【技术实现步骤摘要】
羧基磁珠偶联修饰的核酸探针及其制备方法和应用
本专利技术属于核酸靶向捕获
，涉及一种羧基磁珠偶联修饰的核酸探针及其制备方法和应用。
技术介绍
结直肠癌是世界第三大恶性肿瘤。据世界卫生组织统计，全世界结直肠癌的年发病率为120万，结直肠癌年死亡率约为60万。在中国，结直肠癌的发病率和死亡率有逐年升高的趋势，据统计每年中国结直肠癌新发病例约37万，死亡病例接近20万。导致结直肠癌死亡率居高不下的关键因素之一是结直肠癌诊断发现时80％以上已经是中晚期；早期结直肠癌患者手术5年生存率超过90％，中晚期患者手术后5年生存率不足10％。因此结直肠癌早期发现和诊断非常重要。研究表明结直肠癌是基因遗传和表观遗传变异逐渐积累的结果，例如DNA突变和甲基化，这些变异的累积导致正常结肠上皮细胞向癌细胞转化，因此DNA分子诊断对结直肠癌的早期发现具有非常重要的意义。目前SEPT9甲基化检测已经通过FDA和CFDA的批准，用于结直肠癌患者的血液筛查，对于结直肠癌患者的灵敏度超过70％，但是对早期腺瘤的检出率有限；而DAVIDA.AHLQ...
【技术保护点】
1.一种羧基磁珠偶联修饰的核酸探针的制备方法，其包括以下步骤：/n羧基磁珠进行活化获得活化后的羧基磁珠；/n活化后的羧基磁珠与氨基修饰的核酸探针于偶联反应液中共孵育，得到羧基磁珠偶联修饰的核酸探针；/n所述偶联反应液为包含吗啉乙磺酸与N,N-二甲基乙酰胺的混合溶液；/n优选地，所述核酸探针为DNA探针。/n
【技术特征摘要】
1.一种羧基磁珠偶联修饰的核酸探针的制备方法，其包括以下步骤：
羧基磁珠进行活化获得活化后的羧基磁珠；
活化后的羧基磁珠与氨基修饰的核酸探针于偶联反应液中共孵育，得到羧基磁珠偶联修饰的核酸探针；
所述偶联反应液为包含吗啉乙磺酸与N,N-二甲基乙酰胺的混合溶液；
优选地，所述核酸探针为DNA探针。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述吗啉乙磺酸与所述N,N-二甲基乙酰胺的体积比为1:10～10:1；
优选地，所述N,N-二甲基乙酰胺在所述偶联反应液的体积含量为50％～60％；
优选地，所述吗啉乙磺酸的浓度为0.05～0.1M，pH值≥7.0；
优选地，进行偶联反应的温度为22℃～37℃，时间为4～16h；
进一步优选地，进行偶联反应的温度为25℃～30℃，时间为10-12h。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述氨基修饰的核酸探针为伯氨基探针，所述伯氨基探针为核酸探针5’端用伯氨基修饰的一段核酸，长度为20～50bp；
优选地，所述活化的羧基磁珠和所述偶联反应液的体积比为10:100。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，羧基磁珠进行活化的方法为：
将羧基磁珠与活化剂在共孵育体系中进行共孵育，得到活化后的羧基磁珠；
其中，共孵育体系为pH值为4.5～5.5、浓度为0.05-0.1M的吗啉乙磺酸，所述羧基磁珠、所述活化剂、所述共孵育体系的体积比为1:10:10；
优选地，进行共孵育的温度为22℃～37℃，时间为10～60min；
进一步优选地，进行共孵育的温度为25℃～30℃，时间为15-25min。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述活化剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的混合物，或者所述活化剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺的混合物；
优选地，所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔浓度比为9:1；所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺的摩尔浓度比为9:1；
进一步优选地，所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的初始浓度为56.25mM，所述N-羟基琥珀酰亚胺的初始浓度为6.25mM，所述N-羟基硫代琥珀酰亚胺的初始浓度为6.25mM。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，还包括对羧基磁珠偶联修饰的核酸探针采用洗涤液进行洗涤除去多余氨基修饰的核酸探针，并将该羧基磁珠偶联修饰的核酸探...
【专利技术属性】
技术研发人员：成小威，李听，田甜，巴兆粉，张田田，
申请(专利权)人：江苏为真生物医药技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。