一株短波单胞菌2B及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株短波单胞菌2B及其应用，涉及食用菌生物技术领域，该细菌分类命名为短波单胞菌(Brevundimonas sp.)2B，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC No:M 2019638；保藏日期：2019年8月16日；保藏地址：中国武汉武汉大学，将本发明专利技术的细菌应用到促进平菇生长中，菌丝日均长速、单袋产量、菌盖厚度增加，菌丝满袋天数缩短，能够有效促进平菇菌丝生长，缩短平菇的生产周期，且在促进真菌生长的同时，能够有效避免药物残留、环境污染的问题，在有助于将来在商业领域的开发及其利用。

【技术实现步骤摘要】
一株短波单胞菌2B及其应用
本专利技术涉及食用菌生物
，具体涉及一株短波单胞菌2B及其应用。
技术介绍
平菇(Pleurotusostreatus)也称侧耳、糙皮侧耳、蚝菇、黑牡丹菇，是担子菌门下伞菌目侧耳科一种，是相当常见的灰色食用菇，深受广大消费者的喜爱。平菇含丰富的营养物质，每百克平菇中含蛋白质20-23克，并且氨基酸成分、种类齐全。平菇的味道鲜美，原因是其含有许多种氨基酸，能够刺激人的味觉器官产生鲜味的感觉，比单纯的味精所含的一种谷氨酸钠鲜味要好得多，并且也不会引起口渴现象。研究表明，平菇还含有平菇素(蛋白糖)和酸性多糖体等生理活性物质，对健康、长寿、防治肝炎病、防治癌症也有一定的效果；平菇中所含的“蘑菇核糖酸”(MUSHROOm-vrna)，它能强烈地抑制病毒增生，所以常吃平菇等菌类食品，能减少“流感”、肝炎等病毒性感染的疾病，尤其能抵御流行病毒的入侵。平菇是我国栽培量最大、栽培范围最广的食用菌。为了提高平菇的产量，农户一般会采取追肥、覆土或覆草木灰、使用生长调节剂、喷洒杀虫剂等通过化学试剂来增加产量的措施。这些方法虽然能够使产量有所增加，但同时也会导致土壤形状恶化，产品品质下降以及环境污染的问题但是如果利用能够促进真菌生长的促生细菌的生物防治技术，就可以有效避免药物残留、环境污染等问题。所以寻找一种能够促进平菇菌株产量增加且不会造成人体健康危害和环境污染的微生物变得尤为重要。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术所要解决的技术问题是提供一株促进平菇生长的细菌短波单胞菌2B，为适宜的食用菌促生菌；本专利技术所要解决的另一技术问题是提供短波单胞菌2B在促进平菇生长中的应用，以解决现有技术中在促进真菌生长的同时而不能有效避免药物残留、环境污染的问题。为了解决上述问题，本专利技术采用的技术方案为：一株促进平菇生长的细菌，其分类命名为短波单胞菌(Brevundimonassp.)2B，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNo：M2019638；保藏日期：2019年8月16日；保藏地址：中国武汉武汉大学。所述的短波单胞菌2B在促进平菇生长中的应用。所述的应用，短波单胞菌2B与平菇菌株共接种于培养料中。所述的应用，平菇接种量与培养料的重量比为1:80。所述的短波单胞菌2B的发酵液在促进平菇生长中的应用。所述的应用，发酵液中短波单胞菌2B的浓度为1.0～2.0×108cfu/mL。所述的短波单胞菌2B的菌悬液在促进平菇生长中的应用。有益效果：与现有技术相比，本专利技术从子实体、菌袋、覆土栽培食用菌的土样中筛选分离并鉴定了一株促进平菇生长的细菌短波单胞菌2B，将该细菌的发酵液与平菇菌株共接种于培养料中，加菌组的长满菌丝袋天数、菌丝日均长速、单袋产量、菌盖厚度均有明显提高，能够有效缩短平菇的生产周期，增加了平菇生产的经济效益。附图说明图1是筛选出来的菌与平菇菌株在平板上共培养7d后的结果图；左图上是细菌菌液组，左图下是对照组；右图上是细菌菌液过滤液组，右图下是对照组；图2短波单胞菌液对平菇菌丝长度的影响结果图；图3是短波单胞菌过滤液对平菇菌丝长度的影响结果图；图4是根据16srDNA序列构建的系统进化树结果图；图5是短波单胞菌对平菇长满菌丝袋天数的影响结果图；图6是短波单胞菌对菌丝生长日均长速的影响结果图；图7是短波单胞菌对平菇单袋产量的影响结果图；图8是短波单胞菌对菌盖厚度的影响结果图。具体实施方式下面结合具体实施例进一步说明本专利技术，但这些实施例并不用来限制本专利技术。实施例11)样品采集与保存于山东泰安祝阳镇食用菌科技产业园种植基地随机采集不同子实体、菌袋、覆土栽培食用菌的土样，所有土样采集采用无菌操作，采集后分别放入无菌袋，-20℃保存。2)细菌的纯化与保存准确称取待测土样1g，放入装有9mL无菌水的已灭过菌试管中，置摇床上振荡20min，摇床28℃，转速170r/min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1mL无菌吸管，吸取10-1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吹吸菌液，混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吹吸均匀，即成10-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6等一系列稀释菌液。将之前配好NA培养基融化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取1mL菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上(每个编号设三个重复)。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。将涂抹好的平板平放于桌上20-30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，28℃恒温培养。本实施例选取10-4、10-5、10-6三个梯度涂抹平板。通过梯度稀释法，共筛选得到63个单菌落，挑取单个菌落并划线分离，纯化培养，直至用显微镜涂片染色检查为单一微生物为止，同时将初筛到的细菌进行相应编号并保存至28℃恒温培养，24h后观察。3)促生细菌的筛选a.PDA平板实验，鉴定细菌活体本身是否有促生功能将初筛分离纯化后保存的菌株接入NA液体培养基的锥形瓶中，28℃，180r/min，摇床培养48h，得到培养好的饱和细菌菌液，用移液枪按无菌操作要求将细菌菌液各取0.2mL于加富PDA平板(葡萄糖20g、马铃薯200g、蛋白胨10g、酵母膏3g、琼脂15-20g、水1000mL，pH7.0)，用涂布器均匀涂抹，用打孔器取平菇菌丝1cm，放于涂好菌的平板中央。对照组加入0.2mL的无菌水，接种后置于28℃培养箱培养，每天观察菌丝的生长状况，培养7d时结果如图1所示，加菌组1菌丝长度3.6cm，加菌组2菌丝长度3.4cm，加菌组3菌丝长度3.5cm，平均加菌组菌丝长度3.5cm，对照组菌丝长度3.1cm。b.细菌代谢物的促生功能取培养好的细菌菌液20mL，通过细菌过滤膜(0.22μm)加入到无菌锥形瓶中，得到菌悬液，移液枪取0.2mL的菌悬液加入PDA平板，用打孔器取平菇菌丝，放于涂好菌悬液的平板中央。试验组做3组平行试验，对照组为1组加入0.2mL的无菌水，接种后置于28℃培养箱培养，每天观察菌丝的生长状况，培养7d时结果如图1所示。待菌丝生长良好后，与对照组作比较，取较对照组生长更为旺盛的菌即为有促生功能的细菌，该细菌对于平菇菌丝长度的影响如图2、3所示。加菌组1菌丝长度为4.0cm，加菌组2菌丝长度为3.9cm，加菌组3菌丝长度为3.6cm，平均菌丝长度为3.8cm，对照组菌丝长度为2.8cm。4)平菇促生细菌的生物学特征及生理生化结果采用形态特征、革兰氏染色、3％KOH溶解性试验、芽孢染色等方法对平菇促生细菌进行生物学特征观察。形态特征为：菌体短杆状，菌落椭圆形、表面光滑、不透明本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株促进平菇生长的细菌，其分类命名为短波单胞菌(Brevundimonas sp.)2B，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC No：M 2019638；保藏日期：2019年8月16日；保藏地址：中国武汉武汉大学。/n

【技术特征摘要】
1.一株促进平菇生长的细菌，其分类命名为短波单胞菌(Brevundimonassp.)2B，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNo：M2019638；保藏日期：2019年8月16日；保藏地址：中国武汉武汉大学。


2.权利要求1所述的短波单胞菌2B在促进平菇生长中的应用。


3.权利要求2所述的应用，其特征在于，短波单胞菌2B与平菇菌株共接种于培养料中...

【专利技术属性】
技术研发人员：李冠喜，张璐，于颖媛，焦玉茹，李洁，李慧琳，程振豪，郭帅，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：山东;37