【技术实现步骤摘要】
一种小分子巯基化合物的检测方法
本专利技术属于分析化学
，具体涉及一种MALDI-TOF-MS检测小分子巯基化合物的方法。
技术介绍
小分子巯基化合物广泛存在于生物体以及食品和饮料中。生物体中常见的小分子巯基化合物主要有半胱氨酸(cysteine,Cys)、高半胱氨酸(homocysteine,Hcys)、γ-谷氨酰胺半胱氨酸(γ-glutamylcysteine,γ-GluCys)、半胱氨酰甘氨酸(cysteinylglycine,CysGly)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,Nac)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)等。这些小分子巯基化合物广泛存在于植物、动物和人体中，在调节生物体内氧化还原平衡和抵抗氧化应激方面发挥着重要的作用。目前已报道生物样品中小分子巯基化合物的含量变化与多种疾病息息相关，包括阿尔兹海默病，心血管疾病、癌症、白血病和糖尿病等。因此，开发快速、灵敏、高通量的小分子巯基化合物分析方法对于早期的临床诊断以及疾病发病机理的探索具有重要的意义。食品和饮料(如啤酒、葡萄酒、...
【技术保护点】
1.一种MALDI-TOF-MS检测小分子巯基化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)富勒烯衍生物Br-C60的合成：/n(1)富勒烯衍生物1的合成：100-200mg富勒烯C60加入到含有50-100mL甲苯溶液的圆底烧瓶中，将25-50mg 2-三甲基硅氧基-1,3-丁二烯溶于10-20mL甲苯溶液中，在125℃回流条件逐滴加入圆底烧瓶中，滴加1h后，继续回流24h，所得反应液用旋转蒸发仪除去甲苯后，用硅胶层析柱对产物进行纯化，得黑色固体富勒烯衍生物1，其洗脱剂为甲苯/正己烷(v/v)＝1/3～3/2；/n(2)富勒烯衍生物2的合成：在圆底烧瓶中将80-160m...
【技术特征摘要】
1.一种MALDI-TOF-MS检测小分子巯基化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)富勒烯衍生物Br-C60的合成：
(1)富勒烯衍生物1的合成：100-200mg富勒烯C60加入到含有50-100mL甲苯溶液的圆底烧瓶中，将25-50mg2-三甲基硅氧基-1,3-丁二烯溶于10-20mL甲苯溶液中，在125℃回流条件逐滴加入圆底烧瓶中，滴加1h后，继续回流24h，所得反应液用旋转蒸发仪除去甲苯后，用硅胶层析柱对产物进行纯化，得黑色固体富勒烯衍生物1，其洗脱剂为甲苯/正己烷(v/v)＝1/3～3/2；
(2)富勒烯衍生物2的合成：在圆底烧瓶中将80-160mg富勒烯衍生物1溶于50-100mL甲苯溶液中，将1-2mL二异丁基氢化铝(DIBAL)溶于25-50mL甲苯溶液中，在25℃条件下逐滴加入到圆底烧瓶中，在氮气保护条件下，搅拌5h，反应结束后，加入30-60mL酒石酸钾钠饱和溶液，持续搅拌过夜，猝灭DIBAL直至溶液澄清，移掉有机相，用10-20mL甲苯对水相进行萃取，重复三次，合并有机相。所得反应液用旋转蒸发仪除去甲苯后，用硅胶层析柱对产物进行纯化，得黑色固体富勒烯衍生物2，其洗脱剂为甲苯/正己烷(v/v)＝1/1～4/1；
(3)富勒烯衍生物Br-C60的合成：在圆底烧瓶中，将60-120mg富勒烯衍生物2溶于50-100mL甲苯溶液中，1-2mL溴乙酰溴溶于25-50mL甲苯溶液中，并逐滴加入到圆底烧瓶，在125℃油浴条件下加热回流5h，所得反应液用旋转蒸发仪除去溶剂，硅胶层析柱对产物进行纯化，得棕色固体富勒烯衍生物3，即富勒烯衍生物Br-C60，其洗脱剂为甲苯/正己烷(v/v)＝1/1；
2)Br-C60与小分子巯基化合物的衍生化反应
溶解在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的Br-C60，与巯基小分子化合物溶液混合于1.5mL离心管中，加入弱碱性溶液催化，混合液中pH为8-9，物质的量之比：Br-C60:R-SH＝3.75:1，将混合液放入微波炉中700W反应5min；
3)MALDI-TOFMS检测
取0.5μL衍生化反应结束后的反应液与0.5μL基质，所述基质为配置于乙腈中的10mg/mL反-2-[3-(4-叔丁基苯基)-2-甲基-2-亚丙烯基]丙二腈(DCTB)，混合点板，室温风干后进入MALDI-TOF-MS分析；MALDI-TOF-MS分析时采用波长为337nm的氮气激光器，脉冲宽度为3ns；采用20kV加速电压，在负离子反射模式下检测，每张质谱图是400次激光扫描的平均结果。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)的衍生反应中的弱碱性溶液为NH4HCO3或其他有机碱或无机碱。
3.一种MALDI-TOF-MS定量检测小分子巯基化...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯钰锜，覃长娜，余琼卫，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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