【技术实现步骤摘要】
一种从毛蚶中提取两种金属硫蛋白的方法
本专利技术涉及生物技术和蛋白质工程领域，尤其是涉及一种从毛蚶中提取两种金属硫蛋白的方法。
技术介绍
金属硫蛋白(metallothionein，MT)是一类低分子量、高巯基含量、能结合金属离子具有独特性能的一类金属结合蛋白质，作为一类高度可诱导性的内源性蛋白，广泛存在于从细菌到哺乳动物的多种生物体内。MT的生物学功能主要与细胞核组织的应激反应有关，MT的生物学功能主要与细胞核组织的应激反应有关，表现为体内必需金属元素(Cu，Zn，Co，Ni等)的储运、代谢和精细调节以及非必需金属元素(Cd，Hg，Ag，Pb等)的解毒，清除自由基、抗辐射和紫外线照射，防止细胞癌变等；另外，由于MT广泛存在动物、植物、微生物中，且与重金属结合的性质，不仅可以用于监测海洋环境重金属污染状况，也可作为衡量环境重金属污染状况的一个生物指标，除此之外还可用于重金属的回收和清除环境中的重金属污染等方面。MT也将有望通过基因工程技术来治理重金属污染，如通过植物自身MT的表达或外源基因导入来实现植土壤的重金属污染，另一方面通过水生生物富集作用减少水体中的重金属...
【技术保护点】
1.一种从毛蚶中提取两种金属硫蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)诱导将毛蚶在海水中暂养后暴露于氯化锌海水中进行诱导；(2)粗提将诱导后的毛蚶解剖、匀浆，得匀浆组织，在匀浆组织中加入Tris‑HCl缓冲液及促蛋白溶解剂，得提取液；将提取液进行超声提取，超声提取期间通入氮气进行微气泡曝气，提取后离心取上清液，上清液经水浴加热后快速冷却，加入乙醇沉淀后，将沉淀物收集加入Tris‑HCl缓冲液中重新溶解，离心分离取上清液，经冷冻干燥，得粗提物；(3)凝胶过滤柱层析初步纯化取上述粗提物溶于Tris‑HCl缓冲液中，基于全自动蛋白纯化仪，选用Enrich SEC70分子筛预装...
【技术特征摘要】
1.一种从毛蚶中提取两种金属硫蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)诱导将毛蚶在海水中暂养后暴露于氯化锌海水中进行诱导；(2)粗提将诱导后的毛蚶解剖、匀浆，得匀浆组织，在匀浆组织中加入Tris-HCl缓冲液及促蛋白溶解剂，得提取液；将提取液进行超声提取，超声提取期间通入氮气进行微气泡曝气，提取后离心取上清液，上清液经水浴加热后快速冷却，加入乙醇沉淀后，将沉淀物收集加入Tris-HCl缓冲液中重新溶解，离心分离取上清液，经冷冻干燥，得粗提物；(3)凝胶过滤柱层析初步纯化取上述粗提物溶于Tris-HCl缓冲液中，基于全自动蛋白纯化仪，选用EnrichSEC70分子筛预装柱进行凝胶过滤柱层析，等度洗脱，洗脱液用全自动收集器收集，根据色谱图收集主要组分，真空冷冻干燥后收集该组分，将其命名为MTs；(4)DEAE阴离子交换层析分离毛蚶MT-II、毛蚶MT-I基于全自动蛋白纯化仪，选用弱阴离子交换剂进行柱层析，梯度洗脱，洗脱液用全自动收集器收集，根据色谱图中的保留时间收集两种主要组分，真空冷冻干燥后将两组分分别命名为毛蚶MT-I、毛蚶MT-II，真空冷冻干燥后低温冻存；(5)脱盐选用SephadexG-25凝胶介质对毛蚶MT-I和毛蚶MT-II分别进行脱盐，自动部分收集器设置，根据色谱图收集主要组分，最后将收集的样品冷冻干燥后低温冻存。2.根据权利要求1所述的一种从毛蚶中提取两种金属硫蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中，海水条件为盐度24±1，pH8.0±0.2，水温23±1℃，暂养2d，期间不投喂饵料，每天更换氯化锌海水，诱导7天。3.根据权利要求2所述的一种从毛蚶中提取两种金属硫蛋白的方法，其特征在于，所述氯化锌海水中氯化锌的浓度为50～55μmol/L。4.根据权利要求1所述的一种从毛蚶中提取两种金属硫蛋白的方法，其特征在于，步骤(2)中，在0～4℃条件下对毛蚶进行解剖、匀浆。5.根据权利要求1或4所述的一种从毛蚶中提取两种金属硫蛋白的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述Tris-HCl缓冲液浓度为0.15～0.2mol/L，pH为8.15～8.45，所述促蛋白溶解剂为氯化钠...
【专利技术属性】
技术研发人员：张小军，李梦龙，梅光明，孟春英，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院，浙江省海洋水产研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11
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