miR#4脂质体药物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体涉及一种对于急性肝衰竭有预防和治疗作用的miR#4脂质体药物及其制备方法，该脂质体药物包括空白阳性脂质体和功能化miR#4，按照摩尔比40‑50：40‑30：10：10‑1称取阳离子脂质、胆固醇、二硬磷脂酰胆碱和结构磷脂，将所称取的原料加入无水乙醇中，加热至全部溶解得到脂质乙醇溶液，将脂质乙醇溶液在高速搅拌下滴加至柠檬酸钠缓冲液中，然后在水化形成混合溶液，将混合溶液进行孵育，然后利用脂质体挤压器通过80nm孔径的滤膜后得到空白阳性脂质体；取功能化miR#4的水溶液，用柠檬酸钠缓冲液和无水乙醇配置成含醇30％的功能化miR#4溶液；将空白阳性脂质体通过交叉流的方式与等体积的功能化miR#4溶液混合，并孵育制得miR#4脂质体药物。

Mir Chen 4 liposome and its preparation

The invention relates to the field of biomedical technology, in particular to a mir\u0dcf4 liposome drug with prevention and treatment effect for acute liver failure and a preparation method thereof. The liposome drug comprises a blank positive liposome and a functional mir\ud919\udcff4. According to the molar ratio of 40 \u2011 50:40 \u2011 30:10:10 \u2011 1, the cationic lipid, cholesterol, dihydrophosphatidylcholine and structural phospholipid are weighed, and the structure phospholipid is weighed The raw material of the product is added into anhydrous ethanol, heated to the full dissolution to obtain the lipid ethanol solution. The lipid ethanol solution is dripped into the sodium citrate buffer solution under high-speed agitation, then the mixed solution is formed by hydration, and the mixed solution is incubated, and then the blank positive liposome is obtained by passing through the 80 nm pore diameter filter membrane with the liposome extruder; the water solution of the functional mir#4 is taken, and the lime is used Sodium citrate buffer and anhydrous ethanol were used to prepare the functional mir-4 solution containing 30% alcohol. The blank positive liposome was mixed with the functional mir-4 solution of the same volume by cross flow, and the mir-4 liposome drug was incubated.

【技术实现步骤摘要】
miR#4脂质体药物及其制备方法
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种miR#4脂质体药物及其制备方法。
技术介绍
急性肝衰竭是众所周知的临床急重症，目前除了人工肝脏和肝移植等有限的疗法外，无任何药物可以治疗，而世界范围内，约半数的急性肝衰竭是由药物性肝损伤引发。随着2017年美国食品药品监督局(FDA)批准三项基因治疗药物上市，目前全球共有七种基因治疗药物在美国或欧洲实现临床商业化应用。在此大背景下，随着IonisPharmaceuticals公司的反义寡核苷酸药物(ASO)Spinraza(nusinersen)和Tegesedi(inotersen)以及AlnylamPharmaceuticals公司的siRNA药物Onpattro(patisiran)近日相继获得FDA的批准，RNA疗法作为基因疗法的一个重要组成部分同样受到医药界和资本界的热烈追捧。目前在美国共有包括由赛诺菲，罗氏，阿斯利康等世界药物巨头牵头进行的20多项RNA疗法已经进入了临床2-3期试验。急性肝衰竭是一种预后凶险的疾病，目前尚未有任何有效药物预防或治疗急性肝衰竭，目前急性肝衰竭主要的治疗手段主要集中在以下几个方面：内科基础治疗、人工肝治疗及肝移植等。现阶段药物综合治疗和人工肝治疗仍然作为国内治疗的主要手段，国外则多以肝移植来治疗。1.内科基础治疗：内科基础治疗的原则是早期诊断、早期治疗，针对不同病因采取相应的综合治疗，并积极防治各种并发症，为肝细胞的再生赢得时间。首先是一般支持治疗，如严格消毒隔离、保证每日能量和液体供给、维持内环境稳定、动态监测肝功能等，然后是针对病因给予一定药物治疗，如对病毒性肝炎引起的急性肝衰竭进行抗病毒治疗；对酒精性肝衰竭患者给予糖皮质激素治疗(糖皮质激素对HBV所致慢加急性肝衰竭患者的应用存在争议)；为减少肝细胞坏死，促进肝细胞再生，可使用促肝细胞生长素和前列腺素El(PEG1)脂质体等药物(疗效尚需进一步确认)。最后就是强调营养支持治疗，为肝细胞再生赢取时间。2.人工肝支持治疗：原理是通过将肝衰竭患者血浆与新鲜血浆进行置换，达到清除有害物质，补充机体必需物质，改善内环境的作用，暂时替代衰竭肝脏部分功能，为肝细胞再生及肝功能恢复创造条件或等待机会进行肝移植。人工肝治疗也是内科综合治疗的一部分。3.肝移植：对于各种原因所致的中、晚期肝衰竭，经积极内科和人工肝治疗仍呈不可逆转的急性肝衰竭者应及早考虑肝移植。肝移植尽管可以有效改善患者的肝脏功能，但因手术复杂性、器官来源、免疫排斥反应以及相当高昂的费用(国内肝移植手术平均费用30万左右，不包括为避免免疫排斥而长期使用免疫抑制剂带来的后期费用)等原因，大大限制了肝移植治疗的开展。据中国人民解放军第302医院对2002到2011年收入院治疗的近500例急性及亚急性肝衰竭病因学普查显示，药物毒性导致的肝衰竭患者占到近20％。同时因药物中毒导致的未达临床肝衰竭指征的肝炎、肝损伤患者数目更加庞大。而目前急性肝衰竭的临床诊疗尚无有效的药物治疗方案，人工肝脏透析疗法花费约50000元/疗程，肝移植的手术费用平均为300000元/例。其医疗成本和后续医护费用高昂，并且由于肝源严重短缺，大多数患者无法得到有效的救助，加重了患者的痛苦及社会医疗负担。急性肝衰竭(acuteliverfailure,ALF)是各种原因引起肝细胞坏死或大部分功能失常而导致肝功能衰竭的一种危重肝病表现。作为一项全球性疾病，其病因包括肝炎、药物毒物中毒，遗传代谢障碍、自审免疫异常等等。在欧美发达国家，急性肝衰竭的发病率约为10例/百万人(考虑到部分患者在送医途中已经病故，急性肝衰竭的发病率应该更高)，其中因药物性肝损伤导致的急性肝衰竭占比高达50％。根据最新流行病学调查显示，在美国，每年因药物导致的肝损伤(Drug-inducedliverinjury,DILI)大约是60000例(20例/10万人/年)，其中数千人发展成为急性肝衰竭。而在中国，解放军第302医院肝衰竭诊疗与研究中心赵攀等人的研究报告通过分析我国7家三级部队医院的177例急性肝衰竭患者病因发现，我国急性肝衰竭(ALF)的最主要病因依然是药物中毒(特别是中草药)，达到43.5％(如表1所示)。表1：我国7家三级部队医院177例急性肝衰竭患者病因分类急性肝衰竭病例：经典案例1：2013年4月1日，复旦大学2010级硕士研究生黄洋同学因喝饮水机里的被室友投毒的水，经抢救无效，于2013年4月16日在附属中山医院去世。“复旦投毒案”一出，震惊全国。经鉴定，该案所投毒物是N-二甲基亚硝胺，该物质毒性强，用于在实验动物中人为制造肝损伤的模型。黄洋同学因为饮用过量毒物引发急性肝衰竭，最终多器官衰竭不治而亡。经典案例2：2015年12月，中南林业科技大学硕士崔飞，先后在两家医院治疗脱发，坚持服用了两家医院共计1.89kg生首乌、1.06kg制首乌，剂量总共达到5.9斤，最终引发药物性肝衰竭不治身亡。基于目前无任何药物可以治疗急性肝衰竭，本专利技术提供一种miR#4脂质体药物及其制备方法，以对急性肝衰竭进行药物性治疗、预防和缓解。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种miR#4脂质体药物及其制备方法，解决对急性肝衰竭进行预防和缓解的问题。为解决上述的技术问题，本专利技术采用以下技术方案：一种miR#4脂质体药物，包括空白阳性脂质体和功能化miR#4。进一步的技术方案是，所述空白阳性脂质体由阳离子脂质、胆固醇、二硬磷脂酰胆碱和结构磷脂制成，所述阳离子脂质：胆固醇：二硬磷脂酰胆碱：结构磷脂的摩尔比为40-50：40-30：10：10-1。更进一步的技术方案是，所述阳离子脂质包括双油基双甲基氯化铵、N,N-二甲基-2,3-二油氧基丙胺、双十八烷基二甲基溴化铵、1,2-二油酰基-3-二甲基丙二醇胺、N-(N’,N’-二甲氨基乙基)氨甲酰基-胆固醇、N,N-二甲基-N-羟乙基-N-(1,2-双十四烷氧基)丙基溴化铵、1,2-二亚油氧基-N,N-二甲基丙胺、1,2-二亚麻氧基-N,N-二甲基丙胺中的一种或几种。更进一步的技术方案是，所述结构磷脂包括硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000。更进一步的技术方案是，所述功能化miR#4为化学合成双链的miR#4核苷酸的模拟物或类似物，所述功能化miR#4的正义链为5’-UUUGUUCGUUCGGCUCGCGUGA-3’，所述功能化miR#4的反义链为5’-ACGCGAGCCGAACGAACAAAUU-3’。本专利技术提供的第二种技术方案是：一种miR#4脂质体药物的制备方法，包括如下步骤：按照摩尔比40-50：40-30：10：10-1称取阳离子脂质、胆固醇、二硬磷脂酰胆碱和结构磷脂，将所称取的原料加入无水乙醇中，加热至全部溶解得到脂质乙醇溶液，将所述脂质乙醇溶液在高速搅拌下滴加至柠檬酸钠缓冲液中，然后在水化形成混合溶液，将所述混合溶液进行孵育，然后利用脂质体挤压器通过80nm孔径的滤膜后得到空本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种miR#4脂质体药物，其特征在于：包括空白阳性脂质体和功能化miR#4。/n

【技术特征摘要】
1.一种miR#4脂质体药物，其特征在于：包括空白阳性脂质体和功能化miR#4。


2.根据权利要求1所述的miR#4脂质体药物，其特征在于：所述空白阳性脂质体由阳离子脂质、胆固醇、二硬磷脂酰胆碱和结构磷脂制成，所述阳离子脂质：胆固醇：二硬磷脂酰胆碱：结构磷脂的摩尔比为40-50：40-30：10：10-1。


3.根据权利要求2所述的miR#4脂质体药物，其特征在于：所述阳离子脂质包括双油基双甲基氯化铵、N,N-二甲基-2,3-二油氧基丙胺、双十八烷基二甲基溴化铵、1,2-二油酰基-3-二甲基丙二醇胺、N-(N’,N’-二甲氨基乙基)氨甲酰基-胆固醇、N,N-二甲基-N-羟乙基-N-(1,2-双十四烷氧基)丙基溴化铵、1,2-二亚油氧基-N,N-二甲基丙胺、1,2-二亚麻氧基-N,N-二甲基丙胺。


4.根据权利要求2所述的miR#4脂质体药物，其特征在于：所述结构磷脂包括硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000。


5.根据权利要求1所述的miR#4脂质体药物，其特征在于：所述功能化miR#4为化学合成双链的miR#4核苷酸的模拟物或类似物，所述功能化miR#4的正义链为5’
-UUUGUUCGUUCGGCUCGCGUGA-3’，所述功能化miR#4的反义链为5’
-ACGCGAGCCGAACGAACAAAUU-3’。


6.一种miR#4脂质体药物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：按照摩尔比40-50：40-30：...

【专利技术属性】
技术研发人员：王祎，邵丹，沈晓飞，杨晓龙，
申请(专利权)人：成都宏济新瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51