚料，包括蟹螯、头胸部和腹部残留蟹肉以及难以加工的附肢和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细点圆趾蟹下脚料抗菌肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：/na）前处理：将细点圆趾蟹下脚料粉碎，然后进行脱脂处理、干燥粉碎后制得脱脂下脚料；/nb）酶解：将脱脂下脚料加入水制得混合物，液料比为3～5：1，然后向其中加入0.3～0.4wt% ProteAE peptidase在45～55℃酶解处理4～5小时，制得酶解液；/nc）酶解后处理：酶解液灭酶，然后离心处理得到上清液A，将上清液A蒸发浓缩并冷冻干燥制得抗菌肽粗品；/nd）提纯：收集合并具有抑菌活性的洗脱液，再用葡聚糖凝胶色谱进行分离纯化，收集合并具有抑菌活性的洗脱峰，最后将具有抑菌活性肽真空浓缩后再经C18色谱柱进行分离纯化，收...

【技术特征摘要】
1.一种细点圆趾蟹下脚料抗菌肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
a）前处理：将细点圆趾蟹下脚料粉碎，然后进行脱脂处理、干燥粉碎后制得脱脂下脚料；
b）酶解：将脱脂下脚料加入水制得混合物，液料比为3～5：1，然后向其中加入0.3～0.4wt%ProteAEpeptidase在45～55℃酶解处理4～5小时，制得酶解液；
c）酶解后处理：酶解液灭酶，然后离心处理得到上清液A，将上清液A蒸发浓缩并冷冻干燥制得抗菌肽粗品；
d）提纯：收集合并具有抑菌活性的洗脱液，再用葡聚糖凝胶色谱进行分离纯化，收集合并具有抑菌活性的洗脱峰，最后将具有抑菌活性肽真空浓缩后再经C18色谱柱进行分离纯化，收集合并具有抑菌活性的洗脱峰，制得细点圆趾蟹下脚料抗菌肽。


2.根据权利要求1所述的一种细点圆趾蟹下脚料抗菌肽的制备方法，其特征在于：
所述步骤a）前处理具体为，将细点圆趾蟹下脚料粉碎，然后将下脚料按液料比4～6：1在无水乙醇和正己烷混合溶剂中脱脂处理60～90分钟，脱脂处理时温度为45～55℃，抽滤后滤饼在75～85℃下干燥5.5～6.5小时，制得下脚料粉。


3.根据权利要求1所述的一种细点圆趾蟹下脚料抗菌肽的制备方法，其特征在于：
所述步骤b）酶解前先将混合物的pH值调至7.8～8.6并在45～55℃水浴中处理0.5～1.5小时。


4.根据权利要求1所述的一种细点圆趾蟹下脚料抗菌肽的制备方法，其特征在于：
所述步骤c）具体为，将酶解液在90～100℃下灭酶处理10～20分钟，然后经流水冷却至室温，以4000～6000rpm的转速离心处理8～13分钟得到上清液A，将...

【专利技术属性】
技术研发人员：余辉，庄黛娜，陈小娥，方旭波，陈洁，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33