农药氧化乐果降解微生物复合菌剂及其制备方法技术

技术编号:22878042 阅读:21 留言:0更新日期:2019-12-21 05:15
本发明专利技术涉及一种农药氧化乐果降解微生物复合菌剂及其制备方法,所述复合菌剂包括革兰氏假单胞菌(

【技术实现步骤摘要】
农药氧化乐果降解微生物复合菌剂及其制备方法
本专利技术属于土壤生物修复
,具体涉及一种农药氧化乐果降解微生物复合菌剂及其制备方法。
技术介绍
化学农药作为保障农业丰收的重要手段,在农业生产中发挥着重要的作用。化学农药使用存在的主要问题是化学农药不合理使用、农产品中农药残留严重超标、防治成本高,对生态环境造成了严重污染,产生了大面积药害。微生物修复是利用特定微生物体的代谢吸收、转化、清除或降解化学农药成分,实现环境净化、生态效应恢复的生物措施,具有高效经济、无二次污染等特点。该技术已应用于各类污染领域,表现出了较高的应用价值,国内外有关行业部门专家认为是生态环境保护领域最有价值和最具生命力的处理技术,是农业污染修复的主要发展方向,也是解决化学农药污染土壤生态修复的有效手段。氧化乐果(omethoate化学名:O,O-二甲基-S-[2-(甲胺基)-2-氧代乙基]硫代磷酸酯)是一种广谱有机磷杀虫、杀螨剂,在我国农业种植生产中广泛用于防治棉花、小麦、果树、蔬菜、高粱害虫。作用机理是通过内吸及外部接触毒性抑制生物乙酰胆碱酯酶活性,从而杀死害虫。理论上环境中的有机磷农药属易分解有机物,不易残留,但其中间降解物是持久性污染物,很难被完全降解。目前研究表明慢性接触氧化乐果,通过抑制AChE活性,导致神经损伤,诱发迟发性多发性神经病。氧化乐果亦有生殖毒性,改变人体内线粒体呼吸链中呼吸作用和产能过程中酶的活性,抑制免疫系统功能,导致组织细胞和DNA损伤及致癌作用。因此氧化乐果的残留问题应引起足够的重视。r>
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种农药氧化乐果降解微生物复合菌剂及其制备方法,通过生物修复的方式对农药氧化乐果残留土壤进行有效修复。本专利技术所采用的技术方案为:农药氧化乐果降解微生物复合菌剂,其特征在于:所述复合菌剂包括革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8或革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8和杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)混合。革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8及杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)的混合比例为1:1。所述复合菌剂还包括甘油、活性炭和高岭土。革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8、杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)、甘油、活性炭和高岭土的混合比例为1:1:(1.5-2):3:(2.5-3)。所述革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8于2019年9月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNO.18606。如所述的农药氧化乐果降解微生物复合菌剂的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:步骤一:对革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8菌体进行种子液体培养,获得革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8种子液;对杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)菌体进行种子液体培养,获得杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)种子液;步骤二:分别对革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8、杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)进行液体发酵;步骤三:液体发酵物分别离心得到液体发酵菌体A、菌体B;步骤四:将菌体A、菌体B与甘油、活性炭、高岭土按1:1:(1.5-2):3:(2.5-3)的质量比混合,制得农药氧化乐果降解微生物复合菌剂。步骤一具体为:制备液体发酵培养基a,并在121℃温度下灭菌20分钟,将革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8菌体无菌操作接入培养基a,置于温度28-30℃,摇瓶培养,160-180rpm,48-72小时,至发酵液中细胞生长至对数期,OD600达到1.5±0.4,获得革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8种子液;所述液体发酵培养基a的配方为:酵母浸粉2.5-5克、蛋白胨2.5-5克、甘油2.5-5毫升、NaCl2.5克、磷酸二氢钾2.5-5克,加水至500毫升;制备液体培养基b,并在121℃温度下灭菌20分钟,将杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)菌体无菌操作接入培养基b,置于温度28-30℃,160-180rpm,摇瓶培养24-48小时,至发酵液中细胞生长至对数期,OD600达到1.0±0.4,获得杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)种子液;所述液体发酵培养基b的配方为:酵母浸粉2.5-5克、蛋白胨2.5-5克、甘油2.5-5毫升、磷酸二氢钾2.5-5克、硫酸镁1-2.5克,加水至500毫升。步骤二具体为:制备液体发酵培养基c,并进行常灭菌处理后,无菌操作以5-10%的接种量加入步骤一所获得的革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8种子液至培养基c,恒定温度28±4℃,搅拌速度160-180rpm,通风量0.25-0.29M3/min,罐压0.07-0.08MPa,持续发酵48-72小时,显微镜检测计数发酵液中细胞数达0.5-0.8×109个/毫升时终止发酵;所述液体发酵培养基c的配方为:蛋白胨250-280克、酵母膏200-250、液体石蜡150-200毫升、甘油100-150毫升、NaCl10-25克、磷酸二氢钾25-50克,加水至50升;制备液体发酵培养基d,并进行常灭菌处理后,无菌操作以5-10%的接种量加入步骤一所获得的杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)种子液至发酵培养基d,恒定温度28±4℃,搅拌速度160-180rpm,通风量0.25-0.29M3/min,罐压0.07-0.08MPa,持续发酵24-48小时,显微镜检测计数发酵液中细胞数达0.5-1.0×109个/毫升时终止发酵;所述液体发酵培养基d的配方为:蛋白胨200-250克、酵母膏200-250、液体石蜡200-250毫升、磷酸二氢钾25-50克、硫酸镁10-25克,加水至50升。步骤三具体为:将步骤二获得的液体发酵物分别置于离心机,4000-6000转/分,离心15-20分钟,分离除去发酵液中水份,获得灰白色粘稠状细胞菌体A及菌体B。步骤四具体为:按照菌体A:菌体B:甘油的体积比1:1:(1.5-2)的比例加入甘油本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.农药氧化乐果降解微生物复合菌剂,其特征在于:/n所述复合菌剂包括革兰氏假单胞菌(

【技术特征摘要】
1.农药氧化乐果降解微生物复合菌剂,其特征在于:
所述复合菌剂包括革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8或革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8和杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)混合。


2.根据权利要求1所述的农药氧化乐果降解微生物复合菌剂,其特征在于:
革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8及杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)的混合比例为1:1。


3.根据权利要求2所述的农药氧化乐果降解微生物复合菌剂,其特征在于:
所述复合菌剂还包括甘油、活性炭和高岭土。


4.根据权利要求3所述的农药氧化乐果降解微生物复合菌剂,其特征在于:
革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8、杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)、甘油、活性炭和高岭土的混合比例为1:1:(1.5-2):3:(2.5-3)。


5.根据权利要求4所述的农药氧化乐果降解微生物复合菌剂,其特征在于:
所述革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8于2019年9月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNO.18606。


6.如权利要求5所述的农药氧化乐果降解微生物复合菌剂的制备方法,其特征在于:
包括以下步骤:
步骤一:对革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8菌体进行种子液体培养,获得革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8种子液;
对杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)菌体进行种子液体培养,获得杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)种子液;
步骤二:分别对革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8、杀香鱼假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)进行液体发酵;
步骤三:液体发酵物分别离心得到液体发酵菌体A、菌体B;
步骤四:将菌体A、菌体B与甘油、活性炭、高岭土按1:1:(1.5-2):3:(2.5-3)的质量比混合,制得农药氧化乐果降解微生物复合菌剂。


7.根据权利要求6所述的农药氧化乐果降解微生物复合菌剂的制备方法,其特征在于:
步骤一具体为:
制备液体发酵培养基a,并在121℃温度下灭菌20分钟,将革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgraminis)ZZY-C13-1-8菌体无菌操作接入培养基a,置于温度28-30℃,摇瓶培养,160-180rpm,48-72小时,至发酵液中细胞生长至对数期,OD600达到1.5±0.4,获得革兰氏假单胞菌(Pseudomonasgr...

【专利技术属性】
技术研发人员:陈锐瞿佳孙晓宇门欣赵玲侠沈卫荣
申请(专利权)人:陕西省微生物研究所
类型:发明
国别省市:陕西;61

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