新化合物、包含该新化合物的用于荧光衍生化的试剂、以及使用该新化合物对氨基酸的光学异构体进行光学拆分的方法和经荧光衍生化的氨基酸技术

本发明专利技术的目的是开发在手性氨基酸的分析中不发生消光的光学拆分试剂。通过提供不发生消光的光学拆分用的新化合物来解决课题。本发明专利技术涉及新化合物、包含该新化合物的光学拆分用试剂、包含使该新化合物反应的工序的进行光学拆分的方法、以及使该新化合物与氨基酸反应而获得的光学异构体。

New compounds, reagents for fluorescence derivatization containing the new compounds, methods for optical resolution of optical isomers of amino acids using the new compounds and amino acids derivatized by fluorescence

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新化合物、包含该新化合物的用于荧光衍生化的试剂、以及使用该新化合物对氨基酸的光学异构体进行光学拆分的方法和经荧光衍生化的氨基酸
本专利技术涉及新化合物、包含该新化合物的用于荧光衍生化的试剂、和将使该新化合物与氨基酸反应而获得的荧光衍生化氨基酸进行光学拆分的方法、和使该新化合物与氨基酸反应而获得的氨基酸的荧光衍生物。
技术介绍
以往，认为在高等动物的生物体中存在的氨基酸仅为L-氨基酸。然而，近年来，根据分析技术的发展，明确了在高等动物、特别是包含人的哺乳类的生物体内也存在D-氨基酸，具有记忆、学习、激素产生、分泌等生理功能。此外，在各种组织、生物体试样中存在的D-氨基酸之中的若干显示随着身体的状态例如肾衰竭等疾病而变动，期待作为健康、疾病标志物的利用(专利文献1)。从阐明生物体内的氨基酸的生理作用的观点考虑，进行了利用高效液相色谱(HPLC)法，进行了将氨基酸(例如，参照非专利文献1-3)、D-氨基酸和L-氨基酸精密地分离并定量的分析手法(例如，参照非专利文献4)的开发研究。此外，开发了通过作为以往的HPLC标签化用的试剂的4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并二唑(NBD-F)而实现荧光衍生化，组合2维手性HPLC，从而对构成蛋白质的全部氨基酸进行选择性分析的方法(非专利文献5)。进一步，也开发了可以更高灵敏度且简便地将氨基酸的光学异构体混合物进行光学拆分的光学拆分用的试剂(专利文献2)。现有技术文献专利文献专利文献1：国际公开第2013/140785号公报专利文献2：日本特开2015-48332号公报非专利文献非专利文献1：K.Shimboetal.,Anal.Chem.，2009，81，5172-5179非专利文献2：K.Shimboetal.,RapidCommun.MassSpectrom.，2009，23，1483-1492非专利文献3：S.A.Cohenetal.,Anal.Biochem.，1993，211,279-287非专利文献4：R.J.Reischletal.,J.Chromatogra.A.，2012,1269，262-269非专利文献5：T.Kimura,etal.,ScientificReports,(2016),6,26137
技术实现思路
专利技术所要解决的课题在使用了作为以往的HPLC标签化用的试剂的4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并二唑(NBD-F)的D-氨基酸的分析技术中，发现在色氨酸与NBD-F试剂反应而产生的NBD-色氨酸中，发生消光，检测灵敏度变低这样的课题。一般的氨基酸分析系统的测定范围为3～4数量级，但NBD-色氨酸由于消光而测定值不落入该范围，与有40种以上的其它手性氨基酸的同时分析变得困难，因此有时不能适用于将代谢物进行全面分析的代谢组学的手法。用于解决课题的方法针对上述课题，对在将氨基酸进行衍生化时，不发生消光的化合物进行了探索，结果发现在通过以下式所示的化合物将色氨酸衍生化的情况下，所得的色氨酸衍生物不发生消光，并且能够通过手性柱色谱将色氨酸衍生物的D-氨基酸与L-氨基酸分离，从而完成了本专利技术。因此本专利技术涉及以下：[1]以下式所示的化合物、或其盐。[2]一种用于荧光衍生化的试剂，其包含以下式所示的化合物、或其盐。[3]一种对试样中的含有氨基的化合物进行分析的分析方法，其包含下述工序：使包含该含有氨基的化合物的试样与以下式所示的化合物反应的工序；将反应的产物导入到色谱的工序。[4]根据项目3所述的方法，上述分析方法为将光学异构体进行光学拆分的方法，色谱为手性色谱。[5]根据项目3或4所述的方法，上述含有氨基的化合物为氨基酸。[6]一种氨基酸的荧光衍生物的制造方法，其包含使氨基酸与以下式所示的化合物反应的步骤。[7]以下式所示的化合物。[式中，R为氨基酸的侧链]专利技术的效果根据本专利技术，能够抑制由消光引起的检测灵敏度的降低，能够提供光学拆分所使用的用于荧光衍生化的化合物。附图说明图1涉及将含有构成蛋白质的氨基酸的试样通过NBD-F进行荧光衍生化，供于HPLC分析而获得的色谱图。图2表示将含有D-丙氨酸和L-丙氨酸、和D-色氨酸和L-色氨酸的试样通过NBD-F(A)或NBD-COOSu(B)和(C)进行衍生化，供于手性HPLC分析而获得的色谱图。(A)和(B)中，通过荧光分析测定手性HPLC的分离物，另一方面，(C)中通过质谱分析测定手性HPLC的分离物。具体实施方式(新化合物)本专利技术者们新制造出下述式所示的化合物(2,5-二氧代吡咯烷-1-基2-[N-(4-硝基苯并[c][1,2,5]二唑-7-基)-N-甲基氨基]乙酸酯(NBD-COOSu))。因此，本专利技术的一方案涉及以下式所示的化合物或其盐。作为盐，可以举出与任意的酸形成的盐。可举出例如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐和高氯酸盐等无机酸盐、或乙酸盐、草酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐或丙二酸盐等有机酸盐。(新化合物的合成)该化合物可以通过任意的方法制造，例如可以基于下述方案1和方案2制造。方案1方案2(用于荧光衍生化的试剂及其反应)本专利技术的化合物基于硝基苯并二唑(NBD)而发出荧光，并且基于琥珀酰亚胺基的反应性而与具有氨基的化合物反应而生成荧光衍生物。只要是具有氨基的化合物，就可以与任意的化合物反应，可举出例如氨基酸。具体而言，例如基于下述方案，生成氨基酸的荧光衍生物。因此，本专利技术的其它方案中，涉及包含2,5-二氧代吡咯烷-1-基2-[N-(4-硝基苯并[c][1,2,5]二唑-7-基)-N-甲基氨基]乙酸酯(NBD-COOSu)的用于荧光衍生化的试剂。如后所述，将经荧光衍生化试剂进行了荧光衍生化的氨基酸导入到手性柱色谱，从而可以将D-氨基酸与L-氨基酸分离，因此本专利技术的荧光衍生化试剂也可以称为光学拆分用试剂。方案3(式中，R表示氨基酸的任意的侧链)在进一步的其它方案中，本专利技术也涉及制造氨基酸的荧光衍生物的方法，其包含使本专利技术的化合物与氨基酸反应的步骤。此外也涉及通过该制造方法制造的氨基酸的荧光衍生物，即具有以下式的氨基酸荧光衍生物。(式中，R表示任意的氨基酸的侧链)在本专利技术中，R表示任意的氨基酸的侧链，可以为构成蛋白质的氨基酸的侧链。进一步从进行光学拆分的观点考虑，优选为构成蛋白质的氨基酸之中除甘氨酸侧链(-H)以外的任意的侧链。代表性地有丙氨酸侧链(-CH3)或下述色氨酸侧链。这些氨基酸荧光衍生物在能够发出由NBD部分引起的荧光、并且不发生可能由一部分氨基酸侧链的结构而产生的荧光消光方面具有特征。此外，这些氨基酸荧光衍生物保持原来的氨基酸所具有的手性。因此，通过将氨基酸荧光衍生物导入到手性柱色谱，从而能够基于原来的氨基酸的手性进行D-氨基酸与L-氨基酸的分离方面也成为特征。在使用作为现有技术的NBD-F进行了衍生化的情况下，色氨酸衍生物发生了消光(图1和图2A)。因此，不发生消光的色氨酸衍生物在D-氨基酸的全面分析上特别有用。在本专利技术的实施例中，明确了在上述氨基酸衍生物之中的色氨酸衍生物中，不发生消光(图2B)。这里，消光的含义虽然不受理论限定，但是是指由化合物中的与具有荧光性的结构相邻的结构引起的荧光消失。通过对使本专利技术的化合物与具有光学异构体的化合物例如氨基酸(D-氨基酸+本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.以下式所示的化合物、或其盐，

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.03.03 JP 2017-0411281.以下式所示的化合物、或其盐，2.一种用于荧光衍生化的试剂，其包含以下式所示的化合物、或其盐，3.一种对试样中的含有氨基的化合物进行分析的分析方法，其包含下述工序：使包含含有氨基的化合物的试样与以下式所示的化合物反...

【专利技术属性】
技术研发人员：浜濑健司，秋田健行，三田真史，
申请(专利权)人：株式会社资生堂，
类型：发明
国别省市：日本,JP