细胞培养方法及装置制造方法及图纸

本发明专利技术的目的在于提供一种细胞培养方法，其能够在使用形成有多个凹部的细胞培养袋进行细胞培养时，通过更换培养基时防止细胞流动的同时提高培养基的更换效率，从而提高细胞培养和分化诱导的效率。本发明专利技术提供细胞培养方法，所述方法使用具有袋主体(2)和安装于袋主体(2)的端口(3)的细胞培养袋(1)，所述袋主体(2)由密封周边部的上表面膜(21)和下表面膜(22)构成，其中将细胞培养袋(1)装载至支架(5)的装载面(5a)，在从端口(3)进行培养基(S)的注入或排出期间，利用具有与装载面(5a)实质上平行的底面(6a)的按压构件(6)从上按压上表面膜(21)。

Cell culture method and device

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞培养方法及装置
本专利技术涉及细胞培养方法及装置，更具体而言涉及使用细胞培养袋的细胞培养方法及装置。
技术介绍
近年来，在医药品的生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等领域中，亟需将细胞(包括组织、微生物、病毒等)在人工的环境中效率良好地大量培养、诱导分化。在这样的细胞培养中，为了避免污染的风险，有时使用闭锁体系的细胞培养袋。细胞培养袋例如由将周边部密封的塑料膜构成的袋主体和安装于袋主体的端口构成。在使用了细胞培养袋的细胞培养中，需要避免细胞培养袋内的细胞浓度的不均，将细胞浓度保持在合理的范围。即，是由于在伴随细胞的增殖而培养基中的细胞浓度升高时，由于增殖所需要的培养基成分的枯竭、细胞自身的代谢产物的蓄积等而使细胞的生长受到阻碍，细胞的增殖效率降低，另一方面，如果培养基中的细胞浓度过低，则细胞的增殖、诱导分化的效率也降低。特别是，在使用了设有多个凹部的细胞培养袋的球状体培养中，使细胞数变得均一的方式将细胞接种，使得在各凹部中形成适当的大小的球状体(细胞凝聚团块)。然后，谋求以使得各凹部的球状体的大小均一的方式，至培养结束为止保持每1个凹部1个球状体。另外，在专利文献1中记载了通过在袋主体的底面设置多个凹部从而抑制了细胞培养袋内的细胞的移动的细胞培养袋。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2009-11260号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的问题细胞的培养通常需要数天至数周的时间。在使用了细胞培养袋的细胞培养中，在培养期间保持闭锁体系原样，根据需要而进行培养基更换。在培养基更换中，经由与端口连接的送液管，保持细胞残留在细胞培养袋内的状态而使细胞培养袋内的旧的培养基从端口排出，然后，从端口向细胞培养袋内注入新的培养基。另外，在培养基更换中，存在在细胞培养袋的上表面膜产生诸如褶皱、歪斜的起伏的情况。特别是如图9(a)所示，对使上表面膜21为膨出形状的细胞培养袋10而言，与将两块塑料膜叠合并仅将周边部密封的的平袋状的容器相比，在即使将容器内用培养基充满，提起周边部下表面膜22也较少变形的方面优异，但在上表面膜21容易产生起伏。如果保持在细胞培养袋10的上表面膜21产生起伏，使得细胞培养袋1内的培养基S的厚度变得不均一的状态继续进行培养基S的排出，则如图9(b)所示，与培养基的S的厚度厚的区域Sb相比，上表面膜21在培养基S的厚度薄的区域Sa中更早与下表面膜22进行局部接触。结果存在会将细胞培养袋1内的培养基S离断而形成间断部分的情况D。如果细胞培养袋10形成间断部分D，则如图9(c)所示，即使从端口3吸引培养基S，也只将位于比间断部分D靠前的培养基S排出。一方面，位于比间断部分D靠里的残留培养基S1不被排出，会剩在细胞培养袋1内。结果培养基S的更换效率降低而细胞的培养、诱导分化效率会降低。需要说明的是，在培养基更换中，在已形成如图9(c)所示那样的间断部分D的情况下，如果以使端口3侧降低的方式倾斜细胞培养袋10，则可以将细胞培养袋10内的培养基S的间断消解，将剩下的残留培养基S1排出。但是，如果将细胞培养袋1倾斜，则存在与培养基S一起将细胞从端口3排出的隐患，在此基础上，在图11示出的在下表面膜22设有多个凹部4的细胞培养袋1中，会存在与凹部4内的培养基一起，连细胞也从凹部4流出的隐患。因此，在培养基更换中将细胞培养袋10倾斜不是优选的。进一步，在下表面膜22上将细胞进行平面培养(二维培养)的情况下，存在由于上表面膜21的起伏，如果上表面膜21与下表面膜22局部接触，则在其接触部分，粘附于下表面膜22的细胞会剥离，与培养基S一起从端口1排出的情况。另外，即使在剥离细胞未从端口1排出的情况下，也存在细胞会在细胞培养袋1内流动，细胞浓度产生不均的情况。另外，如果由上表面膜21的起伏而引起培养基S的厚度不均一，则如图10(a)及图10(b)所示，在细胞培养袋1内的培养基S的厚度薄的区域Sa中，培养基更换时的培养基S的流速比在培养基的S的厚度厚的区域Sb中局部地增大。结果为在培养基流速增大的部分中，细胞会变得容易流动。例如，在下表面膜22上将细胞进行平面培养的情况下，即使上表面膜21与下表面膜22不接触，也存在在培养基流速增大的部分中，与下表面膜22粘附的细胞发生剥离的情况。结果为在培养基更换时，存在已剥离的细胞与培养基一起流动而从端口3排出的情况。另外，例如，如图11所示，即使在于下表面膜22设有多个凹部4的细胞培养袋1中进行球状体培养的情况下，也不仅存在培养基更换时，如果培养基S的流速局部地增大，则在凹部4内沉淀的球状体细胞C与培养基S共同流动而会从端口3排出的隐患，还存在会向其它凹部4移动而使得各凹部4内的细胞浓度变得不均一的情况。特别是，如果在1个凹部4中进入多个球状体C，则不久形成一个较大团块的球状体C’，由于球状体C’变得过大，从而培养、诱导分化效率会降低。本专利技术是鉴于上述的状况而进行的，目的在于提供能够在使用细胞培养袋进行细胞培养的时候，通过在培养基更换时防止细胞的流动的同时使培养基的更换效率提高，提高细胞的培养、诱导分化效率的细胞培养方法及装置。解决问题的方法本专利技术涉及的细胞培养方法，其使用具备由将周边部密封的上表面膜及下表面膜构成的袋主体、和安装于上述袋主体的端口的细胞培养袋，其中，将上述细胞培养袋装载于支架的装载面，在从上述端口进行培养基的注入或排出期间，利用具有与上述装载面实质上平行的底面按压构件从上方按压上述上表面膜。另外，本专利技术涉及的细胞培养装置，其使用具备将周边部密封的上表面及下表面膜由构成的袋主体、和上述安装于袋主体的端口的细胞培养袋，其具备具有将上述细胞培养袋装载的装载面的支架、和具有与上述装载面实质上平行的底面的按压构件，在从上述端口进行培养基的注入或排出期间，上述按压构件的上述底面从上方按压上述上表面膜。根据本专利技术的细胞培养方法及装置，在使用了细胞培养袋的细胞培养中，在从端口进行培养基的注入或排出期间，利用具有与装载面实质上平行的底面的按压构件按压上表面膜，由此使上表面膜的起伏的产生得到抑制。结果为在进行培养基的注入或排出期间，上表面膜与支架的装载面保持平行，培养基的厚度变得均一。由此，在进行培养基排出或注入期间，使由上表面膜的起伏引起的细胞培养袋的间断的产生得到抑制，使细胞培养袋内剩下的残留培养基减少，因此提高培养基的更换效率。另外，在进行培养基排出或注入期间，培养基的厚度是均一的，因此使由培养基的厚度不匀而引起的流速不匀的产生得到抑制。结果为使局部较大的培养基流速的产生得到抑制，因此可防止细胞的流动。例如，在下表面膜上将细胞平面培养的情况下，在培养基更换时，防止由上表面膜的局部接触或局部的流速的增大引起的细胞的剥离、发生流动。另外，例如，在利用于下表面膜设有多个凹部的细胞培养袋进行球状体培养的情况下，也在培养基更换时，防止由局部的流速的增大引起的凹部内的球状体细胞的流动，特别是向其它凹部4的移动。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.细胞培养方法，所述方法使用具有袋主体和安装于所述袋主体的端口的细胞培养袋，所述袋主体由密封周边部的上表面膜和下表面膜构成，/n其中将所述细胞培养袋装载于支架的装载面，在从所述端口进行培养基的注入或排出期间，利用具有与所述装载面实质上平行的底面的按压构件从上方按压所述上表面膜。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170615 JP 2017-1180661.细胞培养方法，所述方法使用具有袋主体和安装于所述袋主体的端口的细胞培养袋，所述袋主体由密封周边部的上表面膜和下表面膜构成，
其中将所述细胞培养袋装载于支架的装载面，在从所述端口进行培养基的注入或排出期间，利用具有与所述装载面实质上平行的底面的按压构件从上方按压所述上表面膜。


2.根据权利要求1所述的细胞培养方法，其中，
在所述细胞培养袋的所述下表面膜形成多个凹部，
在所述培养基排出时，使所述按压构件下降至所述上表面膜封闭所述多个凹部。


3.根据权利要求2所述的细胞培养方法，其中，
所述上表面膜具有膨出形状，所述膨出形状由顶面部分和在所述顶面部分周围形成的立起部分构成，
所述按压构件的所述底面在所述立起部分内侧的范围内与所述项面部分接触而按压所述上表面膜。


4.根据权利要求2或3所述的细胞培养方法，其中，
所述按压构件的所述底面在与所述多个凹部的周缘对应的位置具有平面部，且在与所述多个凹部对应的位置具有从所述平面部突出的突起部。


5.根据权利要求1～3中任一项所述的细胞培养方法，其中，
在利用所述按压构件按压所述上表面膜的同时，利用与所述端口连接的注入排出机构从所述端口注入培养基。


6.根据权利要求1～5中任一项所述的细胞培养方法，其中，
从所述端口注入或排出培养基时，从所述支架的所述装载面至所述按压构件的所述底面的高度越低，越将通过所述端口的所述培养基的流量减小。


7.细胞培养装置，其使用具有袋主体和安装于所述袋主体的端口的细胞培养袋，所述袋主体由密封周边部的上表面膜和下表面膜构成，
所述细胞培养装置具备支架和按压构件，
所述支架具有装载所述细胞培养袋的装载面...

【专利技术属性】
技术研发人员：末永亮，光石真稀，
申请(专利权)人：东洋制罐集团控股株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP