基于miRNA检测的试剂盒及其在癌症早期筛查中的应用制造技术

本发明专利技术涉及miRNA检测技术领域，具体提供一种基于miRNA检测的试剂盒及其在癌症早期筛查中的应用。该基于miRNA检测的试剂盒包含MIR202、MIR508、MIR509‑3、MIR205、MIR182、MIR513C、MIR183及MIR513B这八种miRNA的引物。本发明专利技术的试剂盒对卵巢癌的早期诊断具有灵敏度高、特异性良好、准确性高等特点，并且能够降低筛查成本。

Kit based on miRNA detection and its application in early cancer screening

【技术实现步骤摘要】
基于miRNA检测的试剂盒及其在癌症早期筛查中的应用
本专利技术属于miRNA检测
，具体涉及一种基于miRNA检测的试剂盒及其在癌症早期筛查中的应用。
技术介绍
筛查是指在一些尚无相关疾病症状的健康群体中进行一些简单的测试，来筛选出有疾病的个体的过程。目前大部分癌症都是在中晚期阶段才被检测出来，错过了癌症的最佳治疗期，极大影响了癌症治疗效果。世界卫生组织提出，三分之一的癌症可以通过早期发现得到根治。通过规范化筛查早期发现并进行手术治疗，可以有效减轻癌症患者的痛苦和经济负担。目前筛查癌症的方法主要是通过化验血肿瘤指标及B超、CT、MRI、PET-CT等检查，但这些方法的敏感性和特异性均不高，发现有异常时往往已是中晚期。卵巢癌(Ovariancancer，简称OC)是美国和世界各地妇女中最致命的妇科恶性肿瘤。约75％的患者被诊断时已经处于晚期，肿瘤已扩散到腹部，因此5年生存率仅为10-30％。处于一期卵巢癌患者存活率能达到90％，但由于缺乏有效的筛查策略和早期检测标记物，通过早期诊断筛查出这些患者具有一定困难。由于早期和晚期卵巢癌患者的长期存活率具有明显差异，一种有效的早期诊断方法显得尤为重要，且该方法必须是易于操作，低成本，安全，高灵敏度高特异性具有高阳性预测值。目前针对卵巢癌的常规诊断方法主要有盆腔检查、经阴道超声检查、血清CA125检查。其中，盆腔检查是指对女性生殖系统的检查，包括外阴、阴道、子宫、卵巢、输卵管、膀胱、直肠等部位。主要包括：对外生殖器进行观察或借助窥阴器对阴道壁和子宫颈进行观察，触诊，采取子宫颈细胞样品进行巴氏试验等，检查过程往往只需几分钟。通过这些检查来判断女性盆腔器官是否有异常，从而达到卵巢癌诊断的目的。但是常规盆腔检查对人群灵敏度较差，不是非常有效的筛查工具。经阴道超声检查指向阴道放入传感器，传感器不断发出声波并记录反射回的声波信息，最后在仪器上成像，通过成像信息评估阴道是否出现异常状况。经阴道超声检查在评估卵巢状况比其他成像方法更具优势，其能更清晰地观察卵巢的形态学特征，且在一定程度上能判断卵巢癌的恶化程度。经阴道超声检查同样存在对人群灵敏度差的问题。CA125是一种糖磷脂酰肌醇连结蛋白，是在卵巢癌检查中使用最广的肿瘤标记物。CA125由体腔上皮细胞表达并且存在于间皮细胞组织中，包括胸膜，心包膜和腹膜。CA125也来源于米勒管上皮组织中，如输卵管、子宫内膜以及宫颈上皮。正常卵巢表面上皮细胞不表达CA125。普遍接受的正常血清CA125上限是35U/mL。临床上通过检测血液中CA125表达水平是否异常可以对卵巢癌进行筛查，CA125是目前卵巢癌检测的金标准。但是CA125检查对早期癌症的灵敏度差，而且特异性有限。在每年接受常规盆腔检查的无症状女性中，并没有相关数据显示其检查出卵巢癌的频率，而且目前尚无证据表明通过盆腔检查进行卵巢癌早筛能改善总体生存率。经阴道超声检查无法检查所有女性的卵巢，特别是绝经期后的女性，因此其应用范围具有一定限制。80％的晚期卵巢癌患者能检测到血清CA125水平提高，但只有50-60％的早期卵巢癌患者CA125水平会提高。此外，其他癌症患者如胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、肺癌等血清CA125也会提高，憩室炎、肝硬化、子宫内膜异位症和其他良性疾病，以及月经或怀孕等情况下均可能使CA125水平提高，这会导致一些假阳性结果。因此通过检测CA125水平来对卵巢癌进行早筛的灵敏度和特异性不高。三项大型随机临床试验PLCO7(前列腺癌、肺癌、结直肠癌和卵巢癌)、UKTOCS8(英国卵巢癌筛查合作试验)和最近得出结论的USPSTF9(美国预防服务工作组)对CA125以及其他标记物和超声波进行了测试，但没有提供任何线索来证明CA125可以作为筛查工具，试验没有显示出任何总体生存效益。另外，成熟的miRNA是一种由大约18-24个核苷酸组成的内源性非编码单链小RNA，能通过转录后修饰在基因调控中起关键作用，在卵巢癌和其他癌症中发现miRNA被解除了调控。miRNA不容易在血液、组织、粪便和其他体液中降解，是一种稳定的非侵入性生物标志物，稳定性优于DNA和mRNA。体内miRNA数量会随着肿瘤发展过程发生变化，已经有研究表明正常卵巢组织和卵巢癌组织中的miRNA表达水平存在差异，因此通过检测组织miRNA水平可以对卵巢癌进行预后、监测等。血清miRNA具有良好稳定性，对核糖核酸酶、温度和pH不敏感，能长时间保存，可被反复冻存，且检查简便、成本低，已有研究表明其可作为有效的肿瘤标志物，用于癌症诊断。组织miRNA检测虽然能用于卵巢癌的预后、监测，但不能用于卵巢癌早筛，因为卵巢癌早期阶段无法获取组织样本，而且循环无细胞miRNA的异质性限制了它们的特异性。血清miRNA虽然可作为有效的肿瘤标志物，但目前还没有研究使用早期卵巢癌患者来发现有效的生物标志物。
技术实现思路
针对目前市面上对癌症尤其是卵巢癌筛查的方法存在灵敏度低、特异性有限等问题，本专利技术提供一种基于miRNA检测的试剂盒及其在癌症早期筛查中的应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：一种基于miRNA检测的试剂盒，所述试剂盒包含MIR202、MIR508、MIR509-3、MIR205、MIR182、MIR513C、MIR183及MIR513B这八种miRNA的引物。相应地，如上所述的基于miRNA检测的试剂盒在癌症早期筛查中的应用。本专利技术的技术效果为：相对于现有技术，本专利技术上述提供的基于miRNA检测的试剂盒由于其中含有MIR202、MIR508、MIR509-3、MIR205、MIR182、MIR513C、MIR183及MIR513B这八种miRNA的引物，因而对卵巢癌的早期诊断具有灵敏度高、特异性良好、准确性高等特点，此外能够降低卵巢癌的筛查成本。本专利技术提供的基于miRNA检测的试剂盒在癌症早期筛查中的应用，能够高效、快速地筛查出早期癌症，以便于快速应对，降低治疗怠慢引发的启发风险，而且其应用具有成本低、效率高等特点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为32种miRNA在肿瘤组织和正常组织中的表达情况；图2为以GSE106817miRNA微阵列队列来训练OCaMIR的逻辑回归模型得到的ROC曲线；图3为以GSE106817miRNA微阵列队列来训练OCaMIR的逻辑回归模型得到的OCaMIR风险评分图；图4为将训练得到的逻辑回归模型应用到GSE31568miRNA回顾性血清微阵列队列中进行验证得到的ROC曲线；图5为将训练得到的逻辑回归模型应用到GSE31568miRNA回顾性血清微阵列队列中进行验证得到的OCaMIR风险评分图；图6为将训练本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于miRNA检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含MIR202、MIR508、MIR509-3、MIR205、MIR182、MIR513C、MIR183及MIR513B这八种miRNA的引物。/n

【技术特征摘要】
1.基于miRNA检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含MIR202、MIR508、MIR509-3、MIR205、MIR182、MIR513C、MIR183及MIR513B这八种miRNA的引物。


2.如权利要求1所述的miRNA检测的试剂盒，其特征在于，所述八种miRNA的引物包括反转录引物、qPCR正向引物和qPCR反向引物；
其中所述八种miRNA的反转录引物依次为：
5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTTCCCA，
5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTCTACT，
5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCATGAT，
5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACGAACTT，
5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTAGTTG，
5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTCTTCT，
5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTTATGG，
5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTCCTCT，
所述八种miRNA的qPCR正向引物依次为：
GUCCAGUUUUCCCAGGAAGAGGTATAGGGCA，

【专利技术属性】
技术研发人员：陈松峰，徐涛，邹恒，
申请(专利权)人：晶准生物医药集团有限公司，
类型：发明
国别省市：中国香港;HK