一种效率高且成本低的无缝DNA组装方法技术

本发明专利技术对大肠杆菌DH10B进行工程改造，敲除基因组上的recB‑recC‑rec‑D基因并过表达基因组上的recE‑recT基因后得到性能优良的重组工程宿主菌株DH10B*，将1–3个带有20bp–40bp同源序列接头的DNA片段共转入该细胞即可体内组装成完整质粒，平板上形成的菌落阳性率高于95％。该方法与现有无缝DNA组装方法相比，省去了昂贵并且费时的体外连接操作，实现了高效率、低成本、低耗时的无缝DNA组装，在分子生物学实验中具有很大的应用价值。

A seamless DNA assembly method with high efficiency and low cost

【技术实现步骤摘要】
一种效率高且成本低的无缝DNA组装方法
本专利技术涉及对大肠杆菌DH10B菌株的基因工程改造和对无缝DNA组装流程的优化，属于生物工程

技术介绍
DNA组装技术是分子生物学、代谢工程以及合成生物学中不可或缺的环节。传统的酶切连接方法由于受到酶切位点的限制现已逐渐被淘汰，无缝DNA组装技术的出现打破了酶切位点的限制，使得任意DNA片段的组装成为可能。无缝DNA组装与酶切连接的差别在于待连接的线性DNA片段末端带有同源序列，片段之间依靠同源序列的互补配对连接成环。近年来越来越多的无缝DNA组装方法被报道，相应的商用试剂盒也陆续被推出，如Gibson组装、In-Fusion组装等。然而，这些方法均需要将线性DNA片段进行体外连接后再转入宿主细胞，操作流程较为繁琐；另外，商用的试剂盒大都价格昂贵，比如：NEB公司推出的NEBuilder试剂盒平均每个连接反应的成为18.5美元。为了降低无缝DNA组装的实验成本并简化其操作流程，本专利技术提出了一种基于体内重组进行DNA组装的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种效率高且成本低的无缝DNA组装的方法，其特征是对商用大肠杆菌菌株进行工程改造，在增强其重组活性的同时减弱对外源线性DNA的降解活性，将带有同源序列接头的DNA片段共转入改造后的工程菌株即可组装成完整质粒。/n

【技术特征摘要】
1.一种效率高且成本低的无缝DNA组装的方法，其特征是对商用大肠杆菌菌株进行工程改造，在增强其重组活性的同时减弱对外源线性DNA的降解活性，将带有同源序列接头的DNA片段共转入改造后的工程菌株即可组装成完整质粒。


2.权利要求1所述的大肠杆菌，其特征在于包括但不限于DH10B、TOP10等转化潜能高且重组活性高的菌株。

【专利技术属性】
技术研发人员：霍毅欣，王雪芹，黄潮勇，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：北京;11