鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法和检测方法技术

本发明专利技术涉及一种鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法和检测方法。该UPLC特征图谱建立方法包括如下步骤：对照品溶液的制备；供试品溶液的制备：取鲜鱼腥草药材，切碎后加入体积分数为70～95％的甲醇水溶液或甲醇进行提取，提取液过滤，取续滤液，得供试品溶液；吸取所述对照品溶液和供试品溶液，注入超高效液相色谱仪中进行检测，所述超高效液相色谱仪采用的流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.05～0.15％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。该UPLC特征图谱建立方法能够建立获得鲜鱼腥草药材的特征图谱，填补了现有技术的空白，且质量检测全面、可靠，同时用时较短，便于大规模推广应用。

Establishment and detection of UPLC characteristic map of Houttuynia cordata

【技术实现步骤摘要】
鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法和检测方法
本专利技术涉及中药质量检测
，特别是涉及一种鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法和检测方法。
技术介绍
鲜鱼腥草为三白草科植物蕺菜(HouttuyniacordataThunb.)的新鲜全草，研究表明，鲜鱼腥草药材含有挥发油、有机酸类、黄酮类、酚类和生物碱类等化合物，具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋的功效，主要用于肺脓疡、痰热咳嗽、热痢热淋、痈疮肿毒等症，是卫生部正式确定的“药膳兼用型”植物资源之一，也是历版《中国药典》收载的常见的鲜品中药材，具有广阔的经济和药用价值。但2015年版《中国药典》仅规定了鲜鱼腥草药材的性状及薄层鉴别，尚未规定其指标成分的含量检测项，不利于鲜鱼腥草的质量控制。就目前的技术发展而言，以单一成分作为评价指标已不能全面反映鲜鱼腥草药材的质量，通过建立指纹或特征图谱则可较为全面表征其整体化学成分特征信息。现有的针对鱼腥草的特征图谱大多是针对干鱼腥草或干鱼腥草制剂的，而鲜鱼腥草是中国药典规定的鱼腥草项下有别于干鱼腥草的一种鲜品中药材，相较于干鱼腥草，鲜鱼腥草现采即用，未经任何加工处理，有效成分得以最大程度的保留，特征图谱所反映化学成分信息也存在差异。且目前关于鱼腥草指纹(或特征)图谱的检测均采用的是高效液相色谱法(HPLC)，检测耗时较长(30～90分钟)、试剂用量大、检测成本高，不利于全面推广应用。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法。该方法能够构建鲜鱼腥草药材的特征图谱，填补了现有技术的空白，且质量检测全面、可靠，同时用时较短，便于大规模推广应用。一种鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法，包括如下步骤：对照品溶液的制备：取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮苷对照品，加溶剂溶解，得对照品溶液；供试品溶液的制备：取鲜鱼腥草药材，切碎后加入体积分数为70～95％的甲醇水溶液或甲醇进行提取，提取液过滤，取续滤液，得供试品溶液；将所述对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪中进行检测，所述超高效液相色谱仪采用的流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.05～0.15％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。在其中一个实施例中，所述梯度洗脱包括如下程序：0～7min，流动相A的体积百分比由5％上升至11％；7～10min，流动相A的体积百分比由11％上升至11.5％；10～13min，流动相A的体积百分比由11.5％上升至20％；13～20min，流动相A的体积百分比由20％上升至25％。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱仪的条件包括：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长：200～400nm；流速：0.25～0.35mL/min；柱温：25～35℃。在其中一个实施例中，所述检测波长采用程序波长：0～13分钟为326nm，13～20分钟为254nm。在其中一个实施例中，所述流速为0.3mL/min；所述柱温为30℃。在其中一个实施例中，所述供试品溶液的制备中，所述提取的溶剂为体积分数为85～95％的甲醇水溶液，所述提取的方法为回流提取，所述提取的时间为25～35min。在其中一个实施例中，所述对照品溶液的制备中，所述溶解采用的溶剂与所述供试品溶液的制备中所述提取的溶剂一致。在其中一个实施例中，所述特征图谱包含10个共有峰，10个共有峰中包括新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮苷的特征峰。一种鲜鱼腥草药材的特征图谱和指标成分含量同步检测方法，包括如下步骤：按照如上所述的建立方法构建所述鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱；指标成分对照品溶液的制备：取绿原酸、金丝桃苷和槲皮苷对照品，加溶剂溶解，配置成不同浓度的指标对照品溶液；待测样品溶液的制备：取待测鲜鱼腥草药材，切碎后加入体积分数为70～95％的甲醇水溶液或甲醇进行提取，提取液过滤，取续滤液，得待测样品溶液；将所述不同浓度的指标成分对照品溶液分别注入超高效液相色谱仪中进行检测，并构建指标成分的浓度-峰面积标准曲线；将所述待测样品溶液注入超高效液相色谱仪中进行检测，并将检测图谱与所述鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱和指标成分的浓度-峰面积标准曲线进行比较。其中，所述超高效液相色谱仪采用的流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.05～0.15％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。在其中一个实施例中，所述梯度洗脱包括如下程序：0～7min，流动相A的体积百分比由5％上升至11％；7～10min，流动相A的体积百分比由11％上升至11.5％；10～13min，流动相A的体积百分比由11.5％上升至20％；13～20min，流动相A的体积百分比由20％上升至25％。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱仪的条件包括：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长：200～400nm；流速：0.25～0.35mL/min；柱温：25～35℃。在其中一个实施例中，所述检测波长采用程序波长：0～13分钟为326nm，13～20分钟为254nm。在其中一个实施例中，所述流速为0.3mL/min；所述柱温为30℃。在其中一个实施例中，所述待测样品溶液的制备中，所述提取的溶剂为体积分数为85～95％的甲醇水溶液，所述提取的方法为回流提取，所述提取的时间为25～35min。在其中一个实施例中，所述对照品溶液的制备中，所述溶解采用的溶剂与所述待测样品溶液的制备中所述提取的溶剂一致。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术的鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法可以建立获得鲜鱼腥草药材的特征图谱，全面地反映鲜鱼腥草药材的主要化学成分信息，且质量检测全面、可靠，同时用时较短，便于大规模推广应用。本专利技术的鲜鱼腥草药材的检测方法，可以全面的反映鲜鱼腥草药材的主要化学成分信息，同时还可以准确测定鲜鱼腥草药材中主要成分绿原酸、金丝桃苷和槲皮苷的含量，便于对鲜鱼腥草药材的质量进行全面监控，同步进行定性和定量分析，填补当前药材质量标准中含量检测项的空白，利于鲜鱼腥草药材的质量控制与评价，为鲜鱼腥草药材质量标准的提升提供了参考。且该检测方法操作简便、耗时较短、精密度高、准确度高、稳定性好、重现性好，便于大规模推广应用。附图说明图1为本专利技术一实施例中的鲜鱼腥草药材的特征图谱(峰1：新绿原酸；峰3(S)：绿原酸；峰4：隐绿原酸；峰6：芦丁；峰7：金丝桃苷；峰8：异槲皮苷；峰10：槲皮苷)；图2为上述特征图谱建立过程中吸收波长考察的3D色谱图；图3为上述特征图谱建立过程中吸收波长考察的色谱图；图4为上述特征图谱建立过程中流动相考察的色谱图；图5为上述特征图谱建立过程中柱温考察的色谱图；图6为上述特征图谱建立过程中流速考本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法，其特征在于，包括如下步骤：/n对照品溶液的制备：取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮苷对照品，加溶剂溶解，得对照品溶液；/n供试品溶液的制备：取鲜鱼腥草药材，切碎后加入体积分数为70～95％的甲醇水溶液或甲醇进行提取，提取液过滤，取续滤液，得供试品溶液；/n将所述对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪中进行检测，所述超高效液相色谱仪采用的流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.05～0.15％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。/n

【技术特征摘要】
1.一种鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法，其特征在于，包括如下步骤：
对照品溶液的制备：取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮苷对照品，加溶剂溶解，得对照品溶液；
供试品溶液的制备：取鲜鱼腥草药材，切碎后加入体积分数为70～95％的甲醇水溶液或甲醇进行提取，提取液过滤，取续滤液，得供试品溶液；
将所述对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪中进行检测，所述超高效液相色谱仪采用的流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.05～0.15％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。


2.根据权利要求1所述的鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法，其特征在于，所述梯度洗脱包括如下程序：
0～7min，流动相A的体积百分比由5％上升至11％；
7～10min，流动相A的体积百分比由11％上升至11.5％；
10～13min，流动相A的体积百分比由11.5％上升至20％；
13～20min，流动相A的体积百分比由20％上升至25％。


3.根据权利要求1所述的鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法，其特征在于，所述超高效液相色谱仪的条件包括：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长：200～400nm；流速：0.25～0.35mL/min；柱温：25～35℃。


4.根据权利要求3所述的鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法，其特征在于，所述检测波长采用程序波长：0～13分钟为326nm，13～20分钟为254nm。


5.根据权利要求3所述的鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法，其特征在于，所述流速为0.3mL/min；所述柱温为30℃。


6.根据权利要求1所述的鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备中，所述提取的溶剂为体积分数为85～95％的甲醇水溶液，所述提取的方法为回流提取，所述提取的时间为25～35min。


7.根据权利要求1-6任一项所述的鲜鱼腥草药材的UPLC特征图谱建立方法，其特征在于，所述特征图谱包含10个共有峰，10个共有峰中包括新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷和槲皮苷的特征峰。


8.一种鲜鱼腥草药材的特征图谱和指标成分含量同步检测方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐杰，梁志毅，张志鹏，魏梅，黄梦婷，邓李红，田清清，鲁云，程学仁，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44