一种诱导干细胞定向软骨分化的方法技术

本发明专利技术属于组织工程技术领域，具体涉及一种诱导干细胞定向软骨分化的方法，基于软骨细胞与干细胞的共培养体系，利用共培养体系使软骨细胞与干细胞分工合作，采用腺病毒载体把转化生长因子TGF‑β3导入软骨细胞，经转染的软骨细胞向干细胞提供持续的、局部的和过表达的TGF‑β3，刺激干细胞定向软骨细胞分化，使TGF‑β3不需要外源添加，从而防止生长因子被蛋白酶分解，并避免基因转染过程中对干细胞可能产生的伤害，保持干细胞更高的存活率与更好的软骨分化的能力。另外，将软骨细胞与干细胞共培养的方式，有助于干细胞在软骨细胞条件培养基中进行定向软骨分化，对生长因子的诱导表现得更敏感，更有助于软骨外基质的分泌。

A method of inducing chondrogenic differentiation of stem cells

【技术实现步骤摘要】
一种诱导干细胞定向软骨分化的方法
本专利技术属于组织工程
，具体涉及一种诱导干细胞定向软骨分化的方法。
技术介绍
关节软骨具有缓冲机械冲击，减轻关节间摩擦，增加关节适应性等作用，其轻微的损伤将导致骨关节炎（OA），由于关节软骨是无神经，无血管的组织，因此，其自我修复能力非常差。目前修复软骨损伤的方法有多种，但各有缺陷，都不能很好的解决这个难题。而且，软骨细胞被细胞外基质包裹，外源性的药物或各种因子都很难对它起作用。因此，关节软骨损伤修复仍是医学难题。近年来，组织工程的快速发展，提出了一些治疗策略，以求能够通过种子细胞（多采用干细胞）、生物材料、细胞因子等的相互作用进行软骨修复。目前，用于传送生长因子以有效诱导干细胞定向软骨分化的常用办法有：1）外源性添加蛋白类生长因子，不过蛋白类的生长因子价格昂贵并且在体内不稳定，容易被蛋白酶分解，缺乏长期稳定性。2）通过设计及制备生物材料，对生长因子进行负载与控释，但负载过程与条件会对大分子生长因子的特性产生一定的影响。3）通过非病毒载体或病毒载体把生长因子的基因导入种子细胞中，从而可持续表达所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诱导干细胞定向软骨分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、构建携带转化生长因子TGF-β3的腺病毒载体，扩增至>10

【技术特征摘要】
1.一种诱导干细胞定向软骨分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、构建携带转化生长因子TGF-β3的腺病毒载体，扩增至>109IFU/mL后冻存备用；
S2、软骨细胞的分离和培养：软骨细胞分离自猪股骨髁软骨，待细胞长至融合度为70-80%时进行细胞传代，以1：3传代，传至3代后冻存备用；
S3、将ATDC5细胞传至3代后冻存备用；
S4、将步骤S1中携带TGF-β3的腺病毒转染到步骤S2中的软骨细胞中；
S5、共培养：将ATDC5细胞和步骤S4中转染后的软骨细胞进行混合，加入海藻酸钠溶液，配置成一定细胞密度的细胞悬液，将该细胞悬液快速打入CaCl2溶液中使其生成细胞凝胶，然后将细胞凝胶置于软骨诱导液中进行培养，直至完成定向软骨分化过程1。


2.根据权利要求1所述的一种诱导干细胞定向软骨分化的方法，其特征在于，所述猪股骨髁软骨为4到8个月大的猪股骨髁软骨。


3.根据权利要求1所述的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚咏嫦，张廷帅，陈汉政，陈艺，张姝江，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院广州呼吸中心，
类型：发明
国别省市：广东;44