一株产surfactin基因工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一株产surfactin基因工程菌及其构建方法和应用。所述工程菌以枯草芽孢杆菌B.subtilis 168为宿主细胞，通过基因工程手段，强化了surfactin合成前体3‑羟基脂酰CoA的合成途径。获得的基因工程菌分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BSFX022，保藏编号为CCTCC NO：M 2019254。将最终所得的工程菌枯草芽孢杆菌BSFX022用于发酵生产surfactin，其产量是对照菌株的2.39倍；此外，通过向培养基中添加10～20mM的L‑leu的方法，可使得surfactin的产量在原来基础上提高20％左右。以木糖为碳源时，该菌株可以高效合成surfactin且有机酸副产物积累量较低；基于此本发明专利技术提供了无磷酸缓冲的发酵体系用于合成surfactin的发酵工艺。为进一步降低成本，以富含木糖的玉米芯稀酸水解液和富含氨基酸的味精发酵废液为原料，重组菌的surfactin发酵产量可达2032mg/L。

A surfacin producing genetically engineered bacterium and its construction and Application

The invention discloses a surface producing gene engineering bacterium and a construction method and application thereof. The engineering bacteria take B. subtilis 168 as the host cell, and strengthen the synthesis pathway of 3 \u2011 hydroxyacyl COA, the precursor of surfacin, by means of genetic engineering. The obtained genetic engineering bacteria were classified and named as Bacillus subtilis bsfx022, and the storage number was CCTCC No: m 2019254. In addition, by adding 10-20mm L \u2011 Leu to the medium, the yield of surfacin can be increased by about 20% on the original basis. When xylose is used as carbon source, the strain can synthesize surfacin efficiently and the accumulation of organic acid by-products is low; based on the invention, a fermentation system without phosphoric acid buffer is provided for the fermentation process of synthesizing surfacin. In order to further reduce the cost, the raw materials are corn cob dilute acid hydrolysate rich in xylose and monosodium glutamate fermentation waste liquid rich in amino acids. The surface fermentation yield of recombinant bacteria can reach 2032mg / L.

【技术实现步骤摘要】
一株产surfactin基因工程菌及其构建方法和应用
本专利技术属于遗传工程
，具体涉及一株产surfactin基因工程菌及其构建方法和应用。
技术介绍
由于人们越来越重视绿色化学品和工业过程，低毒、环保和可生物降解的生物表面活性剂引起了研究者极大的兴趣。生物表面活性剂根据其天然化学结构和微生物来源分为糖脂、磷脂、脂肽、脂蛋白、聚合物表面活性剂和颗粒表面活性剂。其中，脂肽是由亲水肽环和疏水脂肪酸部分组成一类抗菌肽。根据其结构特征，脂肽可分为两类：环脂肽(CLPs)和线性脂肽。迄今为止发现的环状脂肽主要由枯草芽孢杆菌B.subtilis产生，包括：fengycin，iturin和surfactin。生物表面活性素surfactin，是由枯草芽孢杆菌培养液中发现的一种次级代谢产物，是报道最多的具有广谱抗菌活性的脂肽之一。Surfactin的疏水头部由13-16个碳原子的β-羟基脂肪酸链构成，亲水的尾部是一种环状七肽，通常含有L-谷氨酸(L-Glu)，L-天冬氨酸(L-Asp)，L-缬氨酸(L-Val)，L-亮氨酸(L-Leu)和D-亮本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株产surfactin基因工程菌，其特征在于，其分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BSFX022，保藏编号为CCTCC NO：M 2019254。/n

【技术特征摘要】
1.一株产surfactin基因工程菌，其特征在于，其分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BSFX022，保藏编号为CCTCCNO：M2019254。


2.权利要求1所述基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
将含有P43启动子和编码磷酸泛酰巯基转移酶的sfp基因整合到出发菌株B.subtilis168的sfp位点得到重组菌，记作BSFX01；
将加州月桂Umbellulariacalifornica的酰基载体蛋白硫酯酶编码基因bte置于启动子P43的调控下，P43-bte整合到重组菌BSFX01中，得到重组菌，记作BSFX02；
向所述重组菌BSFX02中引入在启动子P43调控下的来自贝莱斯芽孢杆菌BS-37的脂酰CoA连接酶编码基因yhfl，即P43-yhfl，得到重组菌BSFX021；
在重组菌BSFX021中敲除基因fadE，得到重组菌BSFX022。


3.权利要求1所述基因工程菌在发酵产surfactin中的应用。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括：
种子培养：将菌株BSFX022在种子培养基中培养；
发酵培养：将种子培养的培养液接种至发酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：李霜，胡仿香，刘雨悦，陶惟一，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32