长效肾上腺髓质素衍生物制造技术

本发明专利技术提供一种长时间持续作用的新型肾上腺髓质素衍生物，其能够维持肾上腺髓质素的药理作用并实质性地抑制不良副作用。本发明专利技术的一个实施方式涉及由式(I)表示的化合物或其盐，或者它们的水合物。式(I)中，A为免疫球蛋白的Fc区域，B为由肾上腺髓质素或具有肾上腺髓质素活性的其修饰物衍生的肽部分，L为由具有任意氨基酸序列的肽组成的连接基团。本发明专利技术的另一个实施方式涉及用式(I)表示的化合物的制造方法，以及含有该化合物作为有效成分的药物。A‑L‑B (I)。

Long acting adrenomedullin derivative

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】长效肾上腺髓质素衍生物
本专利技术涉及一种长效肾上腺髓质素衍生物。
技术介绍
肾上腺髓质素(adrenomedullin，下文中也记载为“AM”)是在1993年从嗜铬细胞瘤组织分离和鉴定的生物活性肽(非专利文献1)。发现之初，已证实AM能够发挥很强的扩张血管的降压作用。例如，专利文献1记载了具有降血压作用的包含人AM氨基酸序列的肽。通过随后的研究表明，AM能够发挥心血管保护作用、抗炎症作用、血管生成作用及促进组织修复作用等多种药理作用。此外，为了将AM的药理作用应用在疾病治疗中，对于各种疾病患者进行了AM的给药研究。其中，AM作为炎症性肠病、肺动脉高压症、周围血管疾病或急性心肌梗塞的治疗药的有用性受到期待。例如，专利文献2记载了一种含有以下物质作为有效成分的非细菌性的炎症性肠病的预防或治疗剂：具有抑制非细菌性炎症的活性的肾上腺髓质素或其衍生物，或者是具有抑制非细菌性炎症的活性的它们的盐。专利文献3记载了一种预防或治疗方法，其是对需要预防或治疗的难以使用类固醇制剂、免疫抑制剂或生物制剂或使用效果不明显的炎症性肠病的患者进行所述炎症性肠病的预防或治疗的方法，所述方法包括对所述患者给予有效量的肾上腺髓质素、具有抑制炎症活性的其修饰物或者具有抑制炎症活性的所述肾上腺髓质素或所述修饰物的盐。另外，从对AM的构效关系研究，推进了对有助于AM生物活性的必需序列的确定(非专利文献2～9)。已知通常肽由于在体内(例如血液中)的代谢反应而导致体内的半衰期较短。因此，当把肽用作药物的有效成分时，通过将其他基团与该肽连接而成的肽衍生物的形式，有时能够延长体内的半衰期，改善药物动力学。例如，专利文献4记载了一种在生物学上具有活性的垂体中间叶激素(intermedin)肽或肾上腺髓质素肽，其特征在于，具有超过1.5小时的血清半衰期。该文献记载了通过酰胺键连接烷基和肽部分。专利文献5记载了一种通过AM的Tyr1的酚羟基与聚乙二醇(以下也记作“PEG”)基连接而成的AM衍生物。专利文献6记载了一种使PEG-醛与肽的游离氨基反应，肽的游离氨基与PEG基连接而成的肽衍生物的制造方法。该文献记载了AM作为所述肽。非专利文献10记载了一种通过酰胺键连接AMN末端的α氨基与PEG基而成的AM衍生物。该文献记载了连接PEG基而成的AM衍生物的血液中的半衰期得到延长。专利文献7记载了一种融合蛋白，其包含位于融合蛋白的氨基末端且含有第一生物活性肽或蛋白的序列的第一片段，以及位于融合蛋白的羧基末端且含有第二生理活性蛋白或肽的序列的第二片段，上述第一片段和第二片段共价结合以发挥功能，从而形成该融合蛋白。该文献记载了还可以包含与上述第一片段和第二片段结合的免疫球蛋白或其功能等价物的Fc片段那样的接头片段。该文献未提及肾上腺髓质素。专利文献8记载了一种工程多肽，其包含白蛋白结合结构域多肽(ABD)和选自瘦蛋白、瘦蛋白类似物或其活性片段的第一肽激素结构域(HD1)。该文献记载了Fc蛋白作为HD1所含有的水溶性聚合物部分。该文献记载了工程多肽具有良好的作用持续时间。该文献例举了肾上腺髓质素那样的胰淀素或其类似物，作为能够与工程多肽一同给药的药物。专利文献9记载了一种可以改善折叠和减少凝集的Fc-干扰素-β融合蛋白，其包含(i)免疫球蛋白Fc区域和(ii)通过肽键或肽接头序列而与免疫球蛋白Fc区域的羧基末端连接的干扰素-β融合蛋白。该文献记载了通过上述融合蛋白可以改善干扰素-β的血液中半衰期。该文献未提及肾上腺髓质素。现有技术文献专利文献专利文献1：日本专利第2774769号公报专利文献2：日本专利第4830093号公报专利文献3：WO2012/096411号专利文献4：WO2012/138867号专利文献5：WO2013/064508号专利文献6：美国专利申请公开第2009/0252703号说明书专利文献7：日本特表2009-510999号公报专利文献8：日本特表2014-528917号公报专利文献9：日本专利第4808709号公报非专利文献非专利文献1：KitamuraK，KangawaK，KawamotoM，IchikiY，NakamuraS，MatsuoH，EtoT.Adrenomedullin:anovelhypotensivepeptideisolatedfromhumanpheochromocytoma.BiochemBiophysResCommun，1993年4月30日，第192(2)卷，pp.553-560非专利文献2：Belloni，A.S.等人，Structure-activityrelationshipsofadrenomedullinintheadrenalgland.EndocrRes，1998年，第24(3-4)卷，p.729-30.非专利文献3：Champion，H.C.等人，Catecholaminereleasemediatespressoreffectsofadrenomedullin-(15-22)intherat.Hypertension，1996年，第28(6)卷，p.1041-6.非专利文献4：Champion，H.C.，G.G.Nussdorfer，和P.J.Kadowitz，Structure-activityrelationshipsofadrenomedullininthecirculationandadrenalgland.RegulPept，1999年，第85(1)卷，p.1-8.非专利文献5：Eguchi，S.等人，Structure-activityrelationshipofadrenomedullin，anovelvasodilatorypeptide，inculturedratvascularsmoothmusclecells.Endocrinology，1994年，第135(6)卷，p.2454-8.非专利文献6：Garcia，M.A.等人，Synthesis，biologicalevaluation，andthree-dimensionalquantitativestructure-activityrelationshipstudyofsmall-moleculepositivemodulatorsofadrenomedullin.JMedChem，2005年，第48(12)卷，p.4068-75.非专利文献7：Mitsuda，Y.等人，Large-scaleproductionoffunctionalhumanadrenomedullin:expression，cleavage，amidation，andpurification.ProteinExprPurif，2002年，第25(3)卷，p.448-55.非专利文献8：Roldos，V.等人，Small-moleculene本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种由下述式(I)表示的化合物或其盐，或者它们的水合物，/nA-L-B(I)/n式(I)中，A为免疫球蛋白的Fc区域，/nB为由肾上腺髓质素或具有肾上腺髓质素活性的其修饰物衍生的肽部分，/nL为由具有任意氨基酸序列的肽组成的连接基团。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170329 JP 2017-0643691.一种由下述式(I)表示的化合物或其盐，或者它们的水合物，
A-L-B(I)
式(I)中，A为免疫球蛋白的Fc区域，
B为由肾上腺髓质素或具有肾上腺髓质素活性的其修饰物衍生的肽部分，
L为由具有任意氨基酸序列的肽组成的连接基团。


2.根据权利要求1所述的化合物，其中，
L为由具有GGGGSGGGGSGGGGS(SEQIDNO:22)或GGGGSGGGGSGGGGK(SEQIDNO:24)的氨基酸序列的肽组成的连接基团，
Fc区域A通过其C末端的羧基与连接基团L的N末端的α氨基形成肽键，来与其余部分连接，并且，
肽部分B通过其N末端的α氨基与连接基团L的C末端的羧基形成肽键，来与其余部分连接。


3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，A为免疫球蛋白G1(IgG1)的Fc区域，或免疫球蛋白G4(IgG4)的Fc区域。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的化合物，其中，所述肾上腺髓质素或具有肾上腺髓质素活性的其修饰物为选自于下述组中的肽：
(i)由肾上腺髓质素的氨基酸序列组成的肽；
(ii)由肾上腺髓质素的氨基酸序列组成且该氨基酸序列中的两个半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(iii)在(ii)的肽中所述二硫键被亚乙基取代且具有肾上腺髓质素活性的肽；
(iv)在(i)～(iii)任一个肽中缺失、取代或添加1～15个氨基酸残基且具有肾上腺髓质素活性的肽；
(v)在(i)～(iv)任一个肽中C末端被酰胺化的肽；以及
(vi)在(i)～(iv)任一个肽中在C末端添加甘氨酸残基的肽。


5.根据权利要求4所述的化合物，其中，所述肾上腺髓质素或其修饰物为选自于下述组中的肽：
(i)由肾上腺髓质素的氨基酸序列组成的肽；
(ii)由肾上腺髓质素的氨基酸序列组成且该氨基酸序列中的两个半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(v)在(i)或(ii)的肽中C末端被酰胺化的肽；以及
(vi)在(i)或(ii)的肽中在C末端添加甘氨酸残基的肽。


6.根据权利要求1～4中任一项所述的化合物，其中，所述肾上腺髓质素或其修饰物为选自于下述组中的肽：
(a)由SEQIDNO:1的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:1的氨基酸序列组成且第16位的半胱氨酸残基与第21位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(b)由SEQIDNO:4的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:4的氨基酸序列组成且第16位的半胱氨酸残基与第21位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(c)由SEQIDNO:6的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:6的氨基酸序列组成且第16位的半胱氨酸残基与第21位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(d)由SEQIDNO:8的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:8的氨基酸序列组成且第16位的半胱氨酸残基与第21位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(e)由SEQIDNO:10的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:10的氨基酸序列组成且第14位的半胱氨酸残基与第19位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(f)由SEQIDNO:12的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:12的氨基酸序列组成且第14位的半胱氨酸残基与第19位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(g)在(a)～(f)任一个肽中所述二硫键被亚乙基取代且具有肾上腺髓质素活性的肽；
(h)在(a)～(g)任一个肽中缺失、取代或添加1～15个氨基酸残基且具有肾上腺髓质素活性的肽；
(i)在(a)～(h)任一个肽中C末端被酰胺化的肽；以及
(j)在(a)～(h)任一个肽中在C末端添加甘氨酸残基的肽。


7.根据权利要求6所述的化合物，其中，所述肾上腺髓质素或其修饰物为选自于下述组中的肽：
(a)由SEQIDNO:1的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:1的氨基酸序列组成且第16位的半胱氨酸残基与第21位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(b)由SEQIDNO:4的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:4的氨基酸序列组成且第16位的半胱氨酸残基与第21位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(c)由SEQIDNO:6的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:6的氨基酸序列组成且第16位的半胱氨酸残基与第21位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(d)由SEQIDNO:8的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:8的氨基酸序列组成且第16位的半胱氨酸残基与第21位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(e)由SEQIDNO:10的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:10的氨基酸序列组成且第14位的半胱氨酸残基与第19位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(f)由SEQIDNO:12的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:12的氨基酸序列组成且第14位的半胱氨酸残基与第19位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(i)在(a)～(f)任一个肽中C末端被酰胺化的肽；以及
(j)在(a)～(f)任一个肽中在C末端添加甘氨酸残基的肽。


8.根据权利要求1～4中任一项所述的化合物，其中，用式(I)表示的化合物为选自于下述组中的肽：
(E-a-1)由SEQIDNO:15的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:15的氨基酸序列组成且第259位的半胱氨酸残基与第264位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(E-a-2)由SEQIDNO:17的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:17的氨基酸序列组成且第259位的半胱氨酸残基与第264位的半胱氨酸残基形成二硫键的肽；
(E-a-3)由SEQIDNO:19的氨基酸序列组成的肽，或者由SEQIDNO:19的氨基酸序列组成且第25...

【专利技术属性】
技术研发人员：北村和雄，山崎基生，永田鞘香，
申请(专利权)人：国立大学法人宫崎大学，
类型：发明
国别省市：日本;JP