吡唑霉素生物合成基因簇、重组菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种吡唑霉素生物合成基因簇、重组菌及其应用，即是纯白色链霉菌NRRL 3601产生的治疗肿瘤的天然产物吡唑霉素的生物合成基因簇的克隆、测序、分析、功能研究及其应用。整个基因簇共包含24个基因。通过对上述生物合成基因的遗传操作可阻断或提高吡唑霉素的生物合成。本发明专利技术所提供的基因及其蛋白可用于该化合物的基因工程、蛋白表达、酶催化反应等，也可以用来寻找和发现可用于医药、工业或农业的化合物、基因、蛋白。

Pyrazomycin biosynthesis gene cluster, recombinant bacteria and their application

The invention discloses pyrazomycin biosynthesis gene cluster, recombinant bacteria and application, that is, cloning, sequencing, analysis, function research and application of pyrazomycin biosynthesis gene cluster, a natural tumor treatment product produced by pure Streptomyces albicans NRRL 3601. The whole gene cluster contains 24 genes. The biosynthesis of pyrazomycin can be blocked or improved by genetic manipulation of the above biosynthetic genes. The gene and its protein provided by the invention can be used for gene engineering, protein expression, enzyme catalytic reaction, etc. of the compound, and can also be used for finding and discovering compounds, genes and proteins that can be used in medicine, industry or agriculture.

【技术实现步骤摘要】
吡唑霉素生物合成基因簇、重组菌及其应用
本专利技术属于微生物基因工程领域，具体涉及一种吡唑霉素生物合成基因簇、重组菌及其应用。
技术介绍
吡唑霉素首次由Lilly实验室从纯白色链霉菌(Streptomycescandidus)的发酵液中分离得到并且通过色谱和X-射线晶体确定其及其α异构体吡唑霉素B的化学结构(Buchanan,1983)。吡唑霉素，也可命名为antibioticA23813，由一个含氮杂环结构和一个糖基部分组成，与焦土霉素(Showdomycin)、间型霉素(Formycin)一样都是C-核苷类抗生素，化学结构稳定(SuhadolnikandReichenbach,1981)。吡唑霉素有明显的抗病毒和抗肿瘤的生物活性，但其作为抗癌剂进行临床试验时由于生物毒性偏大影响其应用(Buchanan,1983)。1976年Bernardo和Weigele化学合成吡唑霉素，而FARKAS和SORM利用酮酯为前体化学合成了吡唑霉素(SuhadolnikandReichenbach,1981)。Buchanan等人实验证明吡唑霉素的C-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种吡唑霉素的生物合成基因簇，其特征在于：所述基因簇的核苷酸序列为SEQ IDNO:1中第798-27650位所示，其中负责吡唑霉素生物合成的基因，共24个基因，具体为：/nprfA位于SEQ ID NO:1中第798-1988碱基处，编码MFS转运蛋白，氨基酸序列为SEQ IDNO.2；/nprfB位于SEQ ID NO:1中第2035-3465碱基处，编码腺苷酸琥珀酸裂解酶，氨基酸序列为SEQ ID NO.3；/nprfC位于SEQ ID NO:1中第3786-4460碱基处，编码HAD家族水解酶，氨基酸序列为SEQID NO.4；/nprfD位于SEQ ID NO:1中第4640-4...

【技术特征摘要】
1.一种吡唑霉素的生物合成基因簇，其特征在于：所述基因簇的核苷酸序列为SEQIDNO:1中第798-27650位所示，其中负责吡唑霉素生物合成的基因，共24个基因，具体为：
prfA位于SEQIDNO:1中第798-1988碱基处，编码MFS转运蛋白，氨基酸序列为SEQIDNO.2；
prfB位于SEQIDNO:1中第2035-3465碱基处，编码腺苷酸琥珀酸裂解酶，氨基酸序列为SEQIDNO.3；
prfC位于SEQIDNO:1中第3786-4460碱基处，编码HAD家族水解酶，氨基酸序列为SEQIDNO.4；
prfD位于SEQIDNO:1中第4640-4996碱基处，编码异构酶，氨基酸序列为SEQIDNO.5；
prfE位于SEQIDNO:1中第5056-6060碱基处，编码β-核糖呋喃基氨基苯5’-磷酸合酶，氨基酸序列为SEQIDNO.6；
prfF位于SEQIDNO:1中第6136-7167碱基处，编码SAICAR合成酶，氨基酸序列为SEQIDNO.7；
prfG位于SEQIDNO:1中第7321-8943碱基处，编码富马酸还原酶，氨基酸序列为SEQIDNO.8；
prfH位于SEQIDNO:1中第9410-10399碱基处，编码单加氧酶，氨基酸序列为SEQIDNO.9；
prfI位于SEQIDNO:1中第10389-11723碱基处，编码单加氧酶，氨基酸序列为SEQIDNO.10；
prfJ位于SEQIDNO:1中第11789-12655碱基处，编码转运蛋白，氨基酸序列为SEQIDNO.11；
prfK位于SEQIDNO:1中第12701-13756碱基处，编码氧化酶，氨基酸序列为SEQIDNO.12；
prfL位于SEQIDNO:1中第13917-15158碱基处，编码磷酸核糖甘氨酰胺合成酶，氨基酸序列为SEQIDNO.13；
prfM位于SEQIDNO:1中第15220-16392碱基处，编码酵母氨酸脱氢酶，氨基酸序列为SEQIDNO.14；
prfN位于SEQIDNO:1中第16392-17705碱基处，编码L-赖氨酸N6-单加氧酶，氨基酸序列为SEQIDNO.15；
...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈文青，张梦，邓子新，张培潮，徐顾丹，周文婷，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42