细胞色素酶CYP26A1在制备治疗神经病理性疼痛的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了细胞色素酶CYP26A1作为靶点在制备治疗神经病理性疼痛药物中的应用。本发明专利技术利用小鼠腰5脊神经结扎（SNL）方法诱导神经病理性疼痛，在手术后10天提取模型组和假手术组小鼠脊髓腰5节段的mRNA进行基因芯片检测，筛选神经病理性疼痛相关基因，为研发治疗神经病理性疼痛药物寻找潜在靶点。结果显示CYP26A1在神经病理性疼痛的维持阶段表达增加，促进神经病理性疼痛维持发展，抑制其表达或功能都能够有效缓解神经病理性疼痛。基于此，以细胞色素酶CYP26A1为靶点，可将抑制其表达和功能的抑制剂用以筛选神经病理性疼痛治疗药物、制备神经病理性疼痛治疗药物或制备神经病理性疼痛诊断药物。

The application of cyp26a1 in the preparation of drugs for the treatment of neuropathic pain

【技术实现步骤摘要】
细胞色素酶CYP26A1在制备治疗神经病理性疼痛的药物中的应用
本专利技术属于医药
，具体涉及细胞色素酶CYP26A1作为靶点在制备治疗神经病理性疼痛的药物中的应用。
技术介绍
疼痛作为躯体感觉的一种，可以在机体受到伤害时起到警示作用，引起机体一系列防御性保护反应避免受到进一步伤害。但当疼痛失去了正常保护功能，数月或数年的持续存在，就变成了危害身心健康的病理性疼痛(慢性疼痛)。据世界卫生组织报告，慢性疼痛是最常见也是疾病负担最重的疾患。有资料统计，大约30％的成年人患有慢性疼痛。神经病理性疼痛(neuropathicpain)是慢性疼痛中的一类，临床上常见的炎症、手术、神经创伤、病毒感染(如带状疱疹)、癌症、代谢性疾病(如糖尿病)、免疫性疾病(如多发性硬化、艾滋病)等都可以引起神经病理性疼痛。患者会产生对伤害性刺激敏感性增强和反应阈值降低的痛觉过敏，以及非痛刺激(如触摸)引起的触诱发痛表现，严重影响患者的身心健康和生活质量。神经病理性疼痛是临床镇痛的难点，现有的镇痛药物多是阿片类镇痛药、非阿片类辅助镇痛药(非甾体类抗炎药、抗抑郁药、抗惊厥药)。阿片类镇痛药如吗啡、美沙酮、芬太尼、羟考酮等，常伴随有呼吸抑制和循环抑制副作用，常见为便秘、头晕、恶心、呕吐，瘙痒、口干等症状。非甾体类抗炎药常用环氧化酶-2抑制剂塞来昔布，其伴随有消化道副作用，包括腹痛、消化不良和恶心等症状。抗惊厥药、抗精神病药物为主的辅助性镇痛药，如卡马西平、可乐定、氯胺酮等，都有不同种类的不良反应，如疲乏、头疼、血小板减少、皮肤瘙痒、充血性皮疹、失眠、便秘等症状。因此进一步研究神经病理性疼痛的发生发展机制，从新的角度寻找有效的药物作用靶点具有重要的学术价值和现实意义。CYP26A1属于细胞色素P450(cytochromeP450，CYP450)超家族，CYP26家族，CYP26A亚家族成员，是特异性代谢维甲酸的氧化酶。在CYP450超家族众多成员中，CYP1、CYP2、CYP3家族在疼痛领域研究较多，它们参与多种麻醉镇痛药物的代谢，会引起药物动力学改变，导致药物效能改变，这对临床指导用药有重要意义。但CYP450超家族成员直接参与调节神经病理性疼痛的发生发展鲜有报道。有研究报道细胞色素CYP26A1也是肿瘤治疗的重要靶点，而不论是肿瘤本身还是利用化疗药治疗肿瘤时都可导致痛觉过敏，产生神经病理性疼痛，在治疗癌症引起的神经病理性疼痛中，以CYP26A1作为药物靶点可能还会有一箭双雕的效果。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供细胞色素酶CYP26A1作为靶点在筛选神经病理性疼痛治疗药物、制备神经病理性疼痛治疗药物或制备神经病理性疼痛诊断药物中的应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案：细胞色素酶CYP26A1在筛选神经病理性疼痛治疗药物、制备神经病理性疼痛治疗药物或制备神经病理性疼痛诊断药物中的应用。进一步地，所述药物抑制CYP26A1的表达或功能，可以为核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽、蛋白、干扰慢病毒或干扰腺相关病毒。通过小鼠SNL模型诱导神经病理性疼痛，提取脊髓腰5节段的mRNA进行基因芯片检测，申请人发现CYP26A1mRNA水平在神经病理性疼痛模型维持阶段升高近22倍，提示CYP26A1可能在神经病理性疼痛维持阶段发挥作用。通过实时荧光定量PCR和WesternBlot实验进一步证实CYP26A1mRNA水平和蛋白水平在神经病理性疼痛模型维持阶段显著升高，抑制CYP26A1表达或抑制其功能都能够有效缓解神经病理性疼痛，说明CYP26A1参与神经病理性疼痛的维持发展。上述结果都说明可以细胞色素酶CYP26A1作为研发治疗神经病理性疼痛药物的潜在靶点。基于上述技术思路，本专利技术还提供了多种CYP26A1mRNA的抑制剂，包括：一种抑制CYP26A1mRNA的核酸分子，所述核酸分子为siRNA或shRNA；所述siRNA或shRNA包含与如SEQIDNO：1所示的核苷酸序列相同的RNA序列。进一步地，所述siRNA包括正义链和反义链，所述正义链和反义链的核苷酸序列如SEQIDNO：2和SEQIDNO：3所示。进一步地，所述siRNA可采用甲氧基或胆固醇进行修饰。一种抑制CYP26A1mRNA的重组载体，包含能转录出上述核酸分子的序列以及载体，所述序列嵌入载体中。进一步地，所述载体为慢病毒载体或腺相关病毒载体。一种抑制CYP26A1mRNA的慢病毒，由上述重组载体经病毒包装后获得。一种抑制CYP26A1mRNA的腺相关病毒，由上述重组载体经病毒包装后获得。上述核酸分子、重组载体、慢病毒或腺相关病毒在制备预防或治疗神经病理性疼痛的药物中的应用。CYP26A1功能抑制剂在制备预防或治疗神经病理性疼痛的药物中的应用。进一步地，所述CYP26A1功能抑制剂为他拉罗唑。有益效果：本专利技术通过利用小鼠脊髓腰5(L5)脊神经结扎(spinalnerveligation,SNL)方法诱导神经病理性疼痛，发现CYP450家族成员CYP26A1在神经病理性疼痛的维持阶段表达增加，促进神经病理性疼痛维持发展，抑制CYP26A1表达或抑制其功能都能够有效缓解神经病理性疼痛，可将细胞色素酶CYP26A1作为靶点，以抑制其表达和功能的抑制剂作为神经病理性疼痛的有效治疗药物。附图说明图1为实施例1中L5脊神经结扎(SNL)诱发小鼠同侧后爪产生机械性触诱发痛。图2为实施例1中SNL诱导脊髓CYP26A1mRNA水平升高。A为mRNA芯片检测SNL模型组和假手术组脊髓差异表达mRNA聚类分析。B为mRNA芯片分析细胞色素P450家族差异表达mRNA相对升高倍数。C为实时荧光定量PCR验证SNL模型中CYP26A1mRNA表达水平。图3为实施例1中SNL诱导脊髓CYP26A1蛋白表达升高。A、B为CYP26A1蛋白WesternBlot检测结果。C-K为免疫荧光双标染色定位脊髓CYP26A1蛋白表达的细胞类型。图4为实施例2中siRNA抑制CYP26A1表达能够缓解SNL诱导的机械性触诱发痛。A为筛选出针对小鼠CYP26A1mRNA具有高效干扰效果的siRNA(siRNA-003)。B为脊髓鞘内注射经甲氧基和胆固醇修饰的siRNA(siRNA-003-2OMe+5Chol)不同剂量，机械性触诱发痛检测结果。C为实时荧光定量PCR检测脊髓鞘内注射siRNA-003-2OMe+5Chol的基因干扰效果。图5为实施例3中CYP26A1抑制剂Talarozole能够缓解SNL诱导的机械性触诱发痛。A为SNL第7天脊髓鞘内注射Talarozole不同剂量，机械性触诱发痛检测结果。B为SNL第3天脊髓鞘内注射高剂量Talarozole，机械性触诱发痛检测结果。C为实时荧光定量PCR检测CYP26B1mRNA在SNL模型中的表达变化。具体实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.细胞色素酶CYP26A1在筛选神经病理性疼痛治疗药物、制备神经病理性疼痛治疗药物或制备神经病理性疼痛诊断药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.细胞色素酶CYP26A1在筛选神经病理性疼痛治疗药物、制备神经病理性疼痛治疗药物或制备神经病理性疼痛诊断药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述药物抑制CYP26A1的表达或功能，可以为核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽、蛋白、干扰慢病毒或干扰腺相关病毒。


3.一种抑制CYP26A1mRNA的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为siRNA或shRNA；所述siRNA或shRNA包含与如SEQIDNO：1所示的核苷酸序列相同的RNA序列。


4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于：所述siRNA包括正义链和反义链，所述正义链和反义链的核苷酸序列如SEQIDNO：2和SEQIDNO：3所示。


5.根据权利要求4所述的核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹德利，高永静，姜保春，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32