利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法技术

本发明专利技术公开了利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，包括以下步骤：1)待测当归及近缘属药材样本总DNA提取；2)以待测样本的基因组DNA为模板，利用SSR引物进行PCR扩增反应；3)PCR扩增产物电泳、染色及鉴定。本发明专利技术的有益效果为：本发明专利技术提供的利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，首次利用SSR分子标记技术开展当归种间(当归与近缘属药材)鉴别，构建了正品当归的SSR指纹图谱，使之能够从分子层面进行伪品剔除，解决了市场上当归药材来源混杂的问题，为当归品牌标识、育种提供可靠的材料，并对其进行遗传多样性评价。为当归产业的健康可持续发展提供技术支撑，同时可以对当归种质进行遗传多样性分析，挖掘优质基因。

Identification of Angelica by SSR fingerprint

The invention discloses a method for identifying authentic Angelica by SSR fingerprint, which comprises the following steps: 1) extracting the total DNA of the samples of Angelica to be tested and its related herbs; 2) taking the genomic DNA of the samples to be tested as the template, PCR amplification reaction by SSR primer; 3) electrophoresis, staining and identification of PCR amplification products. The beneficial effect of the invention is: the method of identifying authentic Angelica by SSR fingerprint provided by the invention, for the first time, uses SSR molecular marker technology to carry out inter species identification (Angelica and related herbs) of angelica, constructs the SSR fingerprint of authentic angelica, enables it to eliminate fake products from the molecular layer, solves the problem of mixed sources of Angelica in the market, and is the brand mark of Angelica To provide reliable materials for identification and breeding, and to evaluate their genetic diversity. It can provide technical support for the healthy and sustainable development of Angelica industry, analyze the genetic diversity of Angelica germplasm, and tap high-quality genes.

【技术实现步骤摘要】
利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法
本专利技术涉及中药材鉴定
，具体涉及利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法。
技术介绍
当归为伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，又叫秦归、云归、西当归和岷当归，生长于海拔1800～2500m高寒阴湿地区。主要栽培于甘肃岷县及云南。性甘、辛、温。有补血活血、调经止痛、润肠通便等功能。临床上用途广泛，有“十方九归”之说。现代药理研究表明当归具有多种药理功效。当归为伞形科当归属的栽培植物，是著名常用药材之一。《中国药典》2015版收载的当归来源仅为当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，其余品种与当归在功效上均有较大差异，严重影响用药安全。药用植物覆盖了广泛的植物类群，其中包含形态学上难以鉴别的物种。调查显示，中国药用植物覆盖了383科、2309属、11146种，具有丰富的生物多样性。由于有些植物在形态上极其相似，加之长期以来对中草药的品种来源、定名、谱系、品种特性等缺乏科学管理，致使中药材名称混乱，出现一名多物、一物多名等现象，给用药安全带来了隐患。中药材传统的鉴定方法主要是性状鉴别、显微鉴别和化学特征鉴别，受原植物生长环境、生长期及炮制加工工艺的影响较大。近年来，分子鉴别方法已经广泛的在中药材上发展起来。当归药用历史悠久，品种来源甚多，由于产地、来源和加工方法不同，药材质量有很大差别，商品名称也十分混乱。目前，当归的分子鉴别在ITS、trnl-F、ISSR和RAPD上均有研究，但在SSR上还未见报道。SSR作为分子标记的一种，在植物学与农学领域广泛应用于系谱分析与进化、遗传图谱构建、基因定位克隆、品种鉴定等方面，具有高度重复性、丰富的多态性、共显性、高度可靠性等优点。本专利技术利用SSR指纹图谱鉴别当归与近缘属药材，为当归的种质资源保护和利用、市场的健康可持续发展提供技术支撑。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，即针对目前市场上当归品种混乱、真假掺卖、优质当归供不应求的情况，提供了利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，首次利用SSR分子标记技术开展当归种间(当归与近缘属药材)鉴别，构建了正品当归的SSR指纹图谱，使之能够从分子层面进行伪品剔除，并对其进行遗传多样性评价。为了实现上述目的，本专利技术提供的技术方案为：利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，包括以下步骤：1)待测当归及近缘属药材样本总DNA提取；2)以待测样本的基因组DNA为模板，利用SSR引物进行PCR扩增反应；3)PCR扩增产物电泳、染色及鉴定。鉴定标准为扩增样本的图谱与本专利技术中的附图1所示的模拟图谱(其中扩增条带数量及位置)相符，则证明是正品当归。进一步的，上述的利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，所述步骤1)中，待测当归与近缘属药材样本总DNA提取，是采用天根植物基因组试剂盒进行提取。进一步的，上述的利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，所述步骤2)中，2对SSR引物序列分别为：引物A：上游引物：5'-ACCAAACCACCTATGTCACTAC-3'；下游引物：5'-CTCAAGGAGGCTGGAAACTG-3'；引物B：上游引物：5'-GAGAAGAAAGCGGCTGGTGGT-3'；下游引物：5'-AAGGCGATGAGATGACAAGGGT-3'。进一步的，上述的利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，所述步骤3)中，PCR扩增产物电泳采用6％非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳，染色采用银染法，鉴定采用统计电泳带型构建SSR指纹图谱进行当归鉴定。本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，首次利用SSR分子标记技术开展当归种间(当归与近缘属药材)鉴别，构建了正品当归的SSR指纹图谱，使之能够从分子层面进行伪品剔除，解决了市场上当归药材来源混杂的问题，为当归品牌标识、育种提供可靠的材料，并对其进行遗传多样性评价。为当归产业的健康可持续发展提供技术支撑，同时可以对当归种质进行遗传多样性分析，挖掘优质基因。附图说明图1显示为当归SSR指纹图谱模拟图；其中，M为50bpMarker，1为当归DNA在引物A的扩增位点，2为当归DNA在引物B的扩增产物位点。图2显示为引物A的扩增电泳图；其中，泳道1：Marker；泳道2-28：当归；泳道29-33、36-37为当归混伪品，依次为：红柴胡、川芎、柴胡、北沙参、独活、羌活和葛缕子。图3显示为引物B的扩增电泳图；泳道1：Marker；泳道2-28：当归；泳道29-33、36-37为当归混伪品，依次为：红柴胡、川芎、柴胡、北沙参、独活、羌活和葛缕子。具体实施方式实施例1：利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，包括以下步骤：1)待测当归及近缘属药材样本总DNA提取；2)以待测样本的基因组DNA为模板，利用SSR引物进行PCR扩增反应；3)PCR扩增产物电泳、染色及鉴定。鉴定标准为扩增样本的图谱与本专利技术中的附图1所示的模拟图谱(其中扩增条带数量及位置)相符，则证明是正品当归。步骤1)中，待测当归与近缘属药材样本总DNA提取，是采用天根植物基因组试剂盒进行提取。步骤2)中，2对SSR引物序列分别为：引物A：上游引物：5'-ACCAAACCACCTATGTCACTAC-3'；下游引物：5'-CTCAAGGAGGCTGGAAACTG-3'；引物B：上游引物：5'-GAGAAGAAAGCGGCTGGTGGT-3'；下游引物：5'-AAGGCGATGAGATGACAAGGGT-3'。步骤3)中，PCR扩增产物电泳采用6％非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳，染色采用银染法，鉴定采用统计电泳带型构建SSR指纹图谱进行当归鉴定。上述PCR反应体系：总体积15μl，包括2×TaqMasterMix7.5μl，DNase-FreeWater4.5μl，ForwardPrimer1μl，ReversePrimer1μl，DNA模板1μl。上述PCR反应程序：95℃热启动3min，95℃变性45s，48-65℃退火30s，72℃延伸1min，34个循环后，72℃终延伸5min后结束。PCR扩增产物电泳及染色：采用6％非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳，银染显色，相机拍照，记录电泳结果；SSR指纹图谱结果分析及鉴定：鉴定采用统计电泳带型构建SSR指纹图谱，进行当归鉴定。上述2对引物构建的当归模拟指纹图谱见图1。如图1所示，利用本专利技术提供的2对SSR引物可鉴别出正品当归，当归在2对引物扩增图中对应的SSR位点如图1所示。实施例2：应用案例：1.供试材料及采样方法：以县级为单位，选取甘肃当归种植的5个主栽区卓尼县、岷县、陇西、渭源和漳县共29份当归材料，另在陇西药圃本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)待测当归及近缘属药材样本总DNA提取；/n2)以待测样本的基因组DNA为模板，利用SSR引物进行PCR扩增反应；/n3)PCR扩增产物电泳、染色及鉴定。/n

【技术特征摘要】
1.利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)待测当归及近缘属药材样本总DNA提取；
2)以待测样本的基因组DNA为模板，利用SSR引物进行PCR扩增反应；
3)PCR扩增产物电泳、染色及鉴定。


2.根据权利要求1所述的利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，其特征在于，所述步骤1)中，待测当归与近缘属药材样本总DNA提取，是采用天根植物基因组试剂盒进行提取。


3.根据权利要求1所述的利用SSR指纹图谱鉴别正品当归的方法，其特征在于，所述步骤2)中，2对SSR引物序...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘新星，欧巧明，罗俊杰，崔明九，李忠旺，石有太，
申请(专利权)人：甘肃省农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62