一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法技术

本发明专利技术提供了一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，具体包括如下步骤：(1)外植体的选择；(2)外植体的预处理；(3)愈伤组织的诱导；(4)愈伤组织增殖分化培养；(5)生根培养；(6)炼苗移栽；(7)工厂化育苗。所述增殖分化分为3个阶段，且每个阶段的培养基不一样，均采用特制的增殖分化培养基，使得奇异核桃丛生芽增殖系数达到10～15倍；生根培养分为2个阶段，且每个阶段的培养基不一样，均采用特制的生根培养基，使得奇异核桃生根率最高可达85％以上；移栽成活率在90％以上，在短时间内可培育出大量适合栽培种植的奇异核桃幼苗，实现规模化生产。

A method of rapid tissue culture and industrialized seedling raising of Juglans regia

The invention provides a method for rapid tissue culture and industrialized seedling cultivation of Juglans regia, which comprises the following steps: (1) selection of explants; (2) pretreatment of explants; (3) induction of callus; (4) proliferation and differentiation of callus; (5) rooting culture; (6) seedling cultivation and transplanting; (7) industrialized seedling cultivation. The multiplication and differentiation can be divided into three stages, and the culture medium of each stage is different. The special multiplication and differentiation culture medium is used to make the multiplication coefficient of cluster buds of Kiwi walnut reach 10-15 times; the rooting culture can be divided into two stages, and the culture medium of each stage is different. The special rooting culture medium is used to make the rooting rate of Kiwi walnut reach up to 85%; the transplanting survival rate is up to 85% The rate is more than 90%. In a short time, a large number of exotic walnut seedlings suitable for cultivation can be cultivated to achieve large-scale production.

【技术实现步骤摘要】
一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法
本专利技术涉及苗木无性繁殖
，特别涉及一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法。
技术介绍
奇异核桃系美国北加州黑核桃(Juglanshind-sii)与核桃(J.regia)的杂交种。该树种杂种优势明显，速生性状强，适生范围广，不仅是核桃生产中的重要砧木资源，还是城镇绿化和农田林网化的优良材料。用奇异核桃作核桃砧木，不仅树体生长强壮，而且树体抗黑线病、根颈朽等病害，对根部寄生线虫也有较大的耐受性，具有很高的经济、生态和社会价值。但奇异核桃为异花授粉，故利用实生苗繁殖面临繁育系数低、核桃苗供给受季节限制性强等问题。而核桃扦插难以生根、嫁接则接口处伤流严重及氧化褐变，成活率很低，所以传统繁殖方法速度缓慢，严重影响了奇异核桃优质苗木的大规模推广。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，采用本专利技术所述的培养方法得到的奇异核桃丛生芽增殖系数达到10～15倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达85％以上，移栽成活率在90％以上，实现规模化生产，满足生产上的需要。本专利技术是这样实现的：本专利技术提供一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，具体包括如下步骤：步骤1、外植体的选择；步骤2、外植体的处理：将外植体进行预处理；步骤3、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中于15℃～17℃低温避光培养8～10天后，于常温条件下培养，诱导得到愈伤组织；所述诱导培养基为以核桃专用培养基DKW为基础培养基，添加0.4～0.6mg/L6-BA、0.04～0.06mg/L2-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、20％硫代硫酸钠、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；步骤4、愈伤组织增殖分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织依次置于3个增殖分化培养基中进行3个阶段的增殖分化培养获得丛芽；其中，第一阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.7～0.9mg/L6-BA、0.04～0.06mg/L2-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；第二阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.9～1.1mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；第三阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加1.1～1.3mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；步骤5、生根培养：将步骤4中得到的丛芽分成单芽依次置于2个生根培养基中进行2个阶段的培养得到完整带根苗，其中，第一阶段的生根培养基为以1/4DKW为基础培养基，添加4.0～6.0mg/L2-BA、1.4～1.6g/L的活性炭、15g/L蔗糖和4～5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；第二阶段的生根培养基为1/4DKW、15g/L蔗糖和4～5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；步骤6、移栽炼苗：将步骤5得到的完整带根苗洗净后移至工厂化棚炼苗；步骤7、工厂化育苗。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供的一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，采用本专利技术所述的培养方法得到的奇异核桃丛生芽增殖系数达到10～15倍，生根率最高可达85％以上，移栽成活率在90％以上，可在短时间内提供成活率高的奇异核桃优质种苗，有效解决奇异核桃的规模化育苗问题；具体地：(1)本专利技术人经过大量的创新性实验发现，诱导培养基采用“为以核桃专用培养基DKW为基础培养基，添加0.4～0.6mg/L6-BA、0.04～0.06mg/L2-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、20％硫代硫酸钠、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0”；且诱导培养时先于15℃～17℃低温避光培养8～10天，可有效防止褐变。(2)本专利技术人经过大量的创新性实验发现，将增殖分化分为3个阶段，且每个阶段的培养基不一样，均采用特制的增殖分化培养基，使得奇异核桃丛生芽增殖系数达到10～15倍。(3)本专利技术人经过大量的创新性实验发现，将生根培养分为2个阶段，且每个阶段的培养基不一样，均采用特制的生根培养基，使得奇异核桃生根率最高可达85％以上。(4)移栽成活率在90％以上，实现规模化生产，满足生产上的需要。具体实施方式实施例1步骤1、外植体的选择：先将奇异核桃苗在营养钵内于25℃培养20天，所述营养钵内的基质为体积比为1：1：1.2的海藻土：蛭石：火山灰；然后将得到的奇异核桃苗移至大棚内培养，大棚的培养基质为体积比为6：1的草炭土：蛭石；当大棚内的温度＜35℃，所述外植体选择顶芽；当大棚内的温度＝35℃，所述外植体选择第一腋芽；当大棚内的温度＞35℃，所述外植体选择第三腋芽和/或第四腋芽；步骤2、将外植体进行预处理：S1、清洗：用洗洁精水溶液清洗表面污垢后，进行流水冲洗；S2、将清洗后的嫩枝条于2℃～4℃冷藏避光处理4～8h；S3、移至超净工作台上，用0.1％v/vHgC12浸泡、用75％v/v酒精将种子和芽浸泡30s，20％的Na2S2O3浸泡1min，无菌水冲洗8-10次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分；步骤3、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中于16℃低温避光培养9天后，于常温条件下培养，诱导得到愈伤组织；所述诱导培养基为以核桃专用培养基DKW为基础培养基，添加0.5mg/L6-BA、0.05mg/L2-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、20％硫代硫酸钠、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；所述诱导培养基中还添加了益培隆(包括益培隆A液和益培隆B液，购自chembaseNO.B0019K0315114)、清菌益(购自chembaseNO.B0018K1015000)和灰黄霉素(购自广东台城制药股份有限公司，批准文号：国药准字H44020861)；所述常温培养条件为：培养温度为23～27℃，培养时间为8～12天，光照强度1500lux，光照时间为8～10小时/天。40L的诱导培养基中添加益培隆A液10mL和益培隆B液435mg，清菌益13g，灰黄霉素片5片(灰黄霉素片需要在112℃条件下灭菌30min后再添加到诱导培养基中)；步骤4、愈伤组织增殖分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织依次置于3个增殖分化培养基中进行3个阶段的增殖分化培养获得丛芽；其中，第一阶段(14天)：该阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.8mg/L6-BA、0.05mg/L2-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；第二阶段(10天)：该阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加1mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；第三阶段(10天)：该阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加1.2mg/L6本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：/n步骤1、外植体的选择；/n步骤2、外植体的预处理；/n步骤3、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中于15℃～17℃低温避光培养8～10天后，于常温条件下培养，诱导得到愈伤组织；所述诱导培养基为以核桃专用培养基DKW为基础培养基，添加0.4～0.6mg/L6-BA、0.04～0.06mg/L 2-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、20％硫代硫酸钠、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；/n步骤4、愈伤组织增殖分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织依次置于3个增殖分化培养基中进行3个阶段的增殖分化培养获得丛芽；其中，/n第一阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.7～0.9mg/L6-BA、0.04～0.06mg/L 2-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；/n第二阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.9～1.1mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；/n第三阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加1.1～1.3mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；/n步骤5、生根培养：将步骤4中得到的丛芽分成单芽依次置于2个生根培养基中进行2个阶段的培养得到完整带根苗，其中，/n第一阶段的生根培养基为以1/4DKW为基础培养基，添加4.0～6.0mg/L2-BA、1.4～1.6g/L的活性炭、15g/L蔗糖和4～5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；/n第二阶段的生根培养基为1/4DKW、15g/L蔗糖和4～5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；/n步骤6、移栽炼苗：将步骤5得到的完整带根苗洗净后移至工厂化棚炼苗；/n步骤7、工厂化育苗。/n...

【技术特征摘要】
1.一种奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
步骤1、外植体的选择；
步骤2、外植体的预处理；
步骤3、愈伤组织的诱导：将预处理后的外植体接种于诱导培养基中于15℃～17℃低温避光培养8～10天后，于常温条件下培养，诱导得到愈伤组织；所述诱导培养基为以核桃专用培养基DKW为基础培养基，添加0.4～0.6mg/L6-BA、0.04～0.06mg/L2-BA、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、20％硫代硫酸钠、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
步骤4、愈伤组织增殖分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织依次置于3个增殖分化培养基中进行3个阶段的增殖分化培养获得丛芽；其中，
第一阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.7～0.9mg/L6-BA、0.04～0.06mg/L2-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第二阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加0.9～1.1mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第三阶段的增殖分化培养基为以DKW为基础培养基，添加1.1～1.3mg/L6-BA、30g/L蔗糖和6g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
步骤5、生根培养：将步骤4中得到的丛芽分成单芽依次置于2个生根培养基中进行2个阶段的培养得到完整带根苗，其中，
第一阶段的生根培养基为以1/4DKW为基础培养基，添加4.0～6.0mg/L2-BA、1.4～1.6g/L的活性炭、15g/L蔗糖和4～5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
第二阶段的生根培养基为1/4DKW、15g/L蔗糖和4～5g/L琼脂，pH为5.5～6.0；
步骤6、移栽炼苗：将步骤5得到的完整带根苗洗净后移至工厂化棚炼苗；
步骤7、工厂化育苗。


2.如权利要求1所述的奇异核桃组培快繁和工厂化育苗的方法，其特征在于，所述步骤1的具体方法为：先将奇异核桃苗在营养钵内于24℃～26℃培养18～22天，所述营养钵内的基质为体积比为1：1：1～1.5的海藻土：蛭石：火山灰；然后将得到的奇异核桃苗移至大棚内培养，大棚的培养基质为体积比为6：1：1的草炭土：蛭石；当大棚内的温度＜35℃，所述外植体选择顶芽；当大棚内的温度＝35℃，所述外植体选择第一腋芽...

【专利技术属性】
技术研发人员：郁有虎，徐立，
申请(专利权)人：湖北丰年农业开发有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42