SNF7基因及其防治瓢虫的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种SNF7基因及其防治瓢虫的应用。本发明专利技术筛选得到一种对茄二十八星瓢虫具有高致死效应的基因SNF7，并开发了对茄二十八星瓢虫具有高致死能力的靶标基因dsRNA(dsSNF7)，从而提供了一种利用dsSNF7对茄二十八星瓢虫的致死效应防治茄二十八星瓢虫的方法。该方法操作方便、有效性和灵敏性好、杀虫效率高，且具有环境友好等诸多优点，有很好的应用前景。

Snf7 gene and its application in Ladybug control

The invention discloses snf7 gene and application for controlling ladybug. The invention obtains a gene snf7 with high lethality to Ladybug 28, and develops a target gene dsRNA (dssnf7) with high lethality to Ladybug 28, thus providing a method for preventing and treating Ladybug 28 by using the lethality of dssnf7 to Ladybug 28. This method has many advantages, such as convenient operation, good efficiency and sensitivity, high insecticidal efficiency, environmental friendliness and so on.

【技术实现步骤摘要】
SNF7基因及其防治瓢虫的应用
本专利技术属于虫害防控
更具体地，涉及一种SNF7基因及其防治瓢虫的应用。
技术介绍
茄二十八星瓢虫Henosepilachnavigintioctopunctata(Fabricius)属于鞘翅目瓢虫科，是一种重要的农业害虫，寄主植物十分广泛，主要为害茄子、马铃薯和番茄等茄科蔬菜。其幼虫和成虫均以叶片为食，喜群集于叶片背面，取食下表皮、叶肉，受害叶片通常形成不规则透明斑或穿孔，严重时造成植株萎蔫甚至整株死亡。茄二十八星瓢虫在我国的分布范围广泛，尤其是长江以南发生密度较大。近年来，由于气候变暖、贸易发展以及保护地蔬菜栽培面积的扩大，其食料一年四季不断，茄二十八星瓢虫的发生和为害愈加严重。2015年，我国启动了马铃薯主粮化战略，必将进一步扩大我国马铃薯的种植面积，茄二十八星瓢虫的防治刻不容缓。目前，茄二十八星瓢虫的防治包括人工捕捉、引诱剂诱杀、化学农药。其中人工捕捉不仅效果差，还有十分繁重的劳力问题；而引诱剂诱杀的效果也不尽如人意，不彻底；因此更多还是依赖于化学农药，但是化学农药会引起环境污染和农产品质量安全等众多问题。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是一种在进化上保守，依赖于产生的短片段RNAs(siRNAs)，从而促进同源mRNA的降解或抑制其翻译的作用机制。RNAi提供了一个在昆虫中进行功能基因组学研究的重要工具，且为开发对环境友好的害虫治理方法奠定了基础。由于使用RNAi技术可以特异性抑制基因的表达，所以该技术已经广泛应用于靶向干扰害虫基因从而达到防治害虫的目的，但是目前国内外还没有对茄二十八星瓢虫基因功能的研究，未有杀虫活性的靶标基因报道。本专利技术人团队前期研究显示(201710949193.9)，利用直接饲喂合适的外源dsRNA的方式即可实现对瓢虫的毒性，因此从基因层面开发适用于防治茄二十八星瓢虫的外源dsRNA产品，使用方便、成本低，更由于基因的特异性，可实现精确、优异的防治效果，对环境友好，在茄二十八星瓢虫的防治方面具有很大的应用前景。然而，相关靶标基因的筛选，以及防治效果好、特异、稳定的dsRNA的设计是最大的难题和关键问题。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有茄二十八星瓢虫防治技术的缺陷和不足，提供一种茄二十八星瓢虫的高致死基因，即SNF7基因。并基于该基因开发了能够高效防治茄二十八星瓢虫的技术，即直接饲喂对茄二十八星瓢虫具有高致死能力的靶标基因dsRNA，利用dsSNF7对茄二十八星瓢虫的致死效应达到防治目的。该方法操作方便、有效性和灵敏性好、杀虫效率高，且具有环境友好等诸多优点，有很好的应用前景。本专利技术的目的是提供一种茄二十八星瓢虫SNF7基因及其防治茄二十八星瓢虫的应用。本专利技术另一目的是提供一种可用于防治茄二十八星瓢虫的SNF7基因的dsRNA及其应用。本专利技术再一目的是提供一种防治茄二十八星瓢虫的方法及试剂盒。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：本专利技术基于茄二十八星瓢虫的转录组文库，筛选得到一个高致死基因——SNF7基因，并开发了饲喂SNF7基因的dsRNA(dsSNF7)防治茄二十八星瓢虫的技术。本专利技术把茄子叶片分别浸泡在试剂盒合成的dsSNF7和dsGFP的溶液中，取出晾干后饲喂茄二十八星瓢虫的1龄幼虫2天，而后以未用dsRNA处理的茄子叶片饲喂，观察记录茄二十八星瓢虫的死亡率和发育状态；另外，用菌液表达dsSNF7的方法测定了其对茄二十八星瓢虫1龄、3龄以及成虫的致死能力，进而全面的评价外源dsSNF7对茄二十八星瓢虫的杀虫活性。最后，利用荧光定量PCR(qPCR)的方法检测分析了SNF7基因在取食了dsSNF7和dsGFP茄二十八星瓢虫中的表达量变化。结果显示，直接饲喂外源dsSNF7可显著抑制茄二十八星瓢虫SNF7基因表达，直接饲喂外源dsSNF7对茄二十八星瓢虫具有高致死效应。因此，以下主题及应用均应在本专利技术保护范围之内：一种茄二十八星瓢虫SNF7基因，其序列如SEQIDNO.1所示。所述SNF7基因在防治茄二十八星瓢虫或制备防治茄二十八星瓢虫的产品中的应用。所述SNF7基因在抑制茄二十八星瓢虫生长或制备抑制茄二十八星瓢虫生长的产品中的应用。所述SNF7基因在促进茄二十八星瓢虫死亡或制备促进茄二十八星瓢虫死亡的产品中的应用。所述SNF7基因的抑制剂在防治茄二十八星瓢虫或制备防治茄二十八星瓢虫的产品中的应用。一种可用于防治茄二十八星瓢虫的dsRNA，该dsRNA沉默靶基因为上述SNF7基因。优选地，所述dsRNA序列如SEQIDNO.1所示。一种防治茄二十八星瓢虫的试剂盒，含有SNF7基因抑制剂。优选地，所述抑制剂为上述dsRNA。具体地，利用SNF7基因防治茄二十八星瓢虫的途径之一，即一种防治茄二十八星瓢虫的方法，直接饲喂外源dsRNA，使得dsSNF7进入茄二十八星瓢虫体内，该dsRNA可沉默/抑制茄二十八星瓢虫的SNF7基因表达，抑制茄二十八星瓢虫生长、促进茄二十八星瓢虫死亡，从而达到防治茄二十八星瓢虫的目的。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术筛选得到一种茄二十八星瓢虫的高致死基因SNF7基因，并开发了其高效沉默dsRNA，开发了能够高效防治茄二十八星瓢虫的技术，即直接饲喂对茄二十八星瓢虫具有高致死能力的靶标基因dsRNA，利用dsSNF7对茄二十八星瓢虫的致死效应达到防治目的。该方法操作方便、有效性和灵敏性好、杀虫效率高，且具有环境友好等诸多优点，有很好的应用前景。附图说明图1为菌液表达的dsGFP和dsSNF7电泳图。图2为不同浓度的dsSNF7对茄二十八星瓢虫幼虫死亡率的影响。利用实验开始后10天的幼虫死亡率数据，用Cox回归程序建立存活曲线。不同字母(如a、b)表示对照曲线与处理曲线有显著性差异。图3为取食菌液表达的dsSNF7对茄二十八星瓢虫存活率的影响(图A：1龄幼虫的存活率；图B：3龄幼虫的存活率；图C：成虫的存活率)。分别利用10天、10天、14天的1龄幼虫、3龄幼虫和成虫的死亡率数据，用Cox回归程序建立存活曲线。不同字母(如a、b)表示对照曲线与处理曲线有显著性差异。图4为饲喂dsRNA开始的第3天，正常发育的dsGFP对照组(A)和死亡的dsSNF7处理组(B)茄二十八星瓢虫表型差异。图5为取食dsSNF7和dsGFP后的第2天和第4天，茄二十八星瓢虫中SNF7基因表达量的变化。具体实施方式以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本专利技术所用试剂和材料均为市购。下述实施例中所用茄二十八星瓢虫，于华南农业大学昆虫学系饲养。饲养茄二十八星瓢虫的茄子为万盛元帅圆茄苗，将瓢虫放与含滤纸的培养皿中，滤纸用棉球保湿，放入人工气候箱中(温度2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种茄二十八星瓢虫SNF7基因，其特征在于，其序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种茄二十八星瓢虫SNF7基因，其特征在于，其序列如SEQIDNO.1所示。


2.一种可用于防治茄二十八星瓢虫的dsRNA，其特征在于，所述dsRNA沉默靶基因为权利要求1所述SNF7基因。


3.权利要求1所述SNF7基因或权利要求2所述dsRNA在防治茄二十八星瓢虫或制备防治茄二十八星瓢虫的产品中的应用。


4.权利要求1所述SNF7基因或权利要求2所述dsRNA在抑制茄二十八星瓢虫生长或制备抑制茄二十八星瓢虫生长的产品中的应用。


5.权利要求1所述SNF7基因或权利要求2所述dsRNA在促进茄二十八星瓢虫死亡或制备促进茄二十八星瓢虫死亡...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘慧鹏，吕晶，郭威，杨春晓，郭木娟，陈诗敏，邱宝利，刘卓琦，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44