【技术实现步骤摘要】
一种从金花葵花中同时分离纯化6种黄酮化合物的方法
本专利技术涉及一种分离纯化黄酮类化合物的方法，具体涉及从金花葵花中同时分离纯化高纯度芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷、杨梅素和槲皮素的方法。属于天然化合物提取和分离领域。
技术介绍
金花葵花为锦葵科秋葵属Malvaceae一年生草本植物金花葵HibiseumanihotL.的干燥花冠，含有多种活性成分，在药品、食品或保健品等行业中具有较好的应用前景。近年，金花葵花作为提取黄酮类物质的重要来源受到各方关注。已有研究表明，芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、杨梅素和槲皮素是金花葵花的主要黄酮类化合物，其含量分别为0.0748％、1.0763％、0.5820％、0.1185％和0.0527％(沈阳药科大学学报，2019，36，118-122)，此外，还有研究报道棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷为金花葵花中含量最高的黄酮类化合物，达到3.411％(Journalofchromatographicscience，2009，47，206-210)。因此，芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、...
【技术保护点】
1.一种从金花葵花中同时分离纯化6种黄酮化合物的方法，其特征在于：/n1)金花葵花提取液的制备：精密称取一定量干燥金花葵花粗粉末，用已经优化的提取条件：70％乙醇水溶液为提取溶剂，料液比为1:20g/mL，微波提取温度为80℃，微波提取时间10min，然后重复提取三次，收集上清液，即得金花葵花提取液；/n2)溶剂萃取：将步骤1)得到的金花葵提取液依次使用等量的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，多次重复萃取，合并萃取液，减压浓缩，得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相浸膏；对金花葵花各萃取相浸膏进行分析，表明金花葵花黄酮主要富集在乙酸乙酯相、正丁醇相和水相，根据各萃取相中黄...
【技术特征摘要】
1.一种从金花葵花中同时分离纯化6种黄酮化合物的方法，其特征在于：
1)金花葵花提取液的制备：精密称取一定量干燥金花葵花粗粉末，用已经优化的提取条件：70％乙醇水溶液为提取溶剂，料液比为1:20g/mL，微波提取温度为80℃，微波提取时间10min，然后重复提取三次，收集上清液，即得金花葵花提取液；
2)溶剂萃取：将步骤1)得到的金花葵提取液依次使用等量的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，多次重复萃取，合并萃取液，减压浓缩，得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相浸膏；对金花葵花各萃取相浸膏进行分析，表明金花葵花黄酮主要富集在乙酸乙酯相、正丁醇相和水相，根据各萃取相中黄酮单体含量的差异进行下一步分离纯化；
3)聚酰胺快速制备色谱法纯化：金花葵花黄酮化合物结构类似，种类多，因此采用聚酰胺快速制备色谱对步骤2)得到的乙酸乙酯相浸膏进行初步分离纯化，经快速制备色谱分离纯化，采用UV检测器在360nm进行检测，分别收集有吸收的组分物质；快速制备色谱的纯化条件如下：
色谱柱：以聚酰胺为填料的自填装色谱柱(Φ22mm╳300mm，75～150μm，30g)；流动相：A相：水；B相：乙醇；流速：30mL/min；压力上限：200psi；上样量：乙酸乙酯相(10mL/次)；梯度洗脱条件：0-10min：B相0；10-25min：B相10％；25-50min：B相30％；50-75min：B相50％；75-85min：B相70％；85-100min：B相95％；
采用高效液相色谱色谱法对各馏分收集物进行分析检测，减压浓缩，真空干燥，获得三组混合物为乙酸乙酯相-Ⅰ、乙酸乙酯相-Ⅱ和乙酸乙酯相-Ⅲ；
4)制备型高效液相色谱纯化：将上述无法完全用聚酰胺快速制备色谱分离纯化的混合组分乙酸乙酯相-Ⅰ、乙酸乙酯相-Ⅱ、乙酸乙酯相-Ⅲ、正丁醇相和水相用制备型高效液相色谱进一步分离纯化。综合考虑制备色谱体系的承受压力、产品纯度及溶剂消耗，优化制备色谱条件得出各组分的最佳制备型高效液相色谱条件，按照该条件多次重复进样，对各馏分收集并分析检测，减压浓缩，真空干燥，获得芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷、杨梅素和槲皮素等6种黄酮化合物，其纯度均大于95％。
2.根据权利要求1所述的一种从金花葵花中同时分离纯化6种黄酮化合物的方法，其特征在于：加入等量的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取3-5次至金花葵花黄酮提取液至颜色较浅，利用金花葵花黄酮在各萃取相中的溶解度不同实现初步的分离纯化。
3.根据权...
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