鸽支原体培养基及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种新型高效的鸽支原体培养基FG3，该培养基是在支原体常规培养基FM‑4的基础上加入了鸽血清和如SEQ ID：2序列所示的多肽T3。鸽支原体在FG3培养基中能够实现迅速生长增殖，并且达到很高的活菌滴度,这有助于鸽支原体的快速检测和诊断，有助于鸽支原体的快速分离和解析，有助于鸽支原体疫苗和治疗药物的开发，有助于鸽支原体病机理机制研究。

Mycoplasma pigeon culture medium and its preparation

【技术实现步骤摘要】
鸽支原体培养基及其制备方法
本专利技术涉及微生物领域，具体涉及鸽支原体培养基及其应用。
技术介绍
支原体是目前已知能营独立生活、体积最小、构造最简单的原核微生物，其无细胞壁、无鞭毛、不运动，革兰氏染色阴性，但不易着色，在吉姆萨染色片中表现多形态球状体。鸽支原体病是鸽群中常见的一种致死性疾病，其病原菌为鸽支原体，主要特征是病鸽群有严重的呼吸道症状，表现为气囊浑浊，鼻道、气管及支气管内有干酪样分泌物，病鸽食欲减退，逐渐消瘦，最后往往会因衰竭或喉头被干酪样物堵塞而死，严重影响了信鸽或肉鸽的健康和生命，给养殖户和养殖场造成严重的经济损失。鸽支原体病常伴随支原体与大肠杆菌、沙门氏杆菌等的混合感染，病情更加凶猛。对于鸽支原体病，分离培养是诊断支原体感染的金标准。除诊断外，支原体的分离培养有助于对支原体进行分型和生理生化研究、解析致病机制、开发疫苗和治疗药物等。目前鸽支原体的培养基主要有改良的FM-4培养基和改良的Frey氏培养基等。然而支原体对培养基的营养要求高，生长缓慢，分离难度大，现有技术培养基培养鸽支原体存在培养时间较长、活菌滴度较低、繁殖能力较差等问题，因此亟需开发适合于鸽支原体快速有效培养的培养基。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供适合于鸽支原体快速有效培养的培养基及其配制方法和应用。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案如下：本专利技术提供了两种适合于鸽支原体快速有效培养的培养基，分别是FG1和FG3培养基，均各自包括液体培养基和固体培养基。FG1液体培养基的配方为：FM-4基础培养液75%-78%，酵母浸出液（25%）8%-12%，猪血清2%-6%，鸽血清0.4%-1.0%，多肽T1（1ng/ml）1.0%-1.5%，青霉素（1×105IU/ml）1%，酚红（1%）0.002%，pH值调至7.6-7.8。优选地，最佳的FG1液体培养基配方为：FM-4基础培养液78%，酵母浸出液（25%）10%，猪血清4%，鸽血清0.5%，多肽T1（1ng/ml）1.2%，青霉素（1×105IU/ml）1%，酚红（1%）0.002%，pH值调至7.6-7.8。FG3液体培养基配方为：FM-4基础培养液75%-78%，酵母浸出液（25%）8%-12%，猪血清2%-6%，鸽血清0.8-1.2%，多肽T3（1ng/ml）1.5%-2.0%，青霉素（1×105IU/ml）1%，酚红（1%）0.002%，pH值调至7.6-7.8。优选地，最佳的FG3液体培养基配方为：FM-4基础培养液78%，酵母浸出液（25%）10%，猪血清4%，鸽血清1.0%，多肽T3（1ng/ml）1.8%，青霉素（1×105IU/ml）1%，酚红（1%）0.002%，pH值调至7.6-7.8。其中，配方中各液体组分的百分比添加量均是指体积体积分数，以100单位体积的FG液体培养基最佳配方具体来说，包含的FM-4基础培养液78%是指其中含有78单位体积的FM-4基础培养液，酵母浸出液（25%）10%是指其中含有10单位体积的酵母浸出液（25%），猪血清4%是指其中含有4单位体积的猪血清，鸽血清0.5%或1.0%是指其中含有0.5或1.0单位体积的鸽血清，多肽（1ng/ml）1.2%或1.8%是指其中含有1.2单位体积（多肽T1）或1.8单位体积（多肽T3）的多肽（1ng/ml），青霉素（1×105IU/ml）1%是指其中含有1单位体积的青霉素（1×105IU/ml），酚红（1%）0.002%是指其中含有0.002单位体积的酚红（1%）。25%酵母浸出液和1%的酚红中的百分比均是指质量体积分数，分别是指100ml酵母浸出液中含有25g的酵母粉/膏和1ml的酚红溶液中含有0.01g的酚红。添加的FM-4基础培养液事先已经高压灭菌过了（115℃高压蒸汽灭菌20min），而25%的酵母浸出液、猪血清、鸽血清、1ng/ml的多肽T1和T3、1×105IU/ml的青霉素和1%的酚红配制后均采用0.22μm滤膜过滤除菌。多肽T1和T3序列分别如SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示，可委托生物公司合成，纯度不低于95%。用于鸽支原体高效培养的FG（包括FG1和FG3）液体培养基制备方法为：（1）先配制FM-4基础培养液，1000ml的FM-4基础培养液的配制方法为：称取NaCl5.0g，KCl0.4g,MgSO4‧7H2O0.2g，Na2HPO4‧12H2O1.6g，KH2PO40.1g，葡萄糖10.0g，水解乳蛋白5.0g，溶于超纯水中，115℃高压蒸汽灭菌20min后晾至室温备用，可依据该配方按比例配制各所需体积的FM-4基础培养液；（2）根据所需配制的FG液体培养基体积按配方中的体积体积分数将事先配好并经0.22μm滤膜过滤除菌了的酵母浸出液，猪血清，鸽血清，多肽T1（FG1液体培养基）或多肽T3（FG3液体培养基），青霉素和酚红充分混匀；（3）在无菌条件下，根据所需配制的FG液体培养基体积按配方中的体积体积分数取（1）中已经高压灭菌的FM-4基础培养液，加入（2）中经过滤除菌的混合液，用灭菌水补齐定容，用灭菌的1mol/L的NaOH将pH值调至7.6-7.8，充分摇匀并分装，最后置于4℃保存备用。在FG液体培养基的基础上通过添加1.2%质量体积分数的琼脂组分制成FG固体培养基。FG（包括FG1和FG3）固体培养基的配制方法为：FM-4基础培养液加入1.2%质量体积分数的琼脂，115℃高压蒸汽灭菌20min，调成FG液体培养基组份，并用灭菌的1mol/L的NaOH将pH值调至7.6-7.8，倾倒至平皿制成平板，4℃存放。FG培养基对于鸽支原体的培养条件为37℃和5%CO2。FG培养基可以应用于鸽支原体的快速检测和诊断、鸽支原体的快速分离和解析、鸽支原体疫苗和治疗药物的开发以及鸽支原体病机理机制研究中。本专利技术提供的FG培养基是一种新型高效的鸽支原体培养基，鸽支原体在FG培养基中能够实现迅速生长增殖，并且达到很高的活菌滴度,有助于鸽支原体的快速检测和诊断，有助于鸽支原体的快速分离和解析，有助于鸽支原体疫苗和治疗药物的开发，有助于鸽支原体病机理机制研究。具体实施方式以下结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。实施例1鸽支原体高效培养基探究病鸽来源于福建省福州市某禽类养殖场，病鸽起初出现流鼻涕、打喷嚏和咳嗽症状，鼻涕由水样清变为粘液性，之后出现食欲衰退，体重锐减，最后出现呼吸困难并迅速死亡（共74只）。死亡病鸽经解剖发现鼻腔和气管发炎，粘膜增厚，有大量粘性、脓性分泌物，鼻瘤有灰黄色沉积物；口腔和咽喉严重发炎和肿大，气囊膜混浊，伴有干酪样渗出物沉积；出现气囊炎、鼻炎、肺炎和心囊炎；取其气囊渗出物等病变组织，从中分离出了支原体株KM和大肠杆菌菌株KE，诊断为支原体和大肠杆菌混合感染。该禽类养殖场肉鸽的此次支原体和大肠杆菌混合感染相比于之前发生的单纯支原体感染，其鸽子从发病到死亡的时间更加迅速（不足2天），并且相同取样和吉姆萨染色处理后镜下见到的处理液中支原体的密度更高（约达10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸽支原体液体培养基FG3，其特征在于FG3液体培养基的配方为：FM-4基础培养液 75%-78%，酵母浸出液（25%） 8%-12%，猪血清 2%-6%，鸽血清 0.8-1.2%，多肽T3（1ng/ml）1.5%-2.0%，青霉素（1×10

【技术特征摘要】
1.一种鸽支原体液体培养基FG3，其特征在于FG3液体培养基的配方为：FM-4基础培养液75%-78%，酵母浸出液（25%）8%-12%，猪血清2%-6%，鸽血清0.8-1.2%，多肽T3（1ng/ml）1.5%-2.0%，青霉素（1×105IU/ml）1%，酚红（1%）0.002%，pH值调至7.6-7.8；配方中各液体组分的百分比添加量均是指体积体积分数,25%酵母浸出液和1%的酚红中的百分比均是指质量体积分数；添加的FM-4基础培养液事先已经高压灭菌过了，而25%的酵母浸出液、猪血清、鸽血清、1ng/ml的多肽T3、1×105IU/ml的青霉素和1%的酚红配制后均采用0.22μm滤膜过滤除菌；多肽T3序列如SEQIDNO：2所示，可委托生物公司合成，纯度不低于95%。


2.根据权利要求1所述的鸽支原体液体培养基FG3，其特征在于最佳的FG3液体培养基配方为：FM-4基础培养液78%，酵母浸出液（25%）10%，猪血清4%，鸽血清1.0%，多肽T3（1ng/ml）1.8%，青霉素（1×105IU/ml）1%，酚红（1%）0.002%，pH值调至7.6-7.8。


3.如权利要求1或2所述的鸽支原体液体培养基FG3的制备方法，其特征在于FG3液体培养基制备方法为：（1）先配制FM-4基础培养液，1000ml的FM-4基础培养液的配制方法为：称取NaCl5.0g，KCl0.4g,MgSO4‧7H2O0.2g，Na2HPO4‧12H2O1.6g，...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄明水，陈永鑫，
申请(专利权)人：黄明水，
类型：发明
国别省市：福建;35