一种样品中抗菌药的检测方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种样品中抗菌药的检测方法及应用。所述方法包括将样品和空白对照分别采用酸性水溶液、水、碱性水溶液进行提取，得到待测样品提取液和对照提取液，然后分别检测待测样品提取液和对照提取液的最小抑菌浓度(MIC)，并进行比较，即可得知是否存在抗菌药；所述样品为植物提取物或含有植物提取物的添加剂；所述空白对照是与所述样品具有相同植物提取物的其过饱和溶液。本发明专利技术针对样品与抗菌药在酸、碱水溶液中溶解度的差异，通过测定不同pH值提取液的最小抑菌浓度，并与对照提取液的MIC进行比较，即可判断样品中是否加有抗菌药，该方法操作简单，方便快捷，成本低，可快速对植物提取物类添加剂或保健药物中是否添加抗菌药进行排查。

Detection method and application of antimicrobial agents in samples

The invention discloses a detection method and application of an antibacterial agent in a sample. The method comprises extracting the sample and the blank control with acid water solution, water solution and alkaline water solution respectively, obtaining the sample extraction solution to be tested and the control extraction solution, then detecting the minimum inhibitory concentration (MIC) of the sample extraction solution to be tested and the control extraction solution respectively, and comparing them, so as to know whether there is an antibacterial agent; the sample is a plant extract or contains a plant extract The blank control is a supersaturated solution of the same plant extract as the sample. According to the difference of solubility between the sample and the antibacterial agent in the acid and alkali aqueous solution, by measuring the minimum inhibitory concentration of the extraction solution with different pH values and comparing with the MIC of the control extraction solution, it can be determined whether there is an antibacterial agent in the sample. The method is simple, convenient, quick and low-cost, and can quickly add an antibacterial agent to the plant extract or health care drug Check the drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种样品中抗菌药的检测方法及应用
本专利技术涉及药物检测
，更具体地，涉及一种样品中抗菌药的检测方法。
技术介绍
植物进行光合作用后，细胞分泌芳香分子，并聚集成香囊，散布在花瓣、叶子或树干上，将香囊提炼萃取后，即为“植物精油”，又称植物提取物。植物提取物因为其种类众多、作用广，其应用价值高，在日常生活中应用的较为普遍。美国食品香料与萃取制造者协会(FEMA)认定，天然植物精油为安全无公害物质。植物精油具有促进动物采食、提高生产性能、抗氧化和增强机体免疫等生物功能。例如，Marcincak等发现饲粮中添加止痢草精油42天后肉鸡平均体重比对照组提高了4.1％，在饲粮中添加0.5％的迷迭香或百里香叶子，可提高鸡的重量及增重，改善饲料报酬。Ali等指出在产蛋鸡饲粮中添加0.25％百里香可将种蛋受精力和孵化率提高1.77％、4.96％，研究还发现产蛋期添加植物提取物止痢草、百里香、迭迷香或者姜黄能够提高蛋鸡的生产性能，增加产蛋量、蛋重，提高饲料转化率。因此，目前将植物精油作为饲料添加剂、食品添加剂或者制备成为保健药物较为常见。随着兽用抗菌药使用减量化行动的开展，药物饲料添加剂将在2020年全面退出，市场对饲用抗生素替代品及功能性饲料添加剂产品产生更迫切的需求，无抗的植物精油类添加剂受到重要的关注，但是，目前市面上植物精油类产品鱼龙混杂，一些企业在标榜的无抗植物提取物产品中违规添加抗菌药，给保健品市场、饲料生产厂家与养殖场带来很大风险。为了保障植物提取物类产品的推广使用并符合无抗的安全要求，需要对该类产品进行是否含有抗菌药的检测筛查。针对植物提取物类产品，现有的检测方法适用于准确知道样品中具体含有哪一种抗菌药，这样的检测不仅需要采用专用、昂贵、大型的设备，检测成本较高，耗时较长，无法同时进行多种抗菌药的初级筛查，也很难实现大批量样品的快速简易检测，从而无法快速地判断植物提取物类产品中是否违规添加抗菌药，在实际推广应用中，在进行专业准确检测样品中含有多少量的、哪一种的抗菌药之前，更需要的是简易快速了解样品中是否添加有抗菌药(违规添加有效量)，对于现有技术所开展的样品中具体含有哪一种抗菌药以及抗菌药的含量多少的检测手段，因为检测需求、以及需要专用技术和设备等原因，现有检测方法无法推广实施。因此，针对植物提取物，研究出一种能够简单、快速且能大批量同时筛查判断多种抗菌药的检测方法，具有十分重要实际推广应用意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对目前市场上在含有植物提取物，或其添加剂，或者其他产品中违规人为添加抗菌药物的现象、现有检测技术的不足，提供一种样品中抗菌药的检测方法。本专利技术针对植物提取物与抗菌药在酸、碱水溶液中溶解度的差异和最小抑菌浓度(MIC)的差别，用不同pH值水溶液对样品中抗菌药进行提取，通过比较不同提取液MIC值的差异，判断样品中是否加有抗菌药，该方法操作简单，方便快捷，成本低，不需要采用大型、昂贵的检测设备，可简便地对植物提取物类的微生物发酵饲料、饲用抗生素替代品、功能性饲料添加剂产品及保健品中是否添加抗菌药进行快速判断排查。本专利技术的上述目的是通过以下方案予以实现的：一种样品中抗菌药的检测方法，将样品和空白对照分别采用酸性水溶液、水、碱性水溶液进行提取，得到待测样品提取液和对照提取液，然后分别检测待测样品提取液和对照提取液的MIC值，并进行比较；当待测样品提取液的MIC值明显小于对照提取液的MIC值时，则证明样品中存在抗菌药；若二者的MIC值相当，或待测样品提取液的MIC值明显大于对照提取液的MIC值时，则证明样品中不存在抗菌药；所述样品为植物提取物或者含有植物提取物的添加剂；所述空白对照是与所述样品具有相同植物提取物的其过饱和溶液。本专利技术所述检测方法是通过采用不同pH值的水溶液提取样品中易溶于水的物质，如抗菌药物，而植物提取物大多数为难溶于水的成分，而且其最小抑菌浓度通常在100μg/mL以上，远远大于一般抗菌药的最小抑菌浓度，因此，当植物提取物中人为添加了未经允许添加的抗菌药时，通过不同pH值的酸、碱溶液提取样品中的抗菌药，比较提取液与未添加抗菌药的纯植物提取物的提取液的MIC值，即可判断植物提取物中是否具有抗菌药的存在。当样品中人为添加了有效量的抗菌药，则可通过本专利技术所述方法判断其中违规添加了抗菌药，所述判断过程不仅简单、快速，而且避免了大型设备的使用，检测效率高，而且成本低，为企业在实际生产过程中提供极大的便利。优选地，所述酸性水溶液的pH值为1～4。优选地，所述碱性水溶液的pH值为10～14。优选地，当直接采用水进行提取时，则不需要进行pH调节。优选地，所述样品为植物提取物或者含有植物提取物的添加剂。优选地，植物提取物中抗菌药的检测方法包括如下步骤：S1.取3份待测样品和3份空白对照，分别加入酸性水溶液、水、碱性水溶液进行提取，得到3份待测样品提取液和3份对照提取液；S2.采用相同的方法检测步骤S1制得的3份待测样品提取液和3份对照提取液的MIC值，并进行比较即可。优选地，步骤S1中，待测植物提取物与所述酸性水溶液、水或碱性水溶液的质量体积比为：0.04～0.2g/mL。若酸性水溶液、水或碱性水溶液的添加量太少，则无法充分的提取到抗菌药；若酸性水溶液、水或碱性水溶液的添加量太多，则容易导致提取液中抗菌药的浓度太低，影响检测结果。优选地，步骤S1是将待测样品或者空白对照，分别加入酸性水溶液、水、碱性水溶液，超声后调节各溶液pH值，然后振荡进行提取，离心处理，分别取水相过滤即得。优选地，步骤S1中，所述超声提取的时间为10～30min，温度20～60℃。如植物提取物中存在抗菌药，则超声是为了更充分的提取到抗菌药，但是若温度过高，则容易导致植物提取物中的组分在水溶液中的溶解度增加，则导致提取得到的待检测样品中，除了抗菌药外，植物提取物的含量也较高，最终导致检测结果不准确。优选地，步骤S1中，所述调节各提取液pH值，其中酸性水溶液调节pH值至1～4，碱性水溶液调节pH至10～14，水溶液不需要调节pH值。优选地，步骤S1中，振荡的速度为100～350/min，时间为10～30min；离心的转速为4000～8000rpm，时间为5～10min。优选地，步骤S2中，MIC值的测定采用肉汤稀释法药敏试验进行检测；所述肉汤稀释法药敏试验采用大肠杆菌沙门氏菌或金黄色葡萄球菌等进行检测。本专利技术同时还保护所述方法在判断检测植物提取物类添加剂或保健药物中是否添加抗菌药方面的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术针对植物提取物与抗菌药在酸、碱水溶液中溶解度的差异和最小抑菌浓度(MIC)的差别，用不同pH值溶液提取样品中的抗菌药，通过比较样品不同提取液MIC与空白对照提取液MIC的差异，判断样品中是否加有抗菌药，该方法操作简单，方便快捷，成本低，可较简便的对植物提取物类添加剂或者植物提取物类保健药物中是否添加抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种样品中抗菌药的检测方法，其特征在于，将样品和空白对照分别采用酸性水溶液、水、碱性水溶液进行提取，得到待测样品提取液和对照提取液，然后分别检测待测样品提取液和对照提取液的MIC值，并进行比较；/n当待测样品提取液的MIC值明显小于对照提取液的MIC值时，则证明样品中存在抗菌药；若二者的MIC值相当，或待测样品提取液的MIC值明显大于对照提取液的MIC值时，则证明样品中不存在抗菌药；/n所述样品为植物提取物或者含有植物提取物的添加剂；所述空白对照是与所述样品具有相同植物提取物的其过饱和溶液。/n

【技术特征摘要】
1.一种样品中抗菌药的检测方法，其特征在于，将样品和空白对照分别采用酸性水溶液、水、碱性水溶液进行提取，得到待测样品提取液和对照提取液，然后分别检测待测样品提取液和对照提取液的MIC值，并进行比较；
当待测样品提取液的MIC值明显小于对照提取液的MIC值时，则证明样品中存在抗菌药；若二者的MIC值相当，或待测样品提取液的MIC值明显大于对照提取液的MIC值时，则证明样品中不存在抗菌药；
所述样品为植物提取物或者含有植物提取物的添加剂；所述空白对照是与所述样品具有相同植物提取物的其过饱和溶液。


2.根据权利要求1所述样品中抗菌药的检测方法，其特征在于，所述样品为植物提取物或含有植物提取物的添加剂。


3.根据权利要求1所述样品中抗菌药的检测方法，其特征在于，所述酸性水溶液的pH值为1～4；所述碱性水溶液的pH值为10～14。


4.根据权利要求1至3任一项所述样品中抗菌药的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.取3份待测样品和3份空白对照，分别加入酸性水溶液、水、碱性水溶液进行提取，得到3份待测样品提取液和3份对照提取液；
S2.采用相同的方法检测步骤S1制得的3份待测样品提取液和3份对照提取液的MIC值，并进行比较即可。

【专利技术属性】
技术研发人员：黄显会，许颖，邱阳阳，胡大兴，梁立杰，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44