一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1及其在促进袖珍菇生长中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1及其在促进袖珍菇生长中的应用，涉及食用菌生物技术领域，该纺锤形赖氨酸芽孢杆菌，分类命名为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)CA1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2019年8月16日，保藏编号CCTCC No:M 2019636，保藏地址：中国武汉武汉大学。将该细菌的发酵液添加到袖珍菇的培养料中，菌丝日生长量、菌盖长度、出菇产量均有明显提高，能够有效缩短袖珍菇的生产周期；同时由于促生细菌来源于袖珍菇根际细菌，利用促生细菌与袖珍菇的互作关系可有效减少辅料用量，具有高效、安全、无毒的特点。

A spindle lysine Bacillus strain CA1 and its application in promoting the growth of Pleurotus ostreatus

【技术实现步骤摘要】
一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1及其在促进袖珍菇生长中的应用
本专利技术涉及食用菌生物
，具体涉及一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1及其在促进袖珍菇生长中的应用。
技术介绍
袖珍菇：又名紫孢侧耳，别名小平菇、姬菇、黄白平菇，美味侧耳。秀珍菇子实体形态优美，菌盖厚实，质地脆嫩，味道鲜美，颇受消费者欢迎，是今后平菇生产的一个优良换代品种。含粗蛋白、碳水化合物、纤维、硫胺素、核黄素、烟酸、钙、铁、钾、钠、磷。其中蛋白质的含量，比目前国内栽培的平菇、双孢蘑菇、香菇和草菇都高，而且人体八种必需氨基酸全都具备，其含量占所有氨基酸总量的35％以上。所以经常食用袖珍菇，可以增强人体健康。另据最近研究证实，袖珍菇含有的一些生理活性物质，具有诱发干扰素的合成，提高人体免疫功能，具有防癌、抗癌的作用。袖珍菇含脂肪、淀粉很少，还有降低胆固醇的作用，是糖尿病人和肥胖症患者的理想食品、健康食品、安全食品。虽然袖珍菇生产有栽培方法简单的特点，但是随着市场需求的多样化和健康生活理念的普及，市场对袖珍菇产量需求逐年增加。为了提高袖珍菇的产量，农户一般会采取追肥、覆土或覆草木灰、使用生长调节剂、喷洒杀虫剂等通过化学试剂来增加产量的措施。这些方法虽然能够使产量有所增加，但同时也会存在农药残留现象给消费者带来损害。食用菌栽培料一般经巴氏杀菌、堆积发酵处理或采用生料，因此，培养料中存在着多种微生物，有些微生物对食用菌的生长发育具有促进作用，利用食用菌与促生细菌的互作关系可有效减少辅料用量，提高食用菌生产经济和社会效益，有效避免药物残留、环境污染等问题。所以寻找一种能够促进袖珍菇产量增加且不会造成人体健康危害和环境污染的微生物及其菌剂显得尤为重要。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术所要解决的技术问题是提供一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1，能够对袖珍菇的生长发育起到促进作用；本专利技术所要解决的另一技术问题是提供纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1在促进袖珍菇生长中的应用，以解决现有技术中化学肥料促生效率低，效果不明显，农药残留，污染环境的问题。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种纺锤形赖氨酸芽孢杆菌，其分类命名为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusfusiformis)CA1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2019年8月16日，保藏编号CCTCCNo:M2019636，保藏地址：中国武汉武汉大学。所述的纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1在促进袖珍菇生长中的应用。所述的应用，纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1以发酵液的方式加入袖珍菇的培养料中。所述培养料干燥状态下按照重量比例由以下原料组成：杂木屑55％、甘蔗渣40％、黄豆粉2％、石膏2％、过磷酸钙1％。所述培养料中纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1的活菌数为1×104～107cfu/g。所述发酵液由以下步骤制成：1)将纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1菌株接种于NA培养基中，28℃培养3～4d，得到活化的菌株；2)将步骤1)活化的菌株接种于NA液体培养基中，在28℃、180r/min的条件下培养48h，制得细菌发酵液。所述的纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1发酵液在促进袖珍菇生长中的应用。有益效果：与现有技术相比，本专利技术从子实体、菌袋、覆土栽培食用菌的土样中筛选分离并鉴定了一种促进袖珍菇生长的细菌纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1，将该细菌的发酵液添加到袖珍菇的培养料中，菌丝日生长量、菌盖长度、出菇产量均有明显提高，能够有效缩短袖珍菇的生产周期；同时由于促生细菌来源于袖珍菇根际细菌，利用促生细菌与袖珍菇的互作关系可有效减少辅料用量，提高袖珍菇的生产经济和社会效益，具有高效、安全、无毒的特点。附图说明图1是纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1细菌活体本身与袖珍菇菌株在平板上共培养5d后的结果图；左图是细菌菌液组，右图是无菌水对照组；图2是纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1细菌代谢物与袖珍菇菌株在平板上共培养5d后的结果图；左图是细菌菌液过滤液组，右图是无菌水对照组；图3是纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1的革兰氏染色镜检图；图4是纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1对袖珍菇子实体产量的影响图；图5是纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1的系统进化树图。具体实施方式下面结合具体实施例进一步说明本专利技术，但这些实施例并不用来限制本专利技术。实施例11)样品采集与保存于济宁市常生源菌业有限公司随机采集袖珍菇子实体、菌袋、覆土栽培食用菌的土样，采用无菌操作取样，取样后分别放入无菌袋，-20℃保存。2)细菌的纯化与保存准确称取待测土样1g，放入装有9mL无菌水的已灭过菌试管中，置摇床上28℃，170r/min，振荡20min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1mL无菌吸管，吸取10-1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吹吸菌液使其混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吹吸均匀，即成10-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6等一系列稀释菌液。取10-4、10-5、10-6三个梯度涂布平板，用无菌吸管吸取1mL菌液对号接种在不同稀释度编号的NA培养基上(每个编号设三个重复)。再用无菌涂布棒将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌涂布棒，更换稀释度时需将涂布棒灼烧灭菌。将涂抹好的平板平放于桌上20-30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒置，28℃恒温培养24h。通过梯度稀释法，从根际土样中共分离得到78个细菌分离物，将其分别挑至NA培养基(牛肉膏5g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂15-20g、水1000mL，pH7.2-7.4)上进行划线操作，置于28℃下培养3-4d。3)增菌培养将初筛分离纯化后保存的菌株接入NA液体培养基(牛肉膏5g、蛋白胨10g、氯化钠5g、水1000mL，pH7.2-7.4)的锥形瓶中，于28℃、180r/min摇床中培养48h，得到培养好的细菌菌液；4)促生细菌的筛选a.细菌活体本身的促生功能用移液枪按无菌操作要求将细菌菌液各取0.2mL于加富培养基(葡萄糖20g、马铃薯200g、蛋白胨10g、酵母膏3g、琼脂15-20g、水1000mL，pH7.0)中，用涂布棒均匀涂抹，用打孔器取1厘米袖珍菇菌丝，放于涂好细菌的平板中央。对照组加入0.2mL的无菌水，接种后置于28℃培养箱培养，观察菌丝生长状况；培养5d时结果如图1所示。b.细菌代谢物的促生功能取培养好的细菌菌液20mL，通过过滤器(0.22μm)加入到无菌锥形瓶中，得到菌悬液，移液枪取0.2mL的菌悬液加入加富培养基中并涂布，用打孔器取袖珍菇菌丝，放于涂好菌悬液的平板中央。对照组加入0.2mL的无菌水，接种后置于28℃培养箱培养，观察菌丝的生长状况，培养5d时结果如图2所示。待菌丝本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌，其分类命名为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)CA1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2019年8月16日，保藏编号CCTCC No:M 2019636，保藏地址：中国武汉武汉大学。/n

【技术特征摘要】
1.一株纺锤形赖氨酸芽孢杆菌，其分类命名为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusfusiformis)CA1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2019年8月16日，保藏编号CCTCCNo:M2019636，保藏地址：中国武汉武汉大学。


2.权利要求1所述的纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1在促进袖珍菇生长中的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述纺锤形赖氨酸芽孢杆菌CA1以发酵液的方式加入袖珍菇的培养料中。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述培养料干燥状态下按照重量比例由以下原料组成：杂木屑55％...

【专利技术属性】
技术研发人员：李冠喜，李洁，张璐，于颖媛，张鹤露，李慧琳，卢茹杰，郭帅，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：山东;37