发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum 9-4及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum 9‑4及其应用，该菌株于2019年8月12日保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏号为CCTCC NO：M 2019619。所述发酵乳杆菌是从广西壮族地区传统食物生榨米粉中筛选出的具有降嘌呤能力的乳酸菌菌株，该菌株在MRS琼脂培养基上生长良好，耐酸性强，在pH为1.5条件下，3h后存活率为34％；在3％浓度胆盐下可以缓慢生长，存活率为65％。该菌株具有良好的耐酸，耐胆盐，降嘌呤能力，适用于低嘌呤食品及降嘌呤功能发酵食品的生产。

Lactobacillus fermentum 9-4 and its application

【技术实现步骤摘要】
发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4及其应用
本专利技术涉及微生物
，尤其涉及功能性乳酸菌开发及其制品生产开发领域。具体是一种发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4及其应用。
技术介绍
痛风是一种尿酸盐沉积所致的关节病，与嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直接相关。痛风患者常在夜间出现关节剧烈疼痛，疼痛持续几天或几周不等，易导致关节红肿、发炎。关节水肿后组织变软，使活动受限，最终影响日常生活。痛风常伴发肾脏病变、高脂血症、高血压病、糖尿病、动脉硬化及冠心病等，因此，痛风是一种严重危害人类健康的代谢性疾病。流行病学调查显示，我国痛风的发病率高于世界平均水平，高尿酸血症人群数量庞大。近年随着生活水平提高、生活节奏加快等因素，痛风及高尿酸血症患者数量呈显著上升趋势。尿酸是人类嘌呤代谢的终产物，人体内尿酸主要来源于机体自身合成和摄入食物中的核苷酸分解。目前痛风治疗方法主要为药品治疗和食物预防。长期药物治疗易带来副作用，如肝肾损害、胃肠道症状、肌肉与神经病变等。食物预防指尽可能减少外源性嘌呤类物质的摄入，降低体内的嘌呤含量，是抑制尿酸形成的主要方法之一。但由于各种食物中嘌呤类物质含量难以精确定论，通过严格饮食控制嘌呤摄入较为困难。同时严格控制饮食意味着食物风味与饮食习惯的改变，易造成营养不均衡，不利于健康。因此发展降嘌呤技术，解决高营养与低嘌呤的矛盾，是制造低嘌呤食品、预防和治疗痛风及高尿酸血症的关键。乳酸菌是一种安全的食品级微生物，在预防与治疗代谢调控类疾病中发挥着重要作用。近年来，关于乳酸菌降嘌呤、降尿酸的文献报道主要有：中南大学蒋云生等人通过基因工程手段，构建了一株产尿酸氧化酶的乳酸乳球菌，该菌株于2009年申请专利并获得授权(CN101451146)。日本株式会社明治于2015年分别申请了抑制嘌呤吸收的乳酸菌及其用途(CN106460029A)和具有嘌呤摄取能力的乳酸菌及其用途的专利技术专利(CN107208029A)，并于2017年获得授权。崔伟东等人从发酵食品中分离鉴定了一株植物乳杆菌，并通过动物实验证明其具有降血尿酸水平，提高尿素氮、肌酐水平，抑制血清总黄嘌呤氧化酶活性功能(CN108048368A)。此外，朱珺等人从新疆传统酸奶中分离并鉴定了一株发酵乳杆菌，并证实其具有体外降鸟苷能力，鸟苷浓度为1mM时，鸟苷降解率为63.06％，动物实验表明其具有降血尿酸功能(CN110079476A)。然而有必要进一步开发新型耐酸、耐胆盐能力更好的将嘌呤乳酸菌。生榨米粉是广西壮族特色的一种传统发酵食物，其中蕴含着丰富的乳酸菌资源。选择生榨米粉作为分离培养乳酸菌的原料来源，从中筛选出新型具有降嘌呤能力的乳酸菌，将其应用于功能性食品领域，对预防与治疗痛风和高尿酸血症等代谢调控类疾病具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4及其应用，该菌株具有降低嘌呤的能力。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株，CCTCCNO：M2019619，其具有降低嘌呤的能力。所述的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株于2019年8月12日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2019619。保藏地址：中国武汉武汉大学。所述保藏编号为CCTCCNO：M2019619的菌株9-4的16SrDNA序列如序列表中SEQINNO:1所示。所述的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株其菌落特征为：菌落表面光滑，呈白色或乳白色的单个菌落，显微镜下呈圆形或椭圆形，无芽孢，革兰氏染色呈阳性。所述的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株是从壮族传统食物生榨米粉中筛选出的具有高降嘌呤能力的乳酸菌菌株。所述的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株的筛选方法，包括如下步骤为：(1)使用MRS培养基对广西南宁壮族传统美食生榨米粉中的微生物进行培养，挑选特征菌落并分离、纯化，获得纯化候选菌株；(2)以嘌呤代谢途径中2个关键酶，尿酸氧化酶和黄嘌呤氧化酶的催化活力为检测指标，筛选出具有尿酸氧化酶、黄嘌呤氧化酶酶活的菌株；(3)进行16SrDNA测序，通过NCBI与RDP数据库Blast比对，鉴定并保存乳酸菌菌株；(4)以静息细胞代谢核苷能力为检测指标，利用高效液相色谱法对乳酸菌的降嘌呤能力进行复筛，筛选出核苷代谢能力较高的菌株；通过步骤(1)-(4)得到具有高核苷代谢能力的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株，其对肌苷降解率为50.24％，对鸟苷降解率为61.16％。所述发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株，通过耐酸、耐胆盐试验表明其对酸和胆盐有一定的耐受能力。在pH为1.5时，3h后存活率为34％；在3％浓度胆盐下可以缓慢生长，存活率为65％。所述发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株，在MRS培养基上生长良好，菌落为乳白色，表面光滑，边缘齐整，不透明。对菌体形态进行镜检，革兰氏染色呈紫色，杆状。所述发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株，采用细菌通用引物16SrDNA的27F/1492R对其基因组DNA为进行PCR扩增并测序，获得1480bp的基因序列，如SEQUENCELISTING所示。将该基因序列输入NCBI进行比对，其与发酵乳杆菌LactobacillusfermentumstrainM6相似率达99.86％，可初步鉴定该菌株为发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum。所述的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株在制备发酵食品中的应用。所述的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株在制备低嘌呤食品中的应用。所述的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株在制备发酵乳制品中的应用。一种降解嘌呤的方法是将所述发酵乳杆菌9-4细胞加入到含有嘌呤的体系中。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：首次从广西壮族传统生榨米粉中筛选出具有降嘌呤功能的发酵乳杆菌，作为传统食品来源的益生菌，更加适合用于发酵食品、功能食品制备。本专利技术提供的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株同时具有包括黄嘌呤氧化酶和尿酸氧化酶在内的嘌呤代谢酶，能够高效地将核苷降解为次黄嘌呤及黄嘌呤，并将嘌呤最终代谢为尿囊素，有效减少机体内尿酸的生成与积累。因此，该菌株应用于功能性食品领域，用于生产降嘌呤益生菌和低嘌呤食品，对预防、改善和治疗痛风以及高尿酸血症疾病具有重要意义。与已发现的降嘌呤发酵乳杆菌相比，本专利技术提本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum 9-4菌株，CCTCC NO：M 2019619，其具有降低嘌呤的能力。/n

【技术特征摘要】
1.发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株，CCTCCNO：M2019619，其具有降低嘌呤的能力。


2.根据权利要求1所述的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株，其特征在于，该菌株于2019年8月12日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2019619。


3.根据权利要求1所述的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株，其特征在于，所述保藏编号为CCTCCNO：M2019619的菌株9-4的16SrDNA序列如序列表中SEQINNO:1所示。


4.根据权利要求1所述的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株，其特征在于，其菌落特征为：菌落表面光滑，呈白色或乳白色的单个菌落，显微镜下呈圆形或椭圆形，无芽孢，革兰氏染色呈阳性。


5.根据权利要求1所述的发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum9-4菌株，是从壮族传统食物生榨米粉中筛选出的具有高降嘌呤能力的乳酸菌菌株。


6.根据权利要求1所述的发酵乳杆菌Lactobacill...

【专利技术属性】
技术研发人员：王成华，卢良华，刘田甜，张冉，朱春燕，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：广西;45