本发明专利技术是一种希瓦氏菌(Shewanellasp.)GZ‑7，其保藏号为CGMCC NO.17008。属微生物技术领说。本发明专利技术还公开了希瓦氏菌GZ‑7产右旋糖酐酶的方法及右旋糖酐酶产品。本发明专利技术还公开了利用所产右旋糖酐酶水解右旋糖酐的方法。本发明专利技术的有益效果是：本发明专利技术提供了一种新的分离筛选自种植甘蔗土壤中的希瓦氏菌GZ‑7。该菌株具有优良的特性，可以产右旋糖酐酶，有效地拓展了右旋糖酐酶的来源。
Shiwanella gz-7 and its method of producing dextranase
The invention relates to a Shewanella sp. GZ \u2011 7, and its deposit number is CGMCC no.17008. It's a leader in microbial technology. The invention also discloses a method for producing dextranase by shiwanella GZ \u2011 7 and dextranase products. The invention also discloses a method for hydrolyzing dextran by using the dextranase produced. The beneficial effect of the invention is: the invention provides a new isolation and screening of shiwanella GZ \u2011 7 from sugarcane planting soil. The strain has excellent characteristics, can produce dextranase, and effectively expand the source of dextranase.
【技术实现步骤摘要】
希瓦氏菌GZ-7及其产右旋糖酐酶的方法
本专利技术涉及一种微生物，特别是一种分离筛选自种植甘蔗土壤中的希瓦氏菌(Shewanellasp.)GZ-7，CGMCCNO.17008；本专利技术还涉及该菌株产右旋糖酐酶的方法和产品。
技术介绍
右旋糖酐酶(Dextranase,α-D-1,6-Glucan-6-D-Glucanohydrolase,EC3.2.1.11)，是一种专一性水解右旋糖酐内部的α-1,6糖苷键的水解酶。按照右旋糖酐酶对葡聚糖的作用位点不同，可将右旋糖酐酶分为内切型和外切型两种。通过了解一种右旋糖酐酶的水解产物，内切型右旋糖酐酶通常从右旋糖酐内部水解产生寡聚低分子糖或中分子量右旋糖酐，而外切型右旋糖酐酶一般从右旋糖酐分子水解获得单糖。右旋糖酐并不是蔗糖中的天然成分，是甘蔗在收割、运输、贮藏或者是压榨过程中由于环境中各种微生物的污染，最主要是细菌肠膜状串珠菌菌株利用蔗糖大量繁殖，从而将蔗糖糖转化而成一种相对分子质量较高的粘性多糖，这就是制糖工业中称之的“蔗饭”。粘性多糖的产生在甘蔗经冻害而裂开，或者是温度的暂时回升的情况变得尤为严重。此外，经过腐败变质的甘蔗，葡聚糖的含量也会相应的增高。在澳大利亚等国，用右旋糖酐酶来处理已经腐败的甘蔗，已经成为了一种常规的行之有效的方法，并且该方法不含有任何技术问题，而对于蔗糖制造业中的pH值可以用pH计来进行直接的检测，当甘蔗汁的pH低于5时再加入右旋糖酐酶是最经济有效的办法。除此之外，右旋糖酐酶还可以应用于粗糖的制备工艺或者是甜菜糖的生产过程中，日本已经就右旋糖酐酶在制糖工艺的应用这方面已申请了专利。我国在2012年将右旋糖酐酶作为食品添加剂。所以，研究新的可以产右旋糖酐酶的新菌种具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的能产右旋糖酐酶的希瓦氏菌GZ-7。本专利技术所要解决的另一个技术问题是提供上述希瓦氏菌GZ-7菌株产右旋糖酐酶的方法。本专利技术的特征包括希瓦氏菌(Shewanellasp.)GZ-7菌株本身。本专利技术所涉及的菌株GZ-7是在中国广东省种植甘蔗的土壤中分离到的希瓦氏菌(Shewanellasp.)GZ-7。该菌株已于2018年12月19日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏号是CGMCCNO.17008。保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，联系电话：010-64807355。本专利技术还公开了利用菌株GZ-7发酵生产右旋糖酐酶的方法。该方法步骤如下：将希瓦氏菌GZ-7菌株斜面种子接种到LB培养基中，30℃，180r/min，装液量20％，培养18h，得种子液；将种子液以2.5％的接种量接种于产酶培养基中，180r/min，35℃培养48h，10000r/min离心5min，取上清液即为右旋糖酐酶粗酶；所述的产酶培养基为：硫酸钠1％，可溶性淀粉0.5％，右旋糖酐T401％，pH7.5。本专利技术还公开了一种利用上述方法所产右旋糖酐酶水解右旋糖酐的方法，其特点是：将该右旋糖酐酶与右旋糖酐在40℃反应1-5h，使用具有葡萄糖和麦芽低聚糖的样品作为标准，点样后将硅胶板板浸入含有10ml正丁醇，6ml乙醇和4ml水的溶液中，然后在120℃加热，在TLC板上观察水解产物；水解产物为葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一种新的分离筛选自种植甘蔗土壤中的希瓦氏菌(Shewanellasp.)GZ-7。该菌株具有优良的特性，可以产右旋糖酐酶，有效地拓展了右旋糖酐酶的来源。附图说明图1为菌株GZ-7的电镜照片形态(15000×)图；图2为菌株GZ-7在初筛平板上形成的透明圈图；图3为菌株GZ-7系统进化树；图4为温度对菌株GZ-7生长的影响图；图5为pH对菌株GZ-7生长的影响图；图6为接种量对菌株GZ-7生长的影响图；图7为转速对菌株GZ-7生长的影响图；图8为装液量对菌株GZ-7生长的影响图；图9为碳源对菌株GZ-7产酶的影响图；图10为氮源对菌株GZ-7产酶的影响图；图11为温度对菌株GZ-7产酶的影响图；图12为pH对菌株GZ-7产酶的影响图；图13为时间对菌株GZ-7产酶的影响图；图14为装液量对菌株GZ-7产酶的影响图；图15为菌株GZ-7右旋糖酐酶的最适作用温度图；图16为菌株GZ-7右旋糖酐酶的最适作用pH图；图17为菌株GZ-7右旋糖酐酶的热稳定性图；图18为菌株GZ-7右旋糖酐酶的pH稳定性图；图19为菌株GZ-7右旋糖酐酶水解右旋糖酐图。具体实施方式以下进一步描述本专利技术的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本专利技术，而不构成对其权利的限制。实施例1，一种分离筛选自种植甘蔗土壤中的希瓦氏菌(Shewanellasp.)GZ-7，CGMCCNO.17008。该菌株具有以下特征：菌株GZ-7为革兰氏阴性杆菌、无荚膜。菌株VP实验为阴性、不能发酵葡萄糖，能利用果糖、蔗糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖，不能利用乳糖、纤维二糖。不能反硝化不产生赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶，有运动能力，不产生硫化氢，不产生吲哚。菌株GZ-7生长温度范围为20-40℃，最适生长温度为30℃；生长pH范围为5-9，最适生长pH为7.5。一、菌株的筛选方法1.1中涉及的培养基：LB培养基：胰蛋白胨1％，酵母粉0.5％，NaCl1％pH7.5筛选培养基：胰蛋白胨1％，酵母粉0.5％，蓝色葡聚糖20000.2％，右旋糖酐T201％，琼脂2％，蒸馏水配制，pH7.5。种子培养基：胰蛋白胨1％，酵母粉0.5％，NaCl1％pH7.5产酶培养基：胰蛋白胨1％，酵母粉0.5％，右旋糖酐T401％，蒸馏水配制，pH7.5。1.2菌株的筛选方法：取种植甘蔗土壤1g放入50mlLB培养基中，30℃、180r/min培养12h。选取合适的培养液的稀释液涂布至筛选培养基，30℃培养3-4d，菌落长出后观察菌落周围是否出现透明圈。挑取有透明圈的单菌落菌株接入产酶培养基，30℃、180r/min培养2d，10000r/min离心15min取上清液测定酶活力大小。选出透明圈较大和酶活力较高的菌株。二、菌株GZ-7的形态特征与生理生化特征。2.1形态特征：菌株GZ-7为革兰氏阴性杆菌，0.3-0.5μm×1.5-2μm(见图1)，菌株GZ-7无芽孢，能运动，在固体培养基中培养48h后，菌落呈灰白色、湿润、边缘光滑、中间突起、易挑取，在筛选平板上能形成透明圈(见图2)。2.2生理生化特征:菌株GZ-7的生理生化反应结果见表1，菌株VP实验为阴性、不能发酵葡萄糖，能利用果糖、蔗糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖，不能利用本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种希瓦氏菌(Shewanellasp.)GZ-7，其特征在于：其保藏号为CGMCC NO.17008。/n
【技术特征摘要】
20190809 CN 20191073574401.一种希瓦氏菌(Shewanellasp.)GZ-7，其特征在于：其保藏号为CGMCCNO.17008。
2.权利要求1所述的希瓦氏菌(Shewanellasp.)GZ-7产右旋糖酐酶的方法，其特征在于：其步骤如下：将希瓦氏菌GZ-7菌株斜面种子接种到LB培养基中，30℃，180r/min，装液量20％，培养18h，得种子液；将种子液以2.5％的接种量接种于产酶培养基中，180r/min，35℃培养48h，10000r/min离心5min，取上清液即为右旋糖酐酶粗酶；所述的产酶培养基为：...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕明生，刘鑫，王淑军，肖亚中，房耀维，焦豫良，杨杰，王震，
申请(专利权)人：江苏海洋大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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