一种从口虾蛄中提取高纯度金属硫蛋白的方法技术

本发明专利技术涉及金属硫蛋白提取技术领域，为解决有金属硫蛋白提取工艺存在的提取对象要求苛刻、提取周期长、成本高、纯度低的问题，提供了一种从口虾蛄中提取高纯度金属硫蛋白的方法，包括以下步骤：(1)将口虾蛄去壳，取可食部分，匀浆，离心提取冷冻干燥；(2)进行凝胶过滤层析；(3)进行阴离子交换层析；(4)进行脱盐处理，得第一亚型金属硫蛋白和第二亚型金属硫蛋白。本发明专利技术以口虾蛄可食部分为原料，针对口虾蛄自身特有的基质特点设计高纯度金属硫蛋白的提取工艺，该工艺提取周期短，提取量大，且成本低，纯度高，适合工厂化、规模化生产。

A Method for Extracting High Purity Metallothionein from Crayfish

【技术实现步骤摘要】
一种从口虾蛄中提取高纯度金属硫蛋白的方法
本专利技术涉及金属硫蛋白提取
，尤其涉及一种从口虾蛄中提取高纯度金属硫蛋白的方法。
技术介绍
金属硫蛋白(metallothionein，MT)是富含半胱氨酸(Cys)的低分子量蛋白质(6000～7000Da)，通过其半胱氨酸硫醇基团对重金属具有结合能力，能够结合多达20个单价或7个二价重金属离子。MT在生物体内发挥重要的生理作用，主要表现为参与生物体内微量金属元素的储存、运输及代谢和对非必需重金属元素的螯合解毒，此外在调节内环境的稳态、清除自由基、防止组织氧化损伤、拮抗生理和生化反应等方面也有很重要的意义，并为其他金属蛋白和金属酶类提供活性中心，因此MT在环境监测、保健食品与医药领域具有十分广泛的应用。目前MT主要从哺乳动物(如人、大鼠、小鼠及家兔等)和一些细菌及真菌中提取纯化。但现阶段无有效的技术对其进行大批量生产，限制了其开发和应用。其高纯度物售价高，目前市场在售的仅能买到国内一家公司生产的兔肝物，标注纯度在95％以上，售价约1500元/5mg，但不具备标准物质证书，实际纯度有待考究。口虾蛄(Oratosquillaoratori本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从口虾蛄中提取高纯度金属硫蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将口虾蛄去壳，取可食部分，匀浆，离心提取，冷冻干燥，得口虾蛄金属硫蛋白粗提物；(2)将口虾蛄金属硫蛋白粗提物复溶，离心，用滤膜过滤，进行凝胶过滤层析，收集洗脱液，冷冻干燥，得金属硫蛋白混合物；(3)将金属硫蛋白混合物复溶，进行阴离子交换层析，分别收集两种亚型金属硫蛋白洗脱液，冷冻干燥，得第一亚型金属硫蛋白粗产物和第二亚型金属硫蛋白粗产物；(4)分别对第一亚型金属硫蛋白粗产物和第一亚型金属硫蛋白粗产物复溶，进行脱盐处理，得第一亚型金属硫蛋白和第二亚型金属硫蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种从口虾蛄中提取高纯度金属硫蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将口虾蛄去壳，取可食部分，匀浆，离心提取，冷冻干燥，得口虾蛄金属硫蛋白粗提物；(2)将口虾蛄金属硫蛋白粗提物复溶，离心，用滤膜过滤，进行凝胶过滤层析，收集洗脱液，冷冻干燥，得金属硫蛋白混合物；(3)将金属硫蛋白混合物复溶，进行阴离子交换层析，分别收集两种亚型金属硫蛋白洗脱液，冷冻干燥，得第一亚型金属硫蛋白粗产物和第二亚型金属硫蛋白粗产物；(4)分别对第一亚型金属硫蛋白粗产物和第一亚型金属硫蛋白粗产物复溶，进行脱盐处理，得第一亚型金属硫蛋白和第二亚型金属硫蛋白。2.根据权利要求1所述的一种从口虾蛄中提取高纯度金属硫蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中，离心提取工艺为：加入Tris-HCl缓冲液，在45～55℃搅拌提取1～2h，将提取液高速冷冻离心，收集上清液a加热至70～80℃保温3～7min，快速冷却至室温后再次高速冷冻离心，收集上清液b，加入无水乙醇，-18～-25℃过夜沉淀；再次高速冷冻离心，取沉淀物加入超纯水充分溶解，再次高速冷冻离心，收集上清液c冷冻干燥后得到口虾蛄金属硫蛋白粗提物。3.根据权利要求2所述的一种从口虾蛄中提取高纯度金属硫蛋白的方法，步骤(1)中，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲液的pH为7.5～8.0，浓度为0.02～0.05mol/L；加入量为上清液b体积的3倍。4.根据权利要求2所述的一种从口虾蛄中提取高纯度金属硫蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述口虾蛄与Tris-HCl缓冲液的料液比(3～6)：1g/mL。5.根据权利要求2所述的一种从口虾蛄中提取高纯度金属硫蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中，高速冷冻离心的温度控制在4～10℃，转速控制在10000～15000...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅光明，严国，张小军，陈思，孟春英，
申请(专利权)人：浙江省海洋水产研究所，
类型：发明
国别省市：浙江,33