一种转基因油菜及其产品筛查阳性质粒分子pYCSC-1905及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种转基因油菜及其产品筛查阳性质粒分子pYCSC‑1905的设计及其应用，涉及转基因安全领域中转基因油菜的安全监管和筛查检测技术。pYCSC‑1905的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。利用pYCSC‑1905作为阳性对照和质控样品，能对油菜及其产品进行转基因成分的普通PCR和实时荧光PCR筛查检测，对目前已知遗传信息的转基因油菜的覆盖率为100％；本发明专利技术解决了转基因油菜筛查检测中缺乏阳性对照或标准品的技术难题，避免了筛查检测中针对多个检测靶标设置多个阳性对照的问题，降低了制备多个阳性对照的人力成本和经济成本。

Pycsc-1905, a kind of transgenic rape and its products, and its application

The invention discloses the design and application of a transgenic rape and its product screening positive plasmid molecule pycsc \u2011 1905, which relates to the safety supervision and screening detection technology of transgenic rape in the field of transgenic safety. The base sequence of pycsc \u2011 1905 is shown in SEQ ID No.1. By using pycsc \u2011 1905 as positive control and quality control sample, the common PCR and real-time fluorescent PCR can be used to screen and detect the genetically modified rape and its products, and the coverage rate of the genetically modified rape with known genetic information is 100%; the invention solves the technical problem of lacking positive control or standard in the screening and inspection of the genetically modified rape, and avoids multiple inspections in the screening and inspection The problem of setting multiple positive controls on the test target reduces the labor cost and economic cost of preparing multiple positive controls.

【技术实现步骤摘要】
一种转基因油菜及其产品筛查阳性质粒分子pYCSC-1905及其应用
本专利技术涉及转基因安全领域中转基因油菜的安全监管和筛查检测技术，尤其涉及一种阳性质粒分子pYCSC-1905的设计及其应用。
技术介绍
近20多年来，全球转基因生物研发及商业化迅猛发展，1992年以来，全球批准了4133项转基因产品的监管审批，涉及26个转基因作物的476个转化体，种植面积累计超过23亿公顷，产生了巨大的经济效益。与此同时，转基因生物的安全性问题一直备受社会各界关注，为此，包括中国、欧盟、美国、日本和韩国等在内50多个国家和地区纷纷颁布实施转基因生物安全管理法律法规，以规范转基因生物的研发和产业化应用。在转基因生物安全监管工作中，一方面要监管已批准进口或商业化转基因产品的种植及应用情况，另一方面要监管非授权转基因产品的非法种植或应用情况。非授权转基因产品是指未经批准而释放到市场上的转基因产品，包括在别的国家批准而在我国并未获批的转基因材料、田间非法种植的仅批准进口用作加工原料的转基因材料，以及尚处于试验阶段的转基因材料。转基因油菜是四大转基因作本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转基因油菜及其产品筛查阳性质粒分子pYCSC-1905，其特征在于：/n碱基序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种转基因油菜及其产品筛查阳性质粒分子pYCSC-1905，其特征在于：
碱基序列如SEQIDNO.1所示。


2.一种转基因油菜及其产品筛查阳性质粒分子pYCSC-1905，其特征在于：其含有9个常用筛查靶标和2个油菜内标基因，依次为：(1)pCaMV35S启动子(P-CaMV35S)，如SEQIDNO.2所示，(2)pFMV35S启动子(P-FMV35S)，如SEQIDNO.3所示，(3)Bar基因，如SEQIDNO.4所示，(4)修饰的CP4-EPSPS基因(mCP4-EPSPS),如SEQIDNO.5所示，(5)HPT基因，如SEQIDNO.6所示，(6)NPTII基因，如SEQIDNO.7所示，(7)PAT基因，如SEQIDNO.8所示，(8)PinII终止子(T-PinII)，如SEQIDNO.9所示，(9)NOS终止子(T-NOS)，如SEQIDNO.10所示，(10)油菜内标基因HMGI/Y，如SEQIDNO.11所示，(11)油菜内标基因CruA，如SEQIDNO.12所示。


3.一种转基因油菜及其产品筛查阳性质粒分子pYCSC-1905，其为在pUC18载体上插入融合序列SEQIDNo.13，构成的质粒分子。


4.一种用于普通PCR筛查转基因油菜及其产品的试剂盒，其包括本权利要求1-3任一项所述的质粒分子以及转基因油菜筛查元件和油菜内标基因的检测引物。


5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中转基因油菜筛查元件和油菜内标基因的检测引物如下：
Bar基因：
BarF5′—GAAGGCACGCAACGCCTACGA—3′SEQIDNO.14
BarR5′—CCAGAAACCCACGTCATGCCA—3′SEQIDNO.15；
HPTII基因：
HPTIIF2265′—GAAGTGCTTGACATTGGGGAGT—3′SEQIDNO.16
HPTIIR6975′—AGATGTTGGCGACCTCGTATT—3′SEQIDNO.17
mCP4-EPSPS基因：
F5′—GACTTGCGTGTTCGTTCTTC—3′SEQIDNO.18
R5′—AACACCGTTGAGCTTGAGAC—3′SEQIDNO.19
PAT基因：
F5′—GTCGACATGTCTCCGGAGAG—3′SEQIDNO.20
R5′—GCAACCAACCAAGGGTATC—3′SEQIDNO.21
T-PINII终止子：
F5′—GACTTGTCCATCTTCTGGATTGG—3′SEQIDNO.22
R5′—CACACAACTTTGATGCCCACAT—3′SEQIDNO.23；
P-FMV35S启动子：
FMV35S-F15′—AAGACATCCACCGAAGACTTA—3′SEQIDNO.24
FMV35S-R15′—AGGACAGCTCTTTTCCACGTT—3′SEQIDNO.25；
P-CaMV35S启动子：
35S-F15′—GCTCCTACAAATGCCATCATTGC—3′SEQIDNO.26，
35S-R15′—GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC—3′SEQIDNO.27；
T-NOS终止子：
NOS-F15′—GAATCCTGTTGCCGGTCTTG—3′SEQIDNO.28，
NOS-R15′—TTATCCTAGTTTGCGCGCTA—3′SEQIDNO.29；
NPTII基因：
NPTIIF685′—ACTGGGCACAACAGACAATCG—3′SEQIDNO.30，
NPTIIR3565′—GCATCAGCCATGATGGATACTTT—3′SEQIDNO.31；
油菜内标准基因CruA：
CruAF3985′—GGCCAGGGCTTCCGTGAT—3′SEQIDNO.32
CruAR5475′—CTGGTGGCTGGCTAAATCGA—3′，SEQIDNO.33；
油菜内标准基因HMGI/Y：
hmg-F5′—TCCTTCCGTTTCCTCGCC—3′SEQIDNO.34；
hmg-R5′—TTCCACGCCCTCTCCGCT—3′SEQIDNO.35。


6.一种用于实时荧光PCR筛查转基因油菜及其产品的试剂盒，其包括权利要求1-3任一项所述的质粒分子以及转基因油菜筛查元件和油菜内标基因的检测引物对和探针；优选地，转基因油菜筛查元件和油菜内标基因的检测引物对和探针为，
P-CaMV35S启动子：
引物CAMV35S-QF5′—CGACAGTGGTCCCAAAGA—3′SEQIDNO.36，
CAMV35S35S-QR5′—AAGACGTGGTTGGAACGTCTTC—3′SEQIDNO.37，
探针CAMV35S-QP5′—TGGACCCCCACCCACGAGGAGCATC—3′SEQIDNO.38；
P-FMV35S启动子：
引物FMV35S-QF5′—AAGACATCCACCGAAGACTTA—3′SEQIDNO.39，
FMV35S-QR5...

【专利技术属性】
技术研发人员：武玉花，张秀杰，李俊，李夏莹，王灏潜，翟杉杉，陈子言，张洪文，高鸿飞，李允静，吴刚，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，农业农村部科技发展中心，
类型：发明
国别省市：湖北;42