本发明专利技术涉及肿瘤药物治疗领域，尤其指一种用于克服表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR‑TKI）耐药的自噬抑制剂在非小细胞肺癌治疗中的应用。所述自噬抑制剂为氯喹。所述EGFR‑TKI为厄洛替尼。本发明专利技术的有益效果：自噬参与了非小细胞肺癌EGFR‑TKI耐药的发生，自噬抑制剂氯喹能够通过抑制自噬，进而克服非小细胞肺癌EGFR‑TKI的耐药，联合氯喹及厄洛替尼能够在体内外有效杀伤对厄洛替尼耐药的肺癌细胞。
A method and application of autophagy inhibitor to overcome drug resistance in the treatment of lung cancer
The invention relates to the field of tumor drug treatment, in particular to the application of an autophagy inhibitor for overcoming the resistance of epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor (EGFR \u2011 TKI) in the treatment of non-small cell lung cancer. The autophagy inhibitor is chloroquine. EGFR \u2011 TKI is erlotinib. The invention has the beneficial effect that autophagy participates in the development of EGFR-TKI resistance of non-small cell lung cancer, and chloroquine, an autophagy inhibitor, can overcome the resistance of EGFR-TKI by inhibiting autophagy, and the combination of chloroquine and erlotinib can effectively kill the lung cancer cells resistant to erlotinib in vitro and in vivo.
【技术实现步骤摘要】
一种自噬抑制剂在肺癌治疗中克服耐药的方法及其应用
本专利技术涉及肿瘤药物治疗领域，尤其指一种用于克服表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）耐药的自噬抑制剂在非小细胞肺癌治疗中的应用。
技术介绍
肺癌是当今世界上对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率近年来呈明显上升趋势，严重威胁着人类健康。肺癌早期不易发现，70％肺癌病人就诊时已属中、晚期，常规放化疗疗效有限。近年来，随着对肺癌细胞异常信号转导途径的不断阐明，以吉非替尼、厄洛替尼为代表的表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）在改善晚期NSCLC患者疗效与生活质量中的作用已经得到国际多中心临床研究的充分肯定。然而遗憾的是，即便患者具有EGFR-TKI治疗敏感的EGFR基因外显子19缺失或外显子21L858R置换突变，随着治疗时间的延长最终均不可避免地产生获得性耐药而导致疾病进展，明确EGFR-TKI耐药性产生的机制以及开发克服EGFR-TKI耐药的治疗方法已经成为肺癌治疗领域中的研究热点。肺癌EGFR-TKI获得性耐药的分子机制十分复杂，目前得到普遍认同的是EGFR基因外显子20的T790M二次突变和c-MET原癌基因扩增。因此，近年来针对以上耐药机制，人们进行了一些有益的治疗探索。新一代EGFR酪氨酸激酶不可逆抑制剂或MET抑制剂和吉非替尼的联合治疗在体外能够显著抑制吉非替尼获得性耐药细胞的增殖、存活，并促进凋亡。然而，新近完成的包括HKI-272、BIBW2992、XL647和PF00299804在内的EGFR酪氨酸激酶不可逆抑制剂治疗吉非替尼获得性耐药NSCLC患者的临床Ⅰ、Ⅱ期试验结果并不十分理想，且目前这些研究大多还处在临床前或临床试验早期阶段；第三代EGFR-TKI在临床上也已取得了一定的疗效,但仍面临再次耐药的问题。以上耐药机制仅能解释约50%的耐药现象，仍有50%患者对EGFR-TKI的耐药机制尚不明确；因此，进一步阐明EGFR-TKI耐药性产生的机制并以此开发克服耐药的新策略显得尤为迫切。近年来，细胞自噬（autophagy）的研究引起了人们的重视，研究发现自噬是细胞适应环境变化、防御病原微生物侵袭、维持内环境稳定的重要机制。在多种人类肿瘤中存在有自噬活性的改变,自噬在肿瘤的发生发展过程中起到了重要作用。自噬与肿瘤关系密切，主要体现在两个方面：1）调控肿瘤发生，2）影响肿瘤治疗疗效。过去传统的观点是认为自噬抑制了肿瘤形成，主要证据有：1）很多人类肿瘤在遗传学上出现自噬基因的缺失；2）自噬基因敲除老鼠（例如Beclin1,UVRAG等）出现自发性肿瘤。但是，研究表明自噬不但能够肿瘤形成，而且也能促进白血病肿瘤的形成，自噬对肿瘤细胞的作用具有促进和抑制的双重作用，这种两面性取决于疾病进展的不同阶段，细胞周围环境的变化和治疗干预措施的不同。它既是体内的“垃圾处理厂”，也是“废品回收站”；它既可以抵御病原体的入侵，又可保卫细胞免受细胞内毒物的损伤。越来越多的研究证实，自噬是肿瘤对放、化疗及生物治疗耐药的重要机制之一，某些抗肿瘤治疗药物可以通过自噬机制发挥作用，近年来大量研究表明，自噬还可保护肿瘤细胞免受放化疗损伤，这种保护作用的机制可能是通过自噬清除受损的大分子或线粒体等细胞器，从而保护肿瘤细胞免于发生凋亡性程序性细胞死亡。自噬和癌细胞的形成、转化、治疗敏感性密切相关。癌细胞形成早期刺激自噬能够清除受损细胞器,分解细胞内过多的有害物质(如过氧化物等),阻止正常细胞向癌细胞转化,调控自噬的表达和化疗药物联合对肿瘤细胞的生长有协同或拮抗作用,表现为与单纯用化疗药物相比,调控自噬表达后肿瘤细胞的凋亡率发生了变化。在化疗或放疗中抑制自噬有可能导致癌细胞无法清除受损细胞器,加速细胞死亡,强化治疗效果。提示促进肿瘤细胞自噬活性甚至自噬性死亡是一条有价值的增加抗肿瘤疗效的新方法。
技术实现思路
本专利技术提供一种自噬抑制剂在肺癌治疗中克服耐药的方法及其应用。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：一种自噬抑制剂在肺癌治疗中克服耐药的方法，其为采用自噬抑制剂联合EGFR-TKI，所述自噬抑制剂为氯喹，EGFR-TKI为厄洛替尼。本专利技术还提供了一种自噬抑制剂在肺癌治疗中克服耐药的应用。所述克服耐药的策略为氯喹联合EGFR-TKI。所述EGFR-TKI为厄洛替尼。本专利技术的有益效果：自噬参与了非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药的发生，自噬抑制剂氯喹能够通过抑制自噬，进而克服非小细胞肺癌EGFR-TKI的耐药，氯喹能增强厄洛替尼对敏感细胞株的疗效，而且联合氯喹及厄洛替尼能够在体内外有效杀伤对厄洛替尼耐药的肺癌细胞。附图说明图1是Erlotinib耐药细胞株PER的建立图；图2是自噬相关分子在PC9及耐药细胞PER中的表达；图3是自噬抑制剂影响erlotinib的疗效；图4是自噬抑制剂对P-ERK、P-AKT信号的影响；图5是自噬抑制剂对肺癌EGFR-TKI耐药小鼠模型的治疗作用。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的实施例进行详细说明，但是本专利技术可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。实施例1自噬在EGFR-TKI耐药中的作用1.实验材料及方法RPMI1640培养液和胎牛血清购自美国Gibco公司；MTT购自美国Sigma公司；Erlotinib片购自上海罗氏制药有限公司；自噬相关标记蛋白LC3B（#2775）、P62(#5114)、Beclin1(#3738)以及GAPDH（#3683）抗体均购自CellSignalingTechnology公司；HRP标记山羊抗小鼠或抗兔IgG购自CellSignalingTechnology公司。1.2PC9细胞及erlotinib耐药细胞株PER的诱导人肺腺癌PC9细胞由上海市肺科医院周彩存教授惠赠；细胞在37℃5%CO2条件下用含10%胎牛血清、1640培养基中培养。采用erlotinib剂量梯度筛选方法建立erlotinib耐药的细胞株，从0.02umol/L开始，逐步增加erlotinib的浓度至10umol/L，体外培养共5个月。以不同药物浓度的对数值为横坐标，细胞抑制率为纵坐标绘制剂量反应曲线，并计算药物半数抑制浓度IC50。1.5统计学分析统计学分析均采用SPSS19.0进行，两组间比较用t检验，多组间比较采用方差分析。检验水准α=0.05。2.实验结果2.1Erlotinib耐药细胞株PER的诱导亲代PC9细胞对erlotinib敏感性，IC50为0.05±0.02umol/L；利用梯度递增的方法成功诱导erlotinib耐药细胞株PER,细胞形态与PC9细胞无明显差异，IC50达9.6±2.1umol/L，是PC9细胞的192倍，两组比较差异有统计学意义（p<0.01）无药培养2周，其IC50无明本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种自噬抑制剂在肺癌治疗中克服耐药的方法，其特征在于，其为采用自噬抑制剂联合EGFR-TKI，所述自噬抑制剂为氯喹，EGFR-TKI为厄洛替尼。/n
【技术特征摘要】
1.一种自噬抑制剂在肺癌治疗中克服耐药的方法，其特征在于，其为采用自噬抑制剂联合EGFR-TKI，所述自噬抑制剂为氯喹，EGFR-TKI为厄洛替尼。
2.一种自噬抑制剂在肺癌治疗中克服耐药的应...
【专利技术属性】
技术研发人员：周承志，刘明，汪延生，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：广东;44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。