产品和组合物制造技术

本发明专利技术涉及产品和组合物及其用途。特别地，本发明专利技术涉及干扰基因表达或抑制其表达的核酸产品和治疗用途，例如用于治疗疾病和病症。

Products and compositions

The invention relates to products and compositions and their use. In particular, the present invention relates to nucleic acid products and therapeutic uses that interfere with gene expression or inhibit its expression, such as for treating diseases and disorders.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】产品和组合物本专利技术涉及产品和组合物及其用途。特别地，本专利技术涉及干扰基因表达或抑制其表达的核酸产品和治疗用途，例如用于治疗疾病和病症。背景双链RNA（dsRNA）已显示阻断基因表达（Fire等人，1998和Elbashir等人，2001）且这已被称为RNA干扰（RNAi）。短dsRNAs在许多生物（包括脊椎动物）中指导基因特异性的转录后沉默，并已提供了用于研究基因功能的新工具。RNAi由RNA-诱导性沉默复合物（RISC）介导，所述RISC是一种序列特异性的多组分核酸酶，其破坏与沉默触发物同源的信使RNAs。干扰RNA（iRNA）如核酸、反义RNA和微RNA是通过基因沉默阻止蛋白质形成的寡核苷酸，即抑制蛋白质的基因翻译。基因沉默剂对于医学中的治疗应用变得越来越重要。然而，向细胞递送核酸（例如RNA）从而避免被细胞核酸酶降解，同时保持功效和靶特异性已经被证明对于开发用于治疗用途的核酸分子领域的那些人具有挑战性。根据Watts和Corey在JournalofPathology（2012；第226卷，第365-379页）中，存在可用于设计核酸的算法，但没有一种是完美的。因为算法没有考虑诸如三级结构或RNA结合蛋白的牵涉的因素，所以其可能需要各种实验方法来鉴定有效的核酸。因此，发现具有最小脱靶（off-target）效应的有效核酸是一个复杂的过程，但对于要经济地合成、分配到靶组织、进入细胞并在可接受的毒性限度内发挥作用的这些高度带电分子的药物开发是必需的。因此，用于体内将寡核苷酸，特别是双链siRNAs有效递送至细胞的方法变得越来越重要，并且需要特异性靶向和免受细胞外环境特别是血清蛋白质的相当大保护。实现特异性靶向的一种方法是将靶向部分与iRNA双链体试剂缀合。靶向部分帮助将iRNA双链体试剂靶向所需要的靶位点，并且需要为所期望的受体位点设计合适的靶向部分，以使缀合的分子被细胞吸收，例如通过胞吞作用。然而，迄今开发的靶向配体并不总是转化为体内环境，并且明显需要用于体内递送寡核苷酸治疗剂、核酸和双链siRNAs的更有效的受体特异性配体缀合的iRNA双链体试剂及其制备方法。本专利技术解决了核酸本身的结构，而不是仅仅脂质递送系统。因此，本专利技术提供了用于抑制细胞中靶基因表达的核酸，其包含至少一个双链体区，所述双链体区包含第一链的至少部分和第二链的至少部分，所述第二链至少部分地与所述第一链互补，其中所述第一链至少部分地与由所述靶基因转录的RNA的至少部分互补，其中所述第一链在多个位置包含修饰的核苷酸或非修饰的核苷酸，以促进RISC对核酸的处理。本专利技术还涉及能够抑制靶基因表达的核酸，所述核酸包含第一链和第二链，其中所述第一链和第二链彼此至少部分互补，其中所述第一链与从所述靶基因的部分转录的RNA至少部分互补；且其中所述第一链和/或所述第二链包含修饰的核苷酸。自第一链的5'端起位置2和14的核苷酸可以是修饰的。自第一链的5'端起位置2和14的核苷酸可以不用2'O-甲基修饰进行修饰。自第一链的5'端起位置2和14的核苷酸可以不用选自2'-O-(2-甲氧乙基)、2'-O-烯丙基、2'-O-DNP、2'-CE、2'-EA、2'-AEM、2'-APM和2'-GE的修饰进行修饰。自第一链的5'端起位置2和14的核苷酸可以用选自2'F、4'-S、2'-FANA和UNA的修饰进行修饰。自第一链的5'端起位置2和14的核苷酸可以是未修饰的。自第二链的5'端起位置2和14的核苷酸可以用2'O-甲基修饰或'-O-(2-甲氧乙基)修饰进行修饰。第一链和第二链可以是分开的链。核酸可包含单链，所述单链包含第一链和第二链。第一链和/或所述第二链各自的长度可以为17-35个核苷酸，并且所述至少一个双链体区的长度可以为10-25个核苷酸。双链体可包含两条分开的链或其可包含单链，所述单链包含第一链和第二链。在一个方面，第二链的长度可以短至11个核苷酸，例如11、12、13、14、15、16、17、18、19个核苷酸或更多。核酸可以：a）在两端都是平端的；b）在一端具有突出端而在另一端具有平端；或c）在两端都具有突出端。可以修饰第一和/或第二链上的一个或多个核苷酸，以形成修饰的核苷酸。可以修饰第一链的奇数核苷酸中的一个或多个。第一链的偶数核苷酸中的一个或多个可以通过至少第二修饰进行修饰，其中所述至少第二修饰不同于一个或多个附加核苷酸上的修饰。一个或多个修饰的偶数核苷酸中的至少一个可以与一个或多个修饰的奇数核苷酸中的至少一个相邻。可以在本专利技术的核酸中修饰第一链中的多个奇数核苷酸。第一链中的多个偶数核苷酸可以通过第二修饰进行修饰。第一链可包含通过共同修饰修饰的相邻核苷酸。第一链还可以包含通过第二不同修饰修饰的相邻核苷酸。第二链的奇数核苷酸中的一个或多个可以通过与第一链上的奇数核苷酸的修饰不同的修饰进行修饰和/或第二链的偶数核苷酸中的一个或多个可以通过与第一链上的奇数核苷酸相同的修饰进行修饰。第二链的一个或多个修饰的偶数核苷酸中的至少一个可以与一个或多个修饰的奇数核苷酸相邻。第二链的多个奇数核苷酸可以通过共同修饰进行修饰和/或多个偶数核苷酸可以通过存在于第一链奇数核苷酸上的相同修饰进行修饰。第二链上的多个奇数核苷酸可以通过第二修饰进行修饰，其中所述第二修饰不同于第一链奇数核苷酸的修饰。第二链包含通过共同修饰修饰的相邻核苷酸，其可以是不同于第一链的奇数核苷酸的修饰的第二修饰。在本专利技术的核酸中，第一链中的每个奇数核苷酸和第二链中的每个偶数核苷酸可以用共同修饰进行修饰，并且每个偶数核苷酸可以在第一链中用第二修饰进行修饰，且每个奇数核苷酸可以在第二链中用第二不同修饰进行修饰。相对于第二链的未修饰或不同修饰的核苷酸，本专利技术的核酸可以使第一链的修饰的核苷酸移动至少一个核苷酸。修饰和/或多种修饰可以各自和单独地选自3'-末端脱氧胸腺嘧啶、2'-O-甲基、2'-脱氧-修饰、2'-氨基-修饰、2'-烷基-修饰、吗啉代修饰、氨基磷酸酯修饰、5'-硫代磷酸酯基团修饰、5'磷酸或5'磷酸模拟物修饰和胆甾烯基衍生物或十二烷酸双癸酰胺（bisdecylamide）基团修饰和/或修饰的核苷酸可以是锁定核苷酸、无碱基核苷酸或包含非天然碱基的核苷酸中的任何一种。至少一种修饰可以是2'-O-甲基和/或至少一种修饰可以是2'-F。本专利技术的核酸可以在第一和/或第二链的末端一个、两个或三个3'核苷酸和/或一个两个或三个5'核苷酸之间包含硫代磷酸酯键。它可以在第一链上的三个末端3'的每一个之间和三个末端5'核苷酸的每一个之间包含两个硫代磷酸酯键，并且在第二链的3'端的三个末端核苷酸之间包含两个硫代磷酸酯键。这种核酸可以与配体缀合。本专利技术进一步提供了用于抑制细胞中靶基因表达的核酸，其包含至少一个双链体区，所述双链体区包含第一链的至少部分和第二链的至少部分，所述第二链至少部分地与所述第一链互补，其中所述第一链至少部分地与由所述靶基因转录的RNA的至少部分互补本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于抑制细胞中靶基因表达的核酸，其包含至少一个双链体区，所述双链体区包含第一链的至少部分和第二链的至少部分，所述第二链至少部分地与所述第一链互补，其中所述第一链至少部分地与由所述靶基因转录的RNA的至少部分互补，其中所述第一链在多个位置包含修饰的核苷酸，且其中自所述第一链的5'端起位置2和14的核苷酸不用2'O-甲基修饰进行修饰。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170405 EP 17165129.2;20171113 EP 17201352.6;20171.用于抑制细胞中靶基因表达的核酸，其包含至少一个双链体区，所述双链体区包含第一链的至少部分和第二链的至少部分，所述第二链至少部分地与所述第一链互补，其中所述第一链至少部分地与由所述靶基因转录的RNA的至少部分互补，其中所述第一链在多个位置包含修饰的核苷酸，且其中自所述第一链的5'端起位置2和14的核苷酸不用2'O-甲基修饰进行修饰。


2.权利要求1的核酸，其中自所述第一链的5'端起位置2和14的核苷酸是修饰的。


3.根据权利要求2的核酸，其中自所述第一链的5'端起位置2和14的核苷酸不用2'O-甲基修饰进行修饰，且所述第二链上对应于所述第一链位置13的核苷酸不用2'O-甲基修饰进行修饰。


4.根据权利要求2的核酸，其中自所述第一链的5'端起位置2和14的核苷酸不用2'O-甲基修饰进行修饰，且所述第二链上对应于所述第一链位置11的核苷酸不用2'O-甲基修饰进行修饰。


5.根据权利要求2-4的核酸，其中自所述第一链的5'端起位置2和14的核苷酸不用2'O-甲基修饰进行修饰，且所述第二链上对应于所述第一链位置11和13的核苷酸不用2'O-甲基修饰进行修饰。


6.任何前述权利要求的核酸，其中所述第二链上对应于自所述第一链的5'端起位置11和/或13的核苷酸是修饰的。


7.根据权利要求2-6的核酸，其中自所述第一链的5'端起位置2和14的核苷酸不用2'O-甲基修饰进行修饰，且所述第二链上对应于所述第一链位置11，或13，或11和13，或11-13的核苷酸用2'氟修饰进行修饰。


8.根据权利要求2-7中任一项的核酸，其中所述自第一链的5'端起位置2和14的核苷酸用2'氟修饰进行修饰，...

【专利技术属性】
技术研发人员：J豪普特曼，D萨马尔斯基，C弗劳恩多夫，
申请(专利权)人：赛伦斯治疗有限责任公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE