不同含碳量C18液相半制备色谱柱装填方法技术

本发明专利技术涉及一种装填不同含碳量C18液相半制备色谱柱的方法，主要解决半制备柱峰形易拖尾和前沿、柱效不高等问题。本发明专利技术装填方法包括以下步骤：1）配置顶替液：采用混合有机溶剂和去离子水2种顶替液分段使用；2）制备匀浆液：一定比例混合溶剂配置成匀浆液体，加入C18反相填料于锥形瓶中，超声搅拌配置成匀浆液。3）色谱柱装填：以压缩空气为气源，以气动放大泵为装填高压泵，把制备好的匀浆液倒入连接好半制备柱管的匀浆罐中，用顶替液将匀浆液替换出来，继续冲洗一段时间后关闭气源，待系统压力降至常压后，静置10～15分钟，卸下色谱柱。4）半制备柱评价。本发明专利技术实现了色谱柱快速、高效的装填。

Semi preparative chromatographic column filling method of C18 with different carbon content

The invention relates to a method for half preparation of chromatographic column by filling C18 liquid phase with different carbon content, which mainly solves the problems of easy tailing and leading edge of half preparation column peak shape and low column efficiency. The filling method of the invention comprises the following steps: 1) configuring the displacement liquid: using two kinds of displacement liquid, i.e. mixed organic solvent and deionized water, to use in sections; 2) preparing the homogenate: a certain proportion of the mixed solvent is configured as the homogenate liquid, adding C18 reversed phase filler into the conical flask, and ultrasonic stirring is used to prepare the homogenate. 3) chromatographic column filling: take compressed air as the air source, pneumatic amplification pump as the filling high-pressure pump, pour the prepared homogenate into the homogenate tank connected with the semi prepared column tube, replace the homogenate with the replacement solution, continue to wash for a period of time, close the gas source, wait for 10-15 minutes after the system pressure drops to atmospheric pressure, and then remove the chromatographic column. 4) evaluation of semi prepared column. The invention realizes fast and efficient filling of chromatographic column.

【技术实现步骤摘要】
不同含碳量C18液相半制备色谱柱装填方法
本专利技术方法涉及半制备柱的装柱方法，具体涉及一种不同含碳量C18液相半制备柱装填方法。
技术介绍
色谱柱是液相色谱的主要部件，而色谱柱的装填方法，对确定的固定相又是实现色谱柱高效能，良好的对称性的关键技术。对于高效能柱，特别是最常使用的5μm填料色谱柱，则必须使用湿法，即匀浆装柱法。匀浆法装柱是指选择一种或数种溶剂作分散，悬浮介质、经超声处理使微粒在介质中高度分散并呈悬浮状半透明匀浆，然后在高压下把匀浆压入柱管中，制成具有均匀紧密填充床的色谱柱。半制备柱的装填方法区别于动态轴向压缩柱（DAC柱），DAC柱由于其活塞可以上下移动，反复装填，采用异丙醇等单一溶剂为匀浆液。而一般的半制备柱两端筛板是固定的，要保证柱头两端平整，为此采用两种不同极性的试剂进行混合配置成匀浆液，这样可以使填料悬浮于液体中，消除因填料颗粒间静电作用和表面能的加大，倾向于聚集和黏结的不良作用，使装填的柱床密实，色谱柱寿命延长。在装填过程中因每次装柱都会由于随机偶然因素导致床层不一样，造成色谱柱的前沿或者后拖，这样在其他试验条件都不变的情况下对样品进行色谱分离或纯化就会得到不同的结果，降低了试验重复性和产品稳定性。针对以上问题，本专利技术采用混合溶剂和去离子水解决色谱柱前沿和拖尾问题，实现了C18半制备色谱柱装填方法稳定，高效可重复。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种方便，简单易重复的装填及制备方法，在无粉尘的净化装柱间，控制环境温度在25℃，在把匀浆液和填料混合配置匀浆液体时边搅拌边超声，这样能使填料更好的悬浮于匀浆液中。而通过两种顶替液分段接替使用，解决了因操作差异性造成色谱峰的前沿或者后拖情况。本专利技术通过下述技术方案解决其技术问题。不同含碳量C18液相半制备色谱柱装填方法，按下述步骤进行。1．配置顶替液采用2种顶替液分时段使用，一种以甲醇和异丙醇以2:1的体积比混合超声10分钟左右后配置成顶替液，另一种以去离子水作顶替液。2．制备匀浆液取四氯甲烷和异丙醇以1:9～9:1的不同比例体积混合，配置成匀浆液体，排气超声10分钟。加入粒径5um的C18反相填料于锥形瓶中，超声并搅拌3分钟配置成匀浆液。3．装柱在无粉尘净化装柱间，控制装柱环境温度为25℃后，以压缩空气为气源，以气动放大泵为装填高压泵，把制备好的匀浆液倒入连接好半制备柱管的匀浆罐中；顶替液倒入顶替液瓶中，打开装柱机气动阀门，缓慢将装柱压力提升至300bar,先将甲醇和异丙醇混合的顶替液打入匀浆罐中，待色谱柱中流出顶替液体积1000～1500ml时，调整装柱机顶替液方向阀，将去离子水继续打入匀浆罐中，待色谱柱流出去离子水顶替液体积1000～1200ml为止，关闭装柱机气动阀门，停止加压，待系统压力降至常压后，静置10～15分钟，卸下色谱柱。4．半制备柱进行评价本专利技术方法成本低、易操作、装填紧密、柱效高、色谱峰对称性好。表一：含碳量为20%的C18柱填料装填的色谱柱评价结果峰号保留时间名称理论塔板数拖尾因子113.573萘152991.09色谱条件：色谱柱，10mm*250mm;流动相，甲醇：水=85:15；流速：3ml/min；紫外检测器波长，254nm。表二：含碳量为17%的C18柱填料装填的色谱柱评价结果峰号保留时间名称理论塔板数拖尾因子112.633萘189751.01色谱条件：色谱柱，10mm*250mm；流动相，甲醇：水=85:15；流速：3ml/min；紫外检测器波长，254nm。表三：含碳量为15%的C18柱填料装填的色谱柱评价结果峰号保留时间名称理论塔板数拖尾因子111.463萘228641.01色谱条件：色谱柱，10mm*250mm;流动相，甲醇：水=85:15；流速：3ml/min；紫外检测器波长，254nm。附图说明图1是含碳量为20%的C18柱填料装填的色谱峰评价图。图2是含碳量为17%的C18柱填料装填的色谱峰评价图。图3是含碳量为15%的C18柱填料装填的色谱峰评价图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步详细说明。实施例1含碳量20%的C18半制备柱的装填。1.配置顶替液采用2种顶替液分时段使用，一种以甲醇和异丙醇以2:1的体积比混合超声10分钟左右后配置成4L顶替液，另一种以去离子水作顶替液，取4L。2.制备匀浆液取四氯甲烷和异丙醇以1:9～9:1的不同比例体积混合，配置成150ml的匀浆液体，排气超声10分钟，称取16g粒径5μm的C18反相填料同匀浆液体混合于锥形瓶中，超声并搅拌3分钟配置成匀浆液。3.装柱：把制备好的匀浆迅速倒入已连接好半制备柱管10mm*250mm的匀浆罐中，再与装柱机相连。开动装柱机，缓慢将装柱压力提升至300bar,先将甲醇和异丙醇混合的顶替液打入匀浆罐中，待色谱柱中流出顶替液体积1500ml时，调整装柱机打出顶替液方向阀，将去离子水继续打入匀浆罐中，待色谱柱流出去离子水顶替液体积1000ml为止，关闭装柱机，停止加压，待系统压力降至常压后，静置10～15分钟，卸下色谱柱进行评价。4.半制备柱进行评价评价的色谱条件及评价结果见表一说明，色谱图见图1。表明用本发方明技术装柱的色谱柱有高的柱效，理论塔板数为61196万/米，色谱峰的对称性好，拖尾因子为1.09，显示出自装柱有很好的色谱性能。实施例2含碳量为17%的C18半制备柱的装填。1.配置顶替液采用2种顶替液分时段使用，一种以甲醇和异丙醇以2:1的体积比混合超声10分钟左右后配置成4L顶替液，另一种以去离子水作顶替液，取4L。2.制备匀浆液取四氯甲烷和异丙醇以1:9～9:1的不同比例体积混合，配置成150ml的匀浆液体，排气超声10分钟，称取16g粒径5μm的C18反相填料同匀浆液体混合于锥形瓶中，超声并搅拌3分钟配置成匀浆液。3.装柱：把制备好的匀浆迅速倒入已连接好半制备柱管10mm*250mm的匀浆罐中，再与装柱机相连。开动装柱机，缓慢将装柱压力提升至300bar,先将甲醇和异丙醇混合的顶替液打入匀浆罐中，待色谱柱中流出顶替液体积1500ml时，调整装柱机打出顶替液方向阀，将去离子水继续打入匀浆罐中，待色谱柱流出去本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.不同含碳量C18液相半制备色谱柱装填方法主要分为以下四步/n1）配置顶替液：采用2种顶替液分段使用，一种以甲醇和异丙醇以2:1的体积比混合超声10分钟左右后配置成顶替液，另一种以去离子水作顶替液；/n2）制备匀浆液：取四氯甲烷和异丙醇以1:9～9:1的不同比例体积混合，配置成匀浆液体，排气超声10分钟，加入C18反相填料于锥形瓶中，超声并搅拌3分钟配置成匀浆液；/n3）装柱：在无粉尘净化装柱间，控制装柱环境温度为25℃后，以压缩空气为气源，以气动放大泵为装填高压泵，把制备好的匀浆液倒入连接好半制备柱管的匀浆罐中；顶替液倒入顶替液瓶中，打开装柱机气动阀门，缓慢提高装柱压力，先将甲醇和异丙醇混合的顶替液打入匀浆罐中，待色谱柱中流出一定体积混合溶剂时，调整装柱机顶替液方向阀，将去离子水继续打入匀浆罐中，待色谱柱流出一定体积去离子水为止，关闭装柱机气动阀门，停止加压，待系统压力降至常压后，静置10～15分钟，卸下色谱柱；/n4）半制备柱评价。/n

【技术特征摘要】
1.不同含碳量C18液相半制备色谱柱装填方法主要分为以下四步
1）配置顶替液：采用2种顶替液分段使用，一种以甲醇和异丙醇以2:1的体积比混合超声10分钟左右后配置成顶替液，另一种以去离子水作顶替液；
2）制备匀浆液：取四氯甲烷和异丙醇以1:9～9:1的不同比例体积混合，配置成匀浆液体，排气超声10分钟，加入C18反相填料于锥形瓶中，超声并搅拌3分钟配置成匀浆液；
3）装柱：在无粉尘净化装柱间，控制装柱环境温度为25℃后，以压缩空气为气源，以气动放大泵为装填高压泵，把制备好的匀浆液倒入连接好半制备柱管的匀浆罐中；顶替液倒入顶替液瓶中，打开装柱机气动阀门，缓慢提高装柱压力，先将甲醇和异丙醇混合的顶替液打入匀浆罐中，待色谱柱中流出一定体积混合溶剂时，调整装柱机顶替液方向阀，将去离子水继续打入匀浆罐中，待色谱柱流出一定体积去离子水为止，关闭装柱机气动阀门，停止加压，待系统压力降至常压后，静置10～15分钟，卸下色谱柱；
4）半制备柱评价。


2.根据权利要求1所述的C18液相半制备色谱柱装填方法，其特点在于采用混合有机溶剂和去离子水为顶替液。


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【专利技术属性】
技术研发人员：韩海峰，吴妹，徐飞，
申请(专利权)人：中科院大连化学物理研究所淮安化工新材料研究中心，
类型：发明
国别省市：江苏;32