从猪小肠提取肝素钠的方法技术

本发明专利技术涉及肝素钠生产技术领域，提供了一种从猪小肠提取肝素钠的方法。本发明专利技术主要步骤为前处理、肠衣泡把、酶解、吸附、洗涤、洗脱、沉淀和干燥。本发明专利技术将肠衣与肠粘膜联合制取肝素钠，提高了猪小肠的利用率，增加了猪小肠的附加值，生产一亿国际单位肝素钠粗品只需1400根左右猪小肠，产品纯度高，肝素钠的效价＞110U/mg。同时，剩余的肠皮也能得到有效利用。

Method of extracting heparin sodium from pig small intestine

The invention relates to the technical field of heparin sodium production, and provides a method for extracting heparin sodium from pig small intestine. The main steps of the invention are pretreatment, casing handle, enzymolysis, adsorption, washing, elution, precipitation and drying. In the invention, heparin sodium is prepared by combining the casing with the intestinal mucosa, which improves the utilization rate of the pig small intestine and increases the added value of the pig small intestine. Only about 1400 pig small intestines are needed to produce a 100 million international unit of heparin sodium crude product, which has high purity and the potency of heparin sodium is more than 110u / mg. At the same time, the remaining intestinal skin can also be used effectively.

【技术实现步骤摘要】
从猪小肠提取肝素钠的方法
本专利技术涉及肝素钠生产
，特别涉及一种从猪小肠提取肝素钠的方法。
技术介绍
肝素钠又称肝素，是一种含有硫酸基的酸性粘多糖类天然抗凝血物质。肝素钠为白色或类白色粉末，无臭无味，有引湿性，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、二氧六环等有机溶剂。肝素钠广泛存在于哺乳动物肝、肺、肠黏膜中，多与蛋白质结合成复合体存在。酶解蛋白可分离肝素钠，肝素钠是含硫酸、氨基、醛糖酸的粘多糖。在pH8-9时，带负电荷，可与阴离子交换剂进行离子交换，进行粗分离，多糖液在高浓度乙醇中沉淀进行精纯。肝素钠是血液化学成分测定中最好的抗凝剂。肝素钠是一种含硫酸基团的黏多糖，分子量为1.5万，其抗凝机制是与抗凝酶Ⅱ一起，在低浓度能抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之间的作用，并能加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成；还有抑制凝血酶的自我催化及抑制因子X的作用。传统的肝素钠的酶解生产方法往往以猪小肠的肠粘膜为原料提取，肠衣往往弃做它用，存在的缺陷是：猪小肠无法有效利用，生产周期长，能耗大，收率低，生产一亿国际单位肝素钠粗品需2800-3000根猪小肠的粘膜，产品纯度低，肝素钠的效价至多为80U/mg，并产生大量的肠渣和废水，污染环境。CN1308088A的专利技术公开了一种利用生物发酵工艺生产肝素钠的方法。该方法采用2709蛋白酶作为催化剂，D204强碱性阴离子交换树脂作为离子交换树脂，并采用150-180目多层布筛进行过滤。该方法存在如下缺陷：产品收率、纯度也较低，并产生大量的肠渣和废水，污染环境；猪小肠取肠粘膜后剩余的肠衣、肠皮无法有效利用来获取肝素钠，猪小肠的利用效率低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种从猪小肠提取肝素钠的方法，能对猪小肠进行综合利用，提高了猪小肠的利用率，生产周期短，产品收率、纯度较高，减少了肠渣和废水的排放，利于环保。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种从猪小肠提取肝素钠的方法，所述的工艺步骤如下：(1)前处理：将猪小肠放入刮肠机中，获得猪小肠粘膜浆液待用，剩余肠衣、肠皮，肠皮单独用于提取肝素钠。肠皮提取肝素钠的工艺采用专利技术人在先申请的公告号CN101891842A专利技术专利公开的方法进行。(2)肠衣泡把：将肠衣绕把形成肠衣把，接着将肠衣把放入浸泡液中第一次浸泡4-5小时，取出沥干，使用肠衣专用盐对肠衣把腌制处理，之后，将肠衣把放入浸泡液中二次浸泡6-8小时，第一次浸泡的浸泡液为饱和氯化钠溶液，二次浸泡的浸泡液为盐度15°-18°的氯化钠溶液；第一次浸泡及二次浸泡时，每1000L浸泡液均浸泡160±5把肠衣把，收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作为下一次提取时肠衣把第一次浸泡的浸泡液。第一次浸泡的浸泡液与二次浸泡的浸泡液的体积相同。猪小肠经过刮肠机处理后，得到的肠衣上仍会残留小部分肠粘膜(无法提取肝素钠造成浪费)，且肠衣中也含有部分肝素钠，以往直接将肠衣经过简单腌制后就当制作香肠的原料使用，这样往往造成肠衣无法有效利用，降低了猪小肠获得肝素钠的收率。本专利技术通过第一次浸泡，可将大部分在肠衣中存在的肝素钠提取出(包括肠粘膜中的)，第一次浸泡的浸出液用于下一步酶解时调节猪小肠粘膜浆液盐度的原料，无需外加氯化钠溶液，节约氯化钠溶液的用量，第一次浸泡的浸出液中也含有部分肝素钠，能与酶解获得的肝素钠汇合，无需各自提纯操作。这样节省步骤，第一次浸泡的浸出液若有多余可暂时储存用于下次提取。第一次浸泡后对肠衣把腌制处理，这样加工后肠衣可以满足做香肠的需求。再对肠衣进行二次浸泡，能把肠衣中残存的肝素钠溶出，增加肝素钠的收率。腌制处理后的肠衣把含有大量的盐分，因此只需控制二次浸泡的浸泡液为盐度15°-18°，加入腌制处理后的肠衣把浸泡，二次浸泡的浸泡液即可达到饱和盐水的程度，这样盐能多次利用，节约了盐的用量。二次浸泡后的浸出液(即含有小部分肝素钠的饱和盐水)作为下一次提取时肠衣把第一次浸泡的浸泡液，通过这样操作，二次浸泡的原料即浸泡液还能再次利用，无需新配饱和氯化钠溶液作为第一次浸泡的浸泡液，大大节约了盐的用量。二次浸泡后剩余的肠衣可以作为加工香肠的原料出售。(3)酶解：将猪小肠粘膜浆液加入酶解罐，猪小肠粘膜浆液为猪小肠粘膜：水＝1:2.5-4的重量比的混合物，向酶解罐中加入步骤(2)收集的第一次浸泡的浸出液调节酶解罐中料液的盐度至5±0.5°，控制料液的pH在8.5±0.5；接着按每1000L料液加1.2±0.4kg的酶量向酶解罐内加入2709碱性蛋白酶，控制料液温度在53±3℃，盐度4.2±0.2°，pH7.0±0.5保持3±0.5小时；最后升温至85-88℃，保持20-25min得酶解液，过滤去残渣。本步骤最后酶解液过滤去残渣时，往往采用布袋过滤去残渣，这样效率往往较低，专利技术人通过实践探索，专利技术了采用振动筛过滤去残渣的方式，大大提高了过滤速度，提高了生产效率，是代替布袋过滤的好方法。(4)吸附：将酶解液输入吸附罐，降温至57±3℃，加水调节盐度至3.0±0.5°，控制pH7.0-7.5，按每1000L酶解液加3-8kg的树脂量，向吸附罐内加入罗门哈斯FPA98CL型树脂，搅拌吸附6-8小时后，收集树脂。(5)洗涤：将收集的树脂用水洗涤至pH为中性，再将树脂放入盐度4±1°、温度55-60℃的氯化钠溶液，搅拌至少1小时进行洗涤，其中，树脂：氯化钠溶液＝1:1.3-1.7(w/v)。控制氯化钠溶液温度在55-60℃，便于将树脂表面油脂类的附着物清洗干净，便于洗脱。(6)洗脱：将步骤(5)洗涤后的树脂倒入洗脱罐中进行两次洗脱，其中，第一次洗脱为：将树脂加入到盐度为21±1°、温度55-60℃的氯化钠溶液中搅拌至少3小时，树脂：氯化钠溶液＝1:1-1.4(w/v)；第二次洗脱为：将第一次洗脱后的树脂加入到盐度为21±1°、温度55-60℃的氯化钠溶液中搅拌至少3小时，树脂：氯化钠溶液＝1:0.8-1.2(w/v)；合并两次收集的洗脱液。控制两次洗脱洗脱时的氯化钠溶液温度在55-60℃，便于将油脂状的肝素钠从树脂上洗脱下来，增加得率。(7)沉淀：将步骤(6)收集到的洗脱液倒入沉淀罐中，搅拌条件下向沉淀罐中加入酒精度85±5°的酒精，酒精用量以实测沉淀罐中混合液的酒精度到45°-60°为准，静置沉淀15小时以上，收集沉淀物。(8)干燥：步骤(7)得到的沉淀物加入酒精度85°以上的酒精进行脱水1-3小时，滤干后做烘干处理即得肝素钠产品。本专利技术中的w/v为质量体积比具体为：kg:L。本专利技术将肠衣与肠粘膜联合制取肝素钠，提高了猪小肠的利用率，增加了猪小肠的附加值，生产一亿国际单位肝素钠粗品只需1400根左右猪小肠，产品纯度高，肝素钠的效价＞110U/mg。同时，剩余的肠皮也能得到有效利用。作为优选，步骤(2)中肠衣绕把具体为：将肠衣按1±0.2米的长度来回折叠，叠完后在中间捆扎形成肠衣把，每100±1米肠衣合成一把肠衣把；肠衣把两次浸泡过程中，均用气泵向浸泡液中充空气使浸泡液上下翻滚流动。将肠衣绕把，方便对肠衣的处理，形成的肠衣把采用吊挂的方式在浸泡池中浸泡。两次浸泡过程中，均用气泵向浸泡液中充空气使浸泡液上下翻滚流动，使得在肠衣中残留的肝素钠充分洗出，增加了本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从猪小肠提取肝素钠的方法，其特征在于：所述的工艺步骤如下：(1)前处理：将猪小肠放入刮肠机中，获得猪小肠粘膜浆液待用，剩余肠衣、肠皮，肠皮单独用于提取肝素钠；(2)肠衣泡把：将肠衣绕把形成肠衣把，接着将肠衣把放入浸泡液中第一次浸泡4‑5小时，取出沥干，使用肠衣专用盐对肠衣把腌制处理，之后，将肠衣把放入浸泡液中二次浸泡6‑8小时，第一次浸泡的浸泡液为饱和氯化钠溶液，二次浸泡的浸泡液为盐度15°‑18°的氯化钠溶液；第一次浸泡及二次浸泡时，每1000L浸泡液均浸泡160±5把肠衣把，收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作为下一次提取时肠衣把第一次浸泡的浸泡液；(3)酶解：将猪小肠粘膜浆液加入酶解罐，猪小肠粘膜浆液为猪小肠粘膜：水＝1:2.5‑4的重量比的混合物，向酶解罐中加入步骤(2)收集的第一次浸泡的浸出液调节酶解罐中料液的盐度至5±0.5°，控制料液的pH在8.5±0.5；接着按每1000L料液加1.2±0.4kg的酶量向酶解罐内加入2709碱性蛋白酶，控制料液温度在53±3℃，盐度4.2±0.2°，pH7.0±0.5保持3±0.5小时；最后升温至85‑88℃，保持20‑25min得酶解液，过滤去残渣；(4)吸附：将酶解液输入吸附罐，降温至57±3℃，加水调节盐度至3.0±0.5°，控制pH7.0‑7.5，按每1000L酶解液加3‑8kg的树脂量，向吸附罐内加入罗门哈斯FPA98CL型树脂，搅拌吸附6‑8小时后，收集树脂；(5)洗涤：将收集的树脂用水洗涤至pH为中性，再将树脂放入盐度4±1°、温度55‑60℃的氯化钠溶液，搅拌至少1小时进行洗涤，其中，树脂：氯化钠溶液＝1kg:1.3‑1.7L；(6)洗脱：将步骤(5)洗涤后的树脂倒入洗脱罐中进行两次洗脱，其中，第一次洗脱为：将树脂加入到盐度为21±1°、温度55‑60℃的氯化钠溶液中搅拌至少3小时，树脂：氯化钠溶液＝1kg:1‑1.4L；第二次洗脱为：将第一次洗脱后的树脂加入到盐度为21±1°、温度55‑60℃的氯化钠溶液中搅拌至少3小时，树脂：氯化钠溶液＝1kg:0.8‑1.2L；合并两次收集的洗脱液；(7)沉淀：将步骤(6)收集到的洗脱液倒入沉淀罐中，搅拌条件下向沉淀罐中加入酒精度85±5°的酒精，酒精用量以实测沉淀罐中混合液的酒精度到45°‑60°为准，静置沉淀15小时以上，收集沉淀物；(8)干燥：步骤(7)得到的沉淀物加入酒精度85°以上的酒精进行脱水1‑3小时，滤干后做烘干处理即得肝素钠产品；步骤(2)中肠衣绕把具体为：将肠衣按1±0.2米的长度来回折叠，叠完后在中间捆扎形成肠衣把，每100±1米肠衣合成一把肠衣把；肠衣把两次浸泡过程中，均用气泵向浸泡液中充空气使浸泡液上下翻滚流动；步骤(2)中腌制处理具体为：第一步抹盐：将肠衣专用盐均匀涂抹在肠衣表面，肠衣专用盐的用量为每1把肠衣把用盐1‑1.2kg；第一步抹盐完成后腌制48小时以上，接着进行第二步复盐：将肠衣专用盐再次均匀涂抹在肠衣表面，肠衣专用盐的用量为每1把肠衣把用盐0.5‑0.6kg；第二步复盐完成后腌制12‑14小时；将步骤(4)收集树脂后剩余的料液重新输送至吸附罐，控制温度在57±3℃，pH7.0‑7.5，按每1000L料液加2‑3kg的树脂量向吸附罐内加入罗门哈斯FPA98CL型树脂再次吸附6‑8小时后，收集树脂，然后与步骤(4)收集的树脂合并后，进入下一步的洗涤步骤；步骤(7)收集沉淀物后剩余的上清液输入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入饱和氯化钠溶液搅拌均匀，并调节pH为9‑10，上清液与饱和氯化钠溶液的体积比为1：0.5‑0.7，静置沉淀8‑12小时后，收集沉淀，然后与步骤(7)得到的沉淀物合并后进入下一步的干燥步骤；收集步骤(3)酶解液过滤获得的残渣，向酶解罐中加入盐度5±0.5°的氯化钠溶液，然后将残渣重新加入酶解罐中，残渣与盐度5±0.5°的氯化钠溶液的重量比为1:5‑6，控制料液的pH在8.5±0.5，接着按每1000L料液加1.0‑1.2kg的酶量向酶解罐内加入2709碱性蛋白酶，控制料液温度在55±1℃，保温6‑7小时；最后升温至88‑90℃，保持20‑25min，再静置20‑30min后得酶解液，酶解液在6000‑8000转/分的转速下，离心处理20‑40min后，进入下一步的吸附。...

【技术特征摘要】
1.一种从猪小肠提取肝素钠的方法，其特征在于：所述的工艺步骤如下：(1)前处理：将猪小肠放入刮肠机中，获得猪小肠粘膜浆液待用，剩余肠衣、肠皮，肠皮单独用于提取肝素钠；(2)肠衣泡把：将肠衣绕把形成肠衣把，接着将肠衣把放入浸泡液中第一次浸泡4-5小时，取出沥干，使用肠衣专用盐对肠衣把腌制处理，之后，将肠衣把放入浸泡液中二次浸泡6-8小时，第一次浸泡的浸泡液为饱和氯化钠溶液，二次浸泡的浸泡液为盐度15°-18°的氯化钠溶液；第一次浸泡及二次浸泡时，每1000L浸泡液均浸泡160±5把肠衣把，收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作为下一次提取时肠衣把第一次浸泡的浸泡液；(3)酶解：将猪小肠粘膜浆液加入酶解罐，猪小肠粘膜浆液为猪小肠粘膜：水＝1:2.5-4的重量比的混合物，向酶解罐中加入步骤(2)收集的第一次浸泡的浸出液调节酶解罐中料液的盐度至5±0.5°，控制料液的pH在8.5±0.5；接着按每1000L料液加1.2±0.4kg的酶量向酶解罐内加入2709碱性蛋白酶，控制料液温度在53±3℃，盐度4.2±0.2°，pH7.0±0.5保持3±0.5小时；最后升温至85-88℃，保持20-25min得酶解液，过滤去残渣；(4)吸附：将酶解液输入吸附罐，降温至57±3℃，加水调节盐度至3.0±0.5°，控制pH7.0-7.5，按每1000L酶解液加3-8kg的树脂量，向吸附罐内加入罗门哈斯FPA98CL型树脂，搅拌吸附6-8小时后，收集树脂；(5)洗涤：将收集的树脂用水洗涤至pH为中性，再将树脂放入盐度4±1°、温度55-60℃的氯化钠溶液，搅拌至少1小时进行洗涤，其中，树脂：氯化钠溶液＝1kg:1.3-1.7L；(6)洗脱：将步骤(5)洗涤后的树脂倒入洗脱罐中进行两次洗脱，其中，第一次洗脱为：将树脂加入到盐度为21±1°、温度55-60℃的氯化钠溶液中搅拌至少3小时，树脂：氯化钠溶液＝1kg:1-1.4L；第二次洗脱为：将第一次洗脱后的树脂加入到盐度为21±1°、温度55-60℃的氯化钠溶液中搅拌至少3小时，树脂：氯化钠溶液＝1kg:0.8-1.2L；合并两次收集的洗脱液；(7)沉淀：将步骤(6)收集到的洗脱液倒入沉淀罐中，搅拌条件下向沉淀罐中加入酒精度85±5°的酒精，酒精用量以实测沉淀罐中混合液的酒精度到45°-60°为准，静置沉淀15小时以上，收集沉淀物；(8)干燥：步骤(7)得到的沉淀物加入酒精度85°以上的酒精进行脱水1-3小时，滤干后做烘干处理即得肝素钠产品；步骤(2)中肠衣绕把具体为：将肠衣按1±0.2米的长度来回折叠，叠完后在中间捆扎形成肠衣把，每100±1米肠衣合成一把肠衣把；肠衣把两次浸泡过程中，均用气泵向浸泡液中充空气使浸泡液...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲁保存，
申请(专利权)人：山阳县恒瑞肉制品有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61