一种快速构建微量肽库的方法及其合成装置制造方法及图纸

本发明专利技术提供了一种快速构建微量肽库的方法及其合成装置，属于多肽合成领域。它解决了现有SPOT法构建肽库效率低等问题。一种快速构建微量肽库的方法，包括如下步骤：S01：将片层固相载体的表面衍生化；S02：将片层固相载体加工成多个结构单位；S03：将结构单位填入反应槽中；S04：往反应槽中加入偶联反应液进行偶联反应，反应后直接加入洗涤溶剂对反应槽进行洗涤；洗涤完成后往反应槽中加入脱保护反应液进行脱保护反应，反应后直接加入洗涤溶剂对反应槽进行洗涤；S05：重复上述步骤S04,逐一偶联氨基酸，偶联不同的氨基酸选择该氨基酸对应的偶联反应液，完成片层固相载体负载全保护肽链；裂解后得到裸肽或负载的裸肽。本发明专利技术具有构建肽库效率高等优点。

A method for rapid construction of micro peptide library and its synthesis device

【技术实现步骤摘要】
一种快速构建微量肽库的方法及其合成装置
本专利技术属于多肽合成领域，特别涉及一种快速构建微量肽库的方法及其合成装置。
技术介绍
多肽类新药研发的初期主要是药物先导化合物的发现和结构优化过程。此过程中药物化学家对目标多肽的重量需求不是很大，但是对其序列结构多样性具有较高要求。因此，快速构建含有大量结构多样性成员的微量肽库以供相应的药物化学研究具有非常重要的意义。传统的SPOT法构建肽库，开始于一张片层结构的载体；通过向预先规划好的各个位点上滴加反应液来实现偶联和脱保护过程；这样将每个氨基酸合成砌块逐一偶联到载体上，最终构建成整条肽链。SPOT构建肽库法因其成本低，易于操作，实时检测方便等特点在相关领域得以广泛应用。但是传统的SPOT法存在一些缺点：首先，特定片层载体表面阵列位点比较密集，合成过程中反应液的滴加操作需十分小心谨慎，以避免影响相邻位点。其次，多肽合成过程中反应液的量不可多加，只能等待其慢慢扩散，否则影响相邻位点。再者，反应后各位点的洗涤比较麻烦，需等待载体表面的溶液或溶剂完全阴干或风干之后才能进行下轮洗涤，否则影响相邻位点。传统SPOT方法构建肽库过程中，由于存在上述问题，导致其合成效率不高，反应过程耗时费力且周期较长。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是针对现有技术中存在的上述问题，提供了一种快速构建微量肽库的方法，本专利技术的第二个目的是提供一种用于实现上述方法的合成装置。本专利技术的第一个目的可通过下列技术方案来实现：一种快速构建微量肽库的方法，其特征在于，包括如下步骤：S01：将片层固相载体的表面衍生化；S02：将片层固相载体加工成多个结构单位；S03：将结构单位填入反应槽中；S04：往反应槽中加入偶联反应液进行偶联反应，反应后直接加入洗涤溶剂对反应槽进行洗涤；洗涤完成后往反应槽中加入脱保护反应液进行脱保护反应，反应后直接加入洗涤溶剂对反应槽进行洗涤；S05：重复上述步骤S04,逐一偶联氨基酸，偶联不同的氨基酸选择该氨基酸对应的偶联反应液，完成片层固相载体负载的全保护肽链；S06：步骤S05中得到的片层固相载体负载的全保护肽链，经裂解液裂解后，得到裸肽或者片层固相载体负载的裸肽。优选的，当每一个结构单位偶联不同的氨基酸时，每一个结构单位位于不同的反应槽中。优选的，当多个结构单位需要偶联相同的氨基酸时，可将需要偶联相同氨基酸的结构单位标注编码或按次序填入相同的反应槽中，同时进行偶联反应。优选的，当第一个偶联的氨基酸相同时，步骤S01和步骤S02之间还包括步骤S07，步骤S07：将衍生化后的片层固相载体表面浸润偶联反应液，反应后用洗涤溶剂进行洗涤；洗涤后浸润脱保护反应液进行脱保护反应，反应后用洗涤溶剂进行洗涤，得到衍生化的负载有第一个氨基酸的片层固相载体。优选的，步骤S01中，片层固相载体为纸片、多孔聚苯乙烯薄片、玻璃薄片、聚氟乙烯薄膜中的一种。优选的，步骤S01中，用于连接第一个氨基酸的连接分子为：4-[(2,4-二甲氧基苯基)(Fmoc-氨基)甲基]苯氧乙酸；3-羟基-9H-占吨-9-酮；4-羟甲基苯乙酸；4-苄氧基苯甲醇，苄溴或苄氯的衍生物中的一种。优选的，步骤S02中，结构单元的形状为圆形、正方形、长方形、正三角形中的一种。优选的，偶联反应液中的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、四氢呋喃、N’N’-二甲基甲酰胺、1,4-二氧六环、乙腈中的一种或任意组合；偶联反应液中的缩合试剂为N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N-二环己基碳二亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱、O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐/有机碱、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱、O-苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱中的一种或任意组合；所述的有机碱为N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、N-甲基吗啡啉中的一种或任意组合；偶联反应液中的活化试剂为N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、3-羟基-1,2,3-苯并三嗪-4(3H)-酮或N-羟基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺中的一种或任意组合。优选的，脱保护反应液中的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、四氢呋喃、N’N’-二甲基甲酰胺、1,4-二氧六环、乙腈中的一种或任意组合；脱保护反应液中的脱保护试剂为三氟乙酸(TFA)、氯化氢(HCl)、溴化氢(HBr)、哌啶、二乙胺、三乙胺、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯中的一种或任意组合。优选的，去除侧链保护基和断裂肽链与linker之间化学键所用的方法为酸解反应、皂化反应或氨解反应，所述的酸解反应中的酸解液为a、b、c组成的混合溶液：a，选自甲酸、乙酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸、卤化氢中的一种或任意化合物的组合；b，选自苯甲硫醚、苯甲醚、乙二硫醇、三异丙基硅烷、苯酚、吲哚中的一种或任意化合物的组合；c，选自极性溶剂中的一种或几种组成的混合溶剂；所述皂化反应的皂化液为d、e、f组成的混合溶液：d，选自NaOH、KOH、LiOH、CsOH、1,8-二氮杂双环(5.4.0)十一-7-烯、K2CO3、Cs2CO3中的一种或任意组合；e，水；f，选自极性溶剂中的一种或几种组成的混合溶剂；所述氨解反应的氨解液为x，y，z组成的混合溶液：x，选自乙胺、液氨、脂肪氨、芳香胺的一种或任意组合；y，水；z，选自极性溶剂中的一种或几种组成的混合溶剂。本专利技术的第二个目的是提供一种用于实现上述方法的合成装置，其特征在于，包括底座，所述的底座设置有多个用于容纳载体和反应液的反应槽，所述反应槽的底部设置有排液孔。优选的，所述的反应槽内的载体完全覆盖排液孔。优选的，还包括用于盖住反应槽的顶盖。优选的，所述的顶盖设置有用于和每个反应槽开口一一对应的定位挡圈。优选的，所述的顶盖设置有多个加液孔，所述加液孔位于定位挡圈的中心。优选的，所述的顶盖上设置有用于标记反应槽的标识。优选的，所述加液孔的直径为5mm。优选的，所述排液孔的直径为2mm。优选的，还包括盛液盘，所述盛液盘的高度低于底座的高度，所述的盛液盘用于容纳洗涤液。优选的，所述的底座和顶盖均采用透明材料制成。本专利技术的工作原理：首先，将片层固相载体的表面衍生化。载体衍生化的过程，就是载体和连接分子以共价键相连接的过程。片层固相载体表面本身带有的官能团比较密集，位阻较大，离载体较近，活性不高等原因，导致后续第一个氨基酸偶联载体收率较低。为了解决上述问题，将载体表面偶联一个连接分子(也即衍生化)，方便连接第一个氨基酸。然后将片层固相载体物理加工成多本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速构建微量肽库的方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS01：将片层固相载体的表面衍生化；/nS02：将片层固相载体加工成多个结构单位；/nS03：将结构单位填入反应槽(2)中；/nS04：往反应槽(2)中加入偶联反应液进行偶联反应，反应后直接加入洗涤溶剂对反应槽(2)进行洗涤；洗涤完成后往反应槽(2)中加入脱保护反应液进行脱保护反应，反应后直接加入洗涤溶剂对反应槽(2)进行洗涤；/nS05：重复上述步骤S04,逐一偶联氨基酸，偶联不同的氨基酸选择该氨基酸对应的偶联反应液，完成片层固相载体负载全保护肽链；/nS06：步骤S05中得到的片层固相载体负载的全保护肽链，经裂解液裂解后，得到裸肽或者固相载体负载的裸肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速构建微量肽库的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S01：将片层固相载体的表面衍生化；
S02：将片层固相载体加工成多个结构单位；
S03：将结构单位填入反应槽(2)中；
S04：往反应槽(2)中加入偶联反应液进行偶联反应，反应后直接加入洗涤溶剂对反应槽(2)进行洗涤；洗涤完成后往反应槽(2)中加入脱保护反应液进行脱保护反应，反应后直接加入洗涤溶剂对反应槽(2)进行洗涤；
S05：重复上述步骤S04,逐一偶联氨基酸，偶联不同的氨基酸选择该氨基酸对应的偶联反应液，完成片层固相载体负载全保护肽链；
S06：步骤S05中得到的片层固相载体负载的全保护肽链，经裂解液裂解后，得到裸肽或者固相载体负载的裸肽。


2.根据权利要求1所述的一种快速构建微量肽库的方法，其特征在于，当每一个结构单位偶联不同的氨基酸时，每一个结构单位位于不同的反应槽(2)中。


3.根据权利要求1所述的一种快速构建微量肽库的方法，其特征在于，当多个结构单位需要偶联相同的氨基酸时，可将需要偶联相同氨基酸的结构单位标注编码或按次序填入相同的反应槽(2)中，同时进行偶联反应。


4.根据权利要求1所述的一种快速构建微量肽库的方法，其特征在于，当所有结构单位第一个偶联的氨基酸相同时，步骤S01和步骤S02之间还包括步骤S07，步骤S07：将衍生化后的片层固相载体表面浸润偶联反应液，...

【专利技术属性】
技术研发人员：章砚东，任天天，邱鹤，
申请(专利权)人：浙江昂拓莱司生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33