抗病毒剂制造技术

提供一种具有二氨基磷酸吗啉代寡聚体的抗病毒剂，所述寡聚体具有针对寨卡病毒(ZIKV)毒株的基因组的一部分的反义序列。所述抗病毒剂具有许多用途，比如在药用组合物，治疗ZIKV介导的疾病的方法，预防ZIKV介导的疾病的方法，减少或防止ZIKV在宿主细胞中的复制的方法，控制ZIKV在捐献的组织、经处理的组织样品中的扩散的方法中，以及在用于治疗或预防ZIKV介导的疾病的药物的制备中。

Antiviral agent

An antiviral agent is provided with a morpholine diaminophosphate oligomer having an antisense sequence that is part of the genome of a zikv virus strain. The anti-virus agent has many uses, such as in pharmaceutical compositions, methods for treating zikv mediated diseases, methods for preventing zikv mediated diseases, methods for reducing or preventing zikv replication in host cells, methods for controlling zikv diffusion in donated tissues, processed tissue samples, and drug preparation for treating or preventing zikv mediated diseases Medium.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗病毒剂相关申请的交叉参考本申请引用了美国专利申请号62/434802(2016年12月15日递交)和62/560144(2017年9月18日递交)的优先权，两者均在审理中。上述两个申请均通过参考以其全部结合至本文中。背景A.公开领域本公开总体上涉及药物，并且具体地讲涉及抗病毒剂。提供这种抗病毒剂以及与其一起使用的方法和试剂盒。B.背景寨卡病毒(ZIKV)为黄病毒科、黄病毒属的成员，该属还包括登革热、西尼罗、日本脑炎和黄热病病毒。ZIKV为蚊子传播的虫媒病毒，主要通过伊蚊属(Aedes)科的载体传播，特别是埃及伊蚊(Aedesaegypti)和白纹伊蚊(Aedesalbopictus)。ZIKV已迅速蔓延到美洲和加勒比海地区的超过50个国家，感染了超过200万人。ZIKV感染导致70%-80%的感染个体出现无症状疾病；然而，ZIKV感染与婴儿的格林-巴利综合征和小头畸形的发病率增加密切相关。ZIKV感染的临床表现包括皮疹、头痛、肌痛、关节疼痛和结膜炎，但在很大程度上为自限性的。然而，在免疫抑制的情况下的ZIKV疾病知之甚少。在Nogueira等人的一个小案例研究中，他们发现ZIKV的同种异体移植传播可在免疫抑制的SOTp(实体器官移植患者)中发生，导致肾移植和肝移植患者两者的临床疾病。在这项研究中，入院时在移植之后感染ZIKV的4名患者出现细菌感染、发热、肌痛和无力以及急性肝脏或肾脏损害的迹象。他们没有皮疹、结膜炎或神经症状，但4人中有3人为贫血，并且全部为血小板减少。目前没有针对ZIKV感染的特异性治疗或疫苗。这代表了对ZIKV有效治疗的迫切未满足的医疗需求。即使要开发疫苗，ZIKV疾病的零星爆发也可能需要广泛的疫苗接种，这可能不是成本有效的。对于治疗急性疾病的治疗性干预或接受来自ZIKV感染的捐献者的同种异体移植的免疫抑制的SOTp的及时预防的需求是必要的。概述以上阐述的问题及其他问题通过有效防止ZIKV复制的抗病毒剂的专利技术来解决(尽管应当理解，并非所有这种问题都将通过每个这种实施方案来解决)。在第一方面，提供一种包含二氨基磷酸吗啉代寡聚体的抗病毒剂，所述寡聚体包含针对ZIKV毒株的基因组的一部分的反义序列。在第二方面，提供一种用于治疗或预防由ZIKV介导的疾病的药用组合物，组合物包含：以上抗病毒剂和药学上可接受的载体。在第三方面，提供一种在需要它的受试者中治疗或预防由ZIKV介导的疾病的方法，方法包括给予受试者治疗有效量的以上药用组合物。在第四方面，提供一种减少或防止ZIKV在宿主细胞中的复制的方法，方法包括使宿主细胞与以上抗病毒剂接触。在第五方面，提供一种控制ZIKV在捐献的组织中扩散的方法，方法包括使捐献的组织暴露于有效量的以上抗病毒剂。在第六方面，提供一种经处理的捐献的组织样品，其包含捐献的组织样品和以上抗病毒剂。在第七方面，提供以上抗病毒剂在制备用于治疗或预防由ZIKV介导的疾病的药物中的用途。以上呈现简化的概述，以提供对所要求保护的主题的一些方面的基本理解。该概述不是一个广泛的综述。其不旨在识别重要或关键的要素或者描述所要求保护的主题的范围。其唯一目的是以简化形式呈现一些概念，作为稍后呈现的更详细描述的序言。附图简述图1A和1B：在用DWK-M1处理之后用ZIKV感染的人肾小球足细胞的RT-PCR分析。(1A)用ZIKV感染72小时的肾小球足细胞的定量实时qRT-PCR分析。显示模拟感染的足细胞、用野生型ZIKV感染的足细胞和用DWK-M1吗啉代预处理24小时+ZIKV72小时的足细胞。(1B)用ZIKV感染72小时的肾小球足细胞的qRT-PCR分析。显示模拟感染的足细胞、暴露于对照吗啉代(CoDWK)的足细胞、暴露于CoDWK+ZIKV感染的足细胞、仅暴露于DWK-M1的足细胞、用野生型ZIKV感染的足细胞、以及暴露于DWK-M1+ZIKV感染的足细胞。将所有数值标准化为GAPDH。图2：使用针对ZIKV的E蛋白的4G-2抗体对ZIKV感染的足细胞进行免疫荧光染色，(A)模拟感染的足细胞用4G-2抗体染色，(B)足细胞用野生型ZIKV感染72小时并用4G-2抗体染色，(C)足细胞用DWK-M1预处理24小时，然后用ZIKV感染72小时，并用4G-2抗体染色。在安装有电荷耦合器件(CCD)照相机的NikonTE2000S显微镜上以放大200x拍摄相位和荧光图像。对于荧光图像，使用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)将核染成蓝色。图3：显示来自ZIKV感染的足细胞的蛋白质溶解产物的蛋白质印迹分析。结果包括模拟感染的足细胞、暴露于对照吗啉代(CoDWK)的足细胞、暴露于CoDWK和ZIKV感染的足细胞、暴露于单独的DWK-M1的足细胞、用野生型ZIKV感染的足细胞和暴露于DWK-M1+ZIKV感染的足细胞。E蛋白(E2抗原)的ZIKV表达如上图所示。中图显示足细胞标记物突触足蛋白和下图显示作为上样对照的GAPDH。图4A：感染之后72小时暴露于DWK-M1之后，用ZIKV感染的足细胞的RANTES的实时PCR分析。结果显示，在用CoDWK和DWK-M1吗啉代预处理24小时之后足细胞中的RANTES的ZIKV诱导。还显示模拟感染和吗啉代对照(没有ZIKV)。将所有数值标准化为GAPDH。图4B：在感染之后72小时暴露于DWK-M1之后，用ZIKV感染的足细胞的MP1-α的实时PCR分析。结果显示，在用CoDWK和DWK-M1吗啉代预处理24小时之后MIP-1α的ZIKV诱导。还显示模拟感染和吗啉代对照(没有ZIKV)。将所有数值标准化为GAPDH。图4C：在感染之后72小时暴露于DWK-M1之后，用ZIKV感染的足细胞的TNFα的实时PCR分析。结果显示，在用CoDWK和DWK-M1吗啉代预处理24小时之后足细胞中的TNF-α的ZIKV诱导。还显示模拟感染和吗啉代对照(没有ZIKV)。将所有数值标准化为GAPDH。图4D：在感染之后72小时暴露于DWK-M1之后，用ZIKV感染的足细胞的IFN-b的实时PCR分析。结果显示，在用CoDWK和DWK-M1吗啉代预处理24小时之后足细胞中的INF-b的ZIKV诱导。还显示模拟感染和吗啉代对照(没有ZIKV)。将所有数值标准化为GAPDH。图5：体内吗啉代的结构示意图。体内吗啉代由与用作传递部分的八胍树状聚体共价连接的25聚体长吗啉代寡核苷酸组成。显示ZIKVPRVABC59体内吗啉代DWK-1(之前称为DWK-M1)的核苷酸序列。图6：DWK-1和CoDWK-1对感染的人足细胞中的细胞内ZIKVRNA积累的剂量依赖性影响。用指定剂量的DWK-1或CoDWK-1将足细胞预处理24小时，冲洗并在不存在吗啉代的情况下以MOI为0.1用ZIKV感染。在72小时p.i，从模拟感染和ZIKV感染的细胞中分离总RNA。通过qRT-PCR测定ZIKVRNA的表达，并将其标准化为GAPDHmRNA表达。ZIKV感染一式三份本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种限制寨卡病毒(ZIKV)在细胞中的复制的抗病毒剂，所述抗病毒剂包含二氨基磷酸吗啉代寡聚体(PMO)，所述寡聚体包含针对ZIKV毒株的基因组的一部分的反义序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20161215 US 62/434802;20170918 US 62/5601441.一种限制寨卡病毒(ZIKV)在细胞中的复制的抗病毒剂，所述抗病毒剂包含二氨基磷酸吗啉代寡聚体(PMO)，所述寡聚体包含针对ZIKV毒株的基因组的一部分的反义序列。


2.一种用于治疗或预防由寨卡病毒(ZIKV)介导的疾病的药用组合物，所述组合物包含：权利要求1的抗病毒剂和药学上可接受的载体。


3.权利要求2的药用组合物，其中所述药学上可接受的载体选自：媒介物、佐剂、表面活性剂、悬浮剂、乳化剂、惰性填充剂、稀释剂、赋形剂、润湿剂、粘合剂、润滑剂、缓冲剂、崩解剂、辅剂、着色剂和矫味剂。


4.权利要求2的药用组合物，其中所述抗病毒剂以治疗有效量存在。


5.权利要求4的药用组合物，其中所述治疗有效量足以在受试者的病毒感染部位提供浓度为至少约10μM的所述抗病毒剂。


6.权利要求4的药用组合物，其中所述治疗有效量为非毒性的量。


7.权利要求4的药用组合物，其中所述治疗有效量足以为受试者提供浓度低于LD50的所述抗病毒剂。


8.权利要求4的药用组合物，其中所述治疗有效量足以提供达到选自0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.5、1、1.5、2、3、5、10、15、20、30mg/kg、约任何上述值及任何上述值之间的范围的量的剂量/体重浓度的所述抗病毒剂。


9.权利要求2的药用组合物，其中配制所述药用组合物以将所述抗病毒剂传递至受试者的循环系统、胎盘、胎儿、眼、肾、脑、皮肤、睾丸、神经元、干细胞、阴道、脾、听觉系统或上述的任何组合。


10.一种在需要它的受试者中治疗或预防由寨卡病毒(ZIKV)介导的疾病的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效量的权利要求2的药用组合物。


11.权利要求2的药用组合物，其中所述由ZIKV介导的疾病选自：寨卡热、格林-巴利综合征、先天性缺陷、小头畸形、眼部疾病和寨卡相关的器官病理学。


12.权利要求10的方法，其中所述由ZIKV介导的疾病选自：寨卡热、格林-巴利综合征、先天性缺陷、小头畸形、眼部疾病和寨卡相关的器官病理学。


13.一种减少或防止寨卡病毒(ZIKV)在宿主细胞中的复制的方法，所述方法包括使所述宿主细胞与有效量的权利要求1的抗病毒剂接触。


14.权利要求13的方法，其中所述宿主细胞选自：视网膜内皮细胞、视网膜微血管内皮细胞、视网膜色素上皮细胞、视网膜周细胞、肾脏细胞、肾小球足细胞、肾脏肾小球内皮细胞、系膜细胞、细胞滋养层、合体滋养层、人脑微血管内皮细胞、人神经干细胞、星形胶质细胞、成神经细胞瘤细胞、神经祖细胞、胎盘内皮细胞、胎盘成纤维细胞、霍夫鲍尔细胞、羊膜上皮细胞、绒毛膜绒毛细胞、角质形成细胞、真皮成纤维细胞、树突状细胞、脐静脉内皮细胞、主动脉内皮细胞、冠状动脉内皮细胞、隐静脉内皮细胞、神经胶质细胞、初级精母细胞、塞尔托利氏细胞、视网膜双极细胞、视网膜神经节细胞、视神经细胞、Vero细胞及其组合。


15.一种控制ZIKV在捐献的组织或器官的样本中的扩散的方法，所述方法包括使所述样本暴露于有效量的权利要求1的抗病毒剂。


16.权利要求15的方法，其中所述捐献的器官选自：心脏、肠、肾、肝、肺和胰腺；或者所述捐献的组织选自：骨、软骨、角膜、硬脑膜、筋膜、心脏瓣膜、韧带、心包、皮肤、肌腱和静脉。


17.权利要求15的方法，所述方法包括用所述抗病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：DJ阿尔岑多尔，W波皮克，
申请(专利权)人：梅哈里医学院，
类型：发明
国别省市：美国;US