细菌视紫红质的可溶化表达载体及其表达方法技术

本发明专利技术公开了一种细菌视紫红质的可溶化表达载体及其表达方法。所述载体将除去N端信号肽的麦芽糖结合蛋白cDNA整合到pET28a质粒中得到pET28a‑ΔspMBP载体；将截短的人类载脂蛋白cDNA整合到pET28a‑ΔspMBP载体中得到pET28a‑ΔspMBP‑ApoAI*‑His载体；将细菌视紫红质合成基因整合到pET28a‑ΔspMBP‑ApoAI*‑His载体中，得到细菌视紫红质的可溶化表达载体。本发明专利技术的细菌视紫红质的可溶化表达载体，实现了天然含量极少的细菌视紫红质的大量表达，达到全蛋白的40％左右，同时提高了细菌视紫红质的可溶性且表达的蛋白没有形成包涵体。

Soluble expression vector of bacteriorhodopsin and its expression method

【技术实现步骤摘要】
细菌视紫红质的可溶化表达载体及其表达方法
本专利技术属于蛋白表达载体
，涉及一种细菌视紫红质的可溶化表达载体及其表达方法。
技术介绍
光敏蛋白是存在于细胞膜上的一类感光蛋白，当其受到光刺激时能够改变细胞膜内外的阴阳离子浓度从而改变膜电位，控制细胞信号和内外离子浓度等功能，现已作为光遗传学手段中的重要工具。细菌视紫红质是其中研究较早的一种蛋白，对于其结构与功能的联系的探究很有意义。但是从生物组织中提取的细菌视紫红质量非常少，若要达到一定的剂量用于研究成本很高。根据文献1(POMPEJUSM,etal.High‐yieldproductionofbacteriorhodopsinviaexpressionofasyntheticgeneinEscherichiacoli[J].TheFEBSJournal,1993,211(1‐2):27-35.)，在大肠杆菌中表达的细菌视紫红质以包涵体形式存在，其天然构象被破坏，而且表达量并不是特别高，后续探究仍很困难。因此使细菌视紫红质大量表达将为后续研究提供便利。文献2(MizrachiD,etal.M本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.细菌视紫红质的可溶化表达载体，其特征在于，所述的载体为pET28a-ΔspMBP-bR-ApoAI*-His，其以pET28a质粒为骨架，依次整合除去N端信号肽的麦芽糖结合蛋白cDNA即ΔspMBP，ΔspMBP连接细菌视紫红质N端基因序列，细菌视紫红质C端基因序列连接截短的人载脂蛋白cDNA即ApoAI*。/n

【技术特征摘要】
1.细菌视紫红质的可溶化表达载体，其特征在于，所述的载体为pET28a-ΔspMBP-bR-ApoAI*-His，其以pET28a质粒为骨架，依次整合除去N端信号肽的麦芽糖结合蛋白cDNA即ΔspMBP，ΔspMBP连接细菌视紫红质N端基因序列，细菌视紫红质C端基因序列连接截短的人载脂蛋白cDNA即ApoAI*。


2.根据权利要求1所述的细菌视紫红质的可溶化表达载体的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：
步骤1，先将pMBP-p质粒进行PCR扩增，得到除去N端信号肽的麦芽糖结合蛋白cDNA即ΔspMBP，用NcoⅠ限制性核酸内切酶和NdeⅠ限制性核酸内切酶对ΔspMBP和pET28a质粒进行酶切，连接反应得到pET28a-ΔMBP载体；
步骤2，将pET28a-ApoAI质粒进行PCR扩增，得到截短的人类载脂蛋白cDNA即ApoAI*，用HindⅢ限制性核酸内切酶和NotⅠ限制性核酸内切酶对ApoAI*和pET28a-ΔspMBP质粒进行酶切，在ApoAI*末端无终止子的情况下，引入pET28a本身所带的His标签，连接反应得到p...

【专利技术属性】
技术研发人员：周敏，马文龙，卢颖洪，
申请(专利权)人：南京理工大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32