一种以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法技术

本发明专利技术公开了一种以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法，利用锌与蛋白酶组合的特点，将植物破壁后的活性液中的超氧化物歧化酶激活并提取，从而得到理想的超氧化物歧化酶。本发明专利技术的提取方法成本低，工艺简单，操作方便实用，所提取的超氧化物歧化酶活性高，质量好，活性保持时间长，可直接用于营养品、保健品、药品或食品的填充原料。

A method of extracting superoxide dismutase from plants

【技术实现步骤摘要】
一种以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法
本专利技术涉及一种提取超氧化物歧化酶的方法，具体涉及一种以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法，属于生物

技术介绍
SOD是超氧化物歧化酶(superoxidedismutase)的简称，国际酶学委员会的编码为EC1.15.1.1，属于氧化还原类酶，SOD酶是生物重要保护酶之一，能增强机体抗逆能力，防衰老，能够清除机体中过多自由基的活性物质，该物质与机体的衰老、肿瘤发生、自身免疫性疾病和辐射防护等密切有关，对治疗类风湿性关节炎、白内障、膀胱炎、皮肤病、红斑狼疮等疾病疗效较好，SOD酶无抗原性，不良反应小，副作用小，是一种医疗价值很高、具有广阔前途的药用酶。SOD的分布极为广泛，迄今为止已从细菌、真菌、藻类、鱼类、昆虫和哺乳类动物等各种生物体分离得到，按金属辅基成分的不同分为三种，第一种是含有铜(Cu)锌(Zn)金属辅基的称(Cu.Zn—SOD)，呈绿色，存在于机体细胞浆中；第二种是是含有锰(Mn)金属辅基的称(Mn—SOD)，呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；第三种是含有铁(Fe)金属辅基的称(Fe—SOD)，呈黄褐色，存在于原核细胞中。但是，从最早发现SOD到今天对SOD的开发应用，SOD大都是从动物的血液中分离提取。因此，公开的提取SOD的方式大多的是动物血液提取和分离。专利申请号97108883公开了一种从蚯蚓中提取SOD的方法，其步骤为：洗蚓，净化，渗透溶液制取SOD母液，粗滤，离心制取上清液，超滤，反渗透浓缩，冷冻干燥等，专利申请号86100551公开了一种超氧化歧化酶(SOD)的提纯方法，它是将动物肝脏匀浆在二价铜盐的条件下分步加热和透析沉淀除去杂质，提取SOD；采用硫酸铵分步盐析，除去杂蛋百，收集含SOD的蛋白质，再经透析、浓缩、干燥，可获得比活力为2789单位/毫克的SOD，但在分离提取SOD时，需要多次加入再多次分离该物质，使得分离提取工艺繁琐复杂，容易造成化学污染，可见上述方案因原料或方法的缺陷实施困难。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法，利用锌与蛋白酶组合的特点，将植物破壁后的活性液中的超氧化物歧化酶激活并提取，从而得到理想的超氧化物歧化酶。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法，步骤如下：(1)将植物原料粉碎至直径为80～100目后加入活性保护剂进行破壁处理，得到植物浆液备用；(2)将植物浆液50～55℃恒温25～35min，进行活性增殖裂变；(3)将经过活性增殖裂变后的植物浆液进行离心，离心的转速为4000～6000rpm，离心时间为10～30min，去除沉淀后得到活性液；(4)取等量的葡萄糖酸锌和碱性蛋白酶混合，用水溶解后向其中加入乙醇得到混合液；(5)将混合液和活性液混合，在20～25℃温度下恒温沉淀20～28h，去除沉淀，-18～-100℃干燥后即得超氧化物歧化酶。本专利技术的提取方法成本低，工艺简单，操作方便实用，所提取的超氧化物歧化酶活性高，质量好，活性保持时间长，可直接用于营养品、保健品、药品或食品的填充原料。进一步，植物原料为金秋葵、沙棘、松针、串叶松香草中的任一种或几种的混合。上述几种植物原料为常见植物，适种性强，产量高，易于采购，能够节省成本，且其中的超氧化物歧化酶含量丰富。进一步，步骤(1)中活性保护剂的加入量为植物原料质量的0.005～0.02倍，其中，活性保护剂为海藻糖、甘露醇、乳糖中的任一种或几种的混合。上述活性保护剂可有效保持植物原料中超氧化物歧化酶的活性。进一步，步骤(4)中“葡萄糖酸锌和碱性蛋白酶混合，用水溶解”的操作为加入质量为葡萄糖酸锌和碱性蛋白酶质量之和60倍的水；乙醇为浓度95～97的乙醇，其与等质量葡萄糖酸锌和碱性蛋白酶混合物的质量比为7:3；步骤(5)中混合液和活性液混合的质量比为6:4。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。在以下实施例中，活性保护剂为等质量混合的海藻糖、甘露醇和乳糖。实施例1以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法，步骤如下：(1)将金秋葵、松针和串叶松香草混合粉碎至直径为100目后加入金秋葵、松针和串叶松香草混合物质量0.02倍的活性保护剂进行破壁处理，得到植物浆液备用；(2)将植物浆液50℃恒温30min，进行活性增殖裂变；(3)将经过活性增殖裂变后的植物浆液进行离心，离心的转速为4000rpm，离心时间为30min，去除沉淀后得到活性液；(4)取等量的葡萄糖酸锌和碱性蛋白酶混合，用60倍的水溶解后向其中加入浓度为97的乙醇至乙醇与等质量葡萄糖酸锌和碱性蛋白酶混合物的质量比为7:3，得到混合液；(5)将混合液和活性液以质量比6:4混合，在20℃温度下恒温沉淀20～28h，去除沉淀，-80℃干燥后即得超氧化物歧化酶。实施例2以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法，步骤如下：(1)将金秋葵粉碎至直径为80目后加入金秋葵质量0.005倍的活性保护剂进行破壁处理，得到植物浆液备用；(2)将植物浆液50℃恒温25min，进行活性增殖裂变；(3)将经过活性增殖裂变后的植物浆液进行离心，离心的转速为4000rpm，离心时间为10min，去除沉淀后得到活性液；(4)取等量的葡萄糖酸锌和碱性蛋白酶混合，用60倍的水溶解后向其中加入浓度为95的乙醇至乙醇与等质量葡萄糖酸锌和碱性蛋白酶混合物的质量比为7:3，得到混合液；(5)将混合液和活性液以质量比6:4混合，在20℃温度下恒温沉淀20h，去除沉淀，-100℃干燥后即得超氧化物歧化酶。实施例3植物原料为金秋葵、沙棘、松针、串叶松香草以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法，步骤如下：(1)将金秋葵和沙棘粉碎至直径为100目后加入金秋葵和沙棘混合物质量0.02倍的活性保护剂进行破壁处理，得到植物浆液备用；(2)将植物浆液55℃恒温35min，进行活性增殖裂变；(3)将经过活性增殖裂变后的植物浆液进行离心，离心的转速为6000rpm，离心时间为30min，去除沉淀后得到活性液；(4)取等量的葡萄糖酸锌和碱性蛋白酶混合，用60倍的水溶解后向其中加入浓度为97的乙醇至乙醇与等质量葡萄糖酸锌和碱性蛋白酶混合物的质量比为7:3，得到混合液；(5)将混合液和活性液以质量比6:4混合，在25℃温度下恒温沉淀28h，去除沉淀，-18℃干燥后即得超氧化物歧化酶。实施例4以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，步骤如下：/n(1)将植物原料粉碎后加入活性保护剂进行破壁处理，得到植物浆液备用；/n(2)将植物浆液50～55℃恒温25～35min，进行活性增殖裂变；/n(3)将经过活性增殖裂变后的植物浆液进行离心，去除沉淀后得到活性液；/n(4)取等量的葡萄糖酸锌和碱性蛋白酶混合，用水溶解后向其中加入乙醇得到混合液；/n(5)将混合液和活性液混合，在20～25℃温度下恒温沉淀20～28h，去除沉淀，-18～-100℃干燥后即得所述超氧化物歧化酶。/n

【技术特征摘要】
1.一种以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，步骤如下：
(1)将植物原料粉碎后加入活性保护剂进行破壁处理，得到植物浆液备用；
(2)将植物浆液50～55℃恒温25～35min，进行活性增殖裂变；
(3)将经过活性增殖裂变后的植物浆液进行离心，去除沉淀后得到活性液；
(4)取等量的葡萄糖酸锌和碱性蛋白酶混合，用水溶解后向其中加入乙醇得到混合液；
(5)将混合液和活性液混合，在20～25℃温度下恒温沉淀20～28h，去除沉淀，-18～-100℃干燥后即得所述超氧化物歧化酶。


2.根据权利要求1所述的一种以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，所述植物原料为金秋葵、沙棘、松针、串叶松香草中的任一种或几种的混合。


3.根据权利要求1所述的一种以植物为原料提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，步骤(1)中所述粉碎的操作为粉碎至直径为80～100目。


4.根据权利要求1所述的一种以植物为原料提取超氧化物歧...

【专利技术属性】
技术研发人员：王喜，张玉芝，
申请(专利权)人：王喜，
类型：发明
国别省市：河北;13