肺癌的检测和治疗方法技术

提供了用于检测早期肺癌的方法和相关试剂盒，以及确定患肺癌的风险。

Detection and treatment of lung cancer

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肺癌的检测和治疗方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年2月9日提交的美国临时申请第62/456,731号的优先权，将其公开内容全部并入本文以供参照。序列表的并入包括在名为“MDA0025401PC_ST25”的文件中的序列表，其在MicrosoftWindows操作系统中检测为140千字节并且在2018年1月4日创建，以电子方式提交，并且并入本文以供参照。关于联邦政府资助的研究或开发的声明本专利技术是在美国国防部(DepartmentofDefense)颁发的基金号为W81XWH-1-1-632的政府资助下进行的。政府对本专利技术享有一定权利。
技术介绍
肺癌是美国最普遍的癌症，五年存活率小于15％。对肺癌的治疗正在从使用由辐射、叶酸代谢、基于铂的药物和/或基于紫杉醇的药物组成的有限选择的疗法转变为需要对肿瘤和/或存在或缺乏关键生物标志物或治疗性靶蛋白进行组织学表征的更靶向的治疗。肺癌是世界范围内的主要癌症杀手，并且占美国所有癌症死亡中的四分之一。来自全国肺筛查试验(NLST)的数据表明，每年对高风险现下吸烟者和戒烟者进行胸部LDCT筛查使肺癌死亡率降低20％，总死亡率降低7％。因此，美国预防服务工作组(USPSTF)已推荐在已吸烟30包年(pack-year)、戒烟后不超过15年的年龄为55-80岁的烟民(ever-smoker)中进行LDCT筛查肺癌。然而，NLST研究使得就与过度诊断相关联的发病率、良性结节治疗和经济成本而言与CT筛查相关的几个重要消极方面变得突出。重要的是，基于目前的筛查标准，通过筛查挽救的生命数量占肺癌死亡总人数的百分比估计相对较小。此外，从一般群体队列(英国Biobank和欧洲癌症与营养前瞻性调查(EPIC)研究)招募的一百多万受试者的数据表明，少于50％发生率(incident)的肺癌病例将有资格基于USPSTF标准接受筛查。关于肺癌风险预测的大量文献对于在鉴定CT筛查受试者时用基于风险的模型替换二分类USPSTF筛查标准的益处提供了令人信服的论据。例如，最近估计通过使用基于个体风险评估的筛查标准可以避免20％的额外肺癌死亡。考虑到利用这种风险预测工具所需的信息可以由普通医师轻松确定-或者甚至使用在线风险计算器进行自我评估-未来的肺癌筛查项目似乎可能在评估筛查资格时实施这些工具。USPSTF筛查标准的替代方案将是基于个体水平风险的筛查标准，其准确地估计每名个体在不久的将来(例如，1-3年)的肺癌风险。已经发布了几种依赖于人口统计数据(年龄和性别)和问卷调查(主要是吸烟)的风险因素数据的风险预测模型。然而，通过并入包括无法通过问卷调查获取的信息的生物标志物，可以获得实质性的改善。目前正使用靶向核酸、蛋白质和代谢物以及循环肿瘤细胞和微粒的各种分析平台，努力开发用于肺癌早期检测的基于血液的生物标志物。例如，蛋白质组学研究已确定了几种候选循环标志物，包括表面活性蛋白B(SFTPB)及其前体形式(Pro-SFTPB)，当使用在LDCT(AUC改善：0.67-0.74)时收集的血液样品以及来自医师健康研究(PhysiciansHealthStudy)的诊断前血液样品进行测定时，已证明Pro-SFTPB结合吸烟信息可以显著改善肺癌风险预测。已发现其它循环蛋白在肺癌中表现出增加的水平，但具有有限的灵敏度和特异性而不足以用作肺癌筛查的单一标志物。鉴于SFTPB及其前体形式Pro-SFTPB在肺癌诊断之前收集的样品中和在筛查环境中的表现，使用一组选定的肿瘤相关蛋白质对USPSTF标准进行改进的可能性进行了研究。该研究基于高风险肺癌前瞻性队列、用于建立小组的β-胡萝卜素和视黄醇功效试验(CARET)研究、以及选自两个大型一般群体队列的病例和对照、欧洲癌症与营养前瞻性调查(EPIC)研究以及瑞典北部健康与疾病研究(NSHDS)，涉及367,000名参与者进行验证。
技术实现思路
本公开提供用于肺癌早期检测的方法和试剂盒。该方法和试剂盒利用对从受试者获取的生物样品中包括的生物标志物的多个测定。对至少四种生物标志物：CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的联合分析，在针对具有已知肺癌状态(即肺癌阳性或肺癌阴性)的队列进行筛查时提供高准确性的肺癌诊断。任选地，也可以分析二乙酰精胺(DAS)的水平。基于来自受试者的生物样品中发现的CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的水平，鉴定出可以预测受试者的肺癌状态的回归模型。在一美国队列中开发基于四种单独的生物标志物的生物标志物得分，并且在两个欧洲队列中的外部验证证实，与仅基于吸烟信息的模型相比，将生物标志物得分与吸烟信息合并在综合风险预测模型中提供了在病例和对照之间总体区分的显著改善。与USPSTF筛查标准的42％相比，综合风险预测模型鉴定验证样品中76％的未来肺癌病例，而不增加假阳性数量。因此，本文提供：·检测受试者肺癌和肺癌风险的方法；·确定和/或对受试者中肺癌存在的风险增加进行定量的方法；·确定受试者患肺癌风险的方法；各自包括测量来自受试者的样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB以及任选的二乙酰精胺(DAS)的水平。还提供治疗或预防受试者中肺癌进展的方法，其中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB以及任选的二乙酰精胺(DAS)的水平将受试者分类为患有肺癌或处于患肺癌的风险。还提供相应的试剂盒，用于确定来自受试者的样品中肺癌指标的存在，用于检测受试者中的肺癌和肺癌风险，以及用于确定和/或对受试者中肺癌存在的风险增加进行定量，该试剂盒包括用于测量样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB以及任选的二乙酰精胺(DAS)的材料。在一些实施方式中，在从受试者抽取的血液样品中测量生物标志物。在一些实施方式中，可以确定生物样品中生物标志物的存在或缺乏。在一些实施方式中，可以对生物样品中的生物标志物的水平进行定量。在一些实施方式中，提供表面以分析生物样品。在一些实施方式中，目标生物标志物非特异性地吸附在该表面上。在一些实施方式中，将对目标生物标志物具有特异性的受体掺入该表面。在一些实施方式中，表面与颗粒结合，例如珠子。在一些实施方式中，生物标志物结合特定受体分子，并且可以确定生物标志物-受体复合物的存在或缺乏。在一些实施方式中，可以对生物标志物-受体复合物的量进行定量。在一些实施方式中，受体分子与酶连接以促进检测和定量。在一些实施方式中，生物标志物结合特定的中继分子，并且生物标志物-中继分子复合物转而又结合受体分子。在一些实施方式中，能够确定生物标志物-中继-受体复合物的存在或缺乏。在一些实施方式中，可以对生物标志物-中继-受体复合物的量进行定量。在一些实施方式中，受体分子与酶连接以促进检测和定量。在一些实施方式中，依次分析生物样品的各个生物标志物。在一些实施方式中，将生物样品分成单独的部分以允许同时分析多种生物标志物。在一些实施方式中，在针对多种生物标志物的单个过程中分析生物样品。在一些实施方式中，能够通过视觉检查确定生物标志物的存在或缺乏。在一些实施方式中，生物标志物的量能够通过使用光谱技术来确定。在一些实施方式中，光谱技术是质谱法。在一些实施方式中，光谱技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：从所述受试者获取生物样品；测量所述生物样品中CEA的水平；测量所述生物样品中CA125的水平；测量所述生物样品中CYFRA21‑1的水平；测量所述生物样品中Pro‑SFTPB的水平；其中CEA、CA125、CYFRA21‑1和Pro‑SFTPB的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.02.09 US 62/456,7311.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：从所述受试者获取生物样品；测量所述生物样品中CEA的水平；测量所述生物样品中CA125的水平；测量所述生物样品中CYFRA21-1的水平；测量所述生物样品中Pro-SFTPB的水平；其中CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。2.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：从所述受试者获取生物样品；使所述样品与结合CEA的第一报告分子接触；使所述样品与结合CA125的第二报告分子接触；使所述样品与结合CYFRA21-1的第三报告分子接触；使所述样品与结合Pro-SFTPB的第四报告分子接触；其中所述第一报告分子、所述第二报告分子、所述第三报告分子和所述第四报告分子的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。3.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：从所述受试者获取生物样品；提供结合CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的表面；将所述表面与所述生物样品一起孵育；使所述表面与结合CEA的第一报告分子接触；使所述表面与结合CA125的第二报告分子接触；使所述表面与结合CYFRA21-1的第三报告分子接触；使所述表面与结合Pro-SFTPB的第四报告分子接触；测量与所述表面相关联的所述第一报告分子的量；测量与所述表面相关联的所述第二报告分子的量；测量与所述表面相关联的所述第三报告分子的量；测量与所述表面相关联的所述第四报告分子的量；其中所述第一报告分子、所述第二报告分子、所述第三报告分子和所述第四报告分子的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。4.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：从所述受试者获取生物样品；提供具有用于结合CEA的手段的第一表面；提供具有用于结合CA125的手段的第二表面；提供具有用于结合CYFRA21-1的手段的第三表面；提供具有用于结合Pro-SFTPB的手段的第四表面；将所述第一表面与所述生物样品一起孵育；将所述第二表面与所述生物样品一起孵育；将所述第三表面与所述生物样品一起孵育；将所述第四表面与所述生物样品一起孵育；使所述第一表面与结合CEA的第一报告分子接触；使所述第二表面与结合CA125的第二报告分子接触；使所述第三表面与结合CYFRA21-1的第三报告分子接触；使所述第四表面与结合pro-SFTPB的第三报告分子接触；测量与所述第一表面相关联的所述第一报告分子的量；测量与所述第二表面相关联的所述第二报告分子的量；测量与所述第三表面相关联的所述第三报告分子的量；测量与所述第四表面相关联的所述第三报告分子的量；其中所述第一报告分子、所述第二报告分子、所述第三报告分子和所述第四报告分子的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。5.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：从所述受试者获取生物样品；提供具有用于结合CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的手段的表面；将所述表面与所述生物样品一起孵育；使所述表面与结合CEA的第一中继分子接触；使所述表面与结合CA125的第二中继分子接触；使所述表面与结合CYFRA21-1的第三中继分子接触；使所述表面与结合Pro-SFTPB的第四中继分子接触；使所述表面与结合所述第一中继分子的第一报告分子接触；使所述表面与结合所述第二中继分子的第二报告分子接触；使所述表面与结合所述第三中继分子的第三报告分子接触；使所述表面与结合所述第四中继分子的第四报告分子接触；测量与所述第一中继分子和CEA相关联的所述第一报告分子的量；测量与所述第二中继分子和CA125相关联的所述第二报告分子的量；测量与所述第三中继分子和CYFRA21-1相关联的第三报告分子的量；测量与所述第四中继分子和Pro-SFTPB相关联的第四报告分子的量；其中所述第一报告分子、所述第二报告分子、所述第三报告分子和所述第四报告分子的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。6.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：从所述受试者获取生物样品；提供具有用于结合CEA的手段的第一表面；提供具有用于结合CA125的手段的第二表面；提供具有用于结合CYFRA21-1的手段的第三表面；提供具有用于结合Pro-SFTPB的手段的第四表面；将所述第一表面与所述生物样品一起孵育；将所述第二表面与所述生物样品一起孵育；将所述第三表面与所述生物样品一起孵育；将所述第四表面与所述生物样品一起孵育；使所述第一表面与结合CEA的第一中继分子接触；使所述第二表面与结合CA125的第二中继分子接触；使所述第三表面与结合CYFRA21-1的第三中继分子接触；使所述第四表面与结合Pro-SFTPB的第四中继分子接触；使所述第一表面与结合所述第一中继分子的第一报告分子接触；使所述第二表面与结合所述第二中继分子的第二报告分子接触；使所述第三表面与结合所述第三中继分子的第三报告分子接触；使所述第四表面与结合所述第四中继分子的第四报告分子接触；测量与所述第一中继分子和CEA相关联的所述第一报告分子的量；测量与所述第二中继分子和CA125相关联的所述第二报告分子的量；测量与所述第三中继分子和CYFRA21-1相关联的所述第三报告分子的量；测量与所述第四中继分子和Pro-SFTPB相关联的所述第四报告分子的量；其中所述第一报告分子、所述第二报告分子、所述第三报告分子和所述第四报告分子的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中相对于健康受试者，CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB或与其结合的报告分子的量在所述受试者中升高。8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中至少一个表面还包括至少一种选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的生物标志物的受体分子。9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中与不患肺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的量升高。10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中至少一个表面还包括至少一种选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的生物标志物或抗原的受体分子。11.如权利要求10所述的方法，其中所述参照受试者或组是健康的。12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，还包括：测量所述生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；其中二乙酰精胺(DAS)的量将患者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述样品包括选自血液、血浆和血清的生物样品。14.如权利要求13所述的方法，其中所述生物样品是血清。15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量进行定量。16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中测量CEA、CA125CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的浓度。17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中基于所测量的生物标志物的浓度确定所述受试者是否患有肺癌。18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所测量的浓度用于基于表10中所列的截止值处的灵敏度和特异性值计算生物标志物得分。19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，还包括以下步骤：将所测量的所述生物样品中每种生物标志物的浓度与统计模型的预测进行比较。20.如权利要求19所述的方法，其中小组选自：a.由CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB组成的小组；或b.由CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)组成的小组。21.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中至少一个表面是固体颗粒的表面。22.如权利要求21所述的方法，其中所述固体颗粒是珠子。23.如权利要求2-22中任一项所述的方法，其中至少一种报告分子与酶连接。24.如权利要求2-23中任一项所述的方法，其中至少一种报告分子提供能够检测到的信号。25.如权利要求24所述的方法，其中所述能够检测到的信号能够通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法检测。26.如权利要求25所述的方法，其中所述光谱测定方法是质谱术。27.如权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述小组包括已通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法鉴定的生物标志物。28.如权利要求27所述的方法，其中所述小组包括已通过UV-可见光谱学或质子NMR光谱学鉴定的生物标志物。29.如权利要求2-28中任一项所述的方法，其中所述第一报告分子选择性结合CEA。30.如权利要求2-28中任一项所述的方法，其中所述第二报告分子选择性结合CA125。31.如权利要求2-28中任一项所述的方法，其中所述第三报告分子选择性结合CYFRA21-1。32.如权利要求2-28中任一项所述的方法，其中所述第四报告分子选择性结合Pro-SFTPB。33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定基本上同时进行。34.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定以逐步方式进行。35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其包括将受试者病史信息包括在患有肺癌或不患有肺癌的指定中。36.如权利要求1-35中任一项所述的方法，其包括对指定为患有肺癌的受试者施用至少一种替代诊断测试。37.如权利要求36所述的方法，其中所述至少一种替代诊断测试包括至少一种ctDNA的测定或测序。38.一种治疗疑似患有肺癌的受试者的方法，其包括用权利要求1-37中任一项所述的方法分析所述受试者患肺癌的风险，和施用治疗有效量的对癌症的治疗。39.如权利要求38所述的治疗方法，其中所述治疗是外科手术、化学疗法、免疫疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。40.如权利要求1-39中任一项所述的方法，其中所述受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。41.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中与患有腺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。42.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中与患有鳞状细胞癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。43.如权利要求1-42中任一项所述的方法，还包括将CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量与表10中所例示的截止值进行比较。44.如权利要求43所述的方法，其中所述截止值包括至少0.83的AUC(95％CI)。45.如权利要求43所述的方法，其中所述截止值包括至少0.80的AUC(95％CI)。46.根据权利要求43所述的方法，其中所述受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。47.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述肺癌在临界可切除阶段或之前诊断。48.如权利要求47的方法，其中所述肺癌在可切除阶段诊断。49.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从所述受试者获取生物样品；通过使所述生物样品与CEA抗体接触并观察CEA与抗体之间的结合来测量所述生物样品中CEA的水平；通过使所述生物样品与CA125抗体接触并观察CA125与抗体之间的结合来测量所述生物样品中CA125的水平；通过使所述生物样品与CYFRA21-1抗体接触并观察CYFRA21-1与抗体之间的结合来测量所述生物样品中CYFRA21-1的水平；通过使所述生物样品与pro-SFTPB抗体接触并观察pro-SFTPB与抗体之间的结合来测量所述生物样品中pro-SFTPB的水平；如通过对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测量所确定，将所述受试者的状况指定为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。50.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从所述受试者获取生物样品；测量所述生物样品中CEA的水平；测量所述生物样品中CA125的水平；测量所述生物样品中CYFRA21-1的水平；测量所述生物样品中pro-SFTPB的水平；确定CEA相对于第一标准值的水平，其中该比率预测肺癌的存在；确定CA125相对于第二标准值的水平，其中该比率预测肺癌的存在；确定CYFRA21-1相对于第三标准值的水平，其中该比率预测肺癌的存在；和确定pro-SFTPB相对于第四标准值的水平，其中该比率预测肺癌的存在；和如通过对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的比率的统计分析所确定，将所述受试者的状况指定为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。51.一种预测受试者患肺癌的风险的方法，其包括从所述受试者获取生物样品；测量所述生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB生物标志物的水平；和如通过对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的统计分析所确定，计算预测因子。52.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从所述受试者获取生物样品；测量所述生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB生物标志物的水平；如通过对所述生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的统计分析所确定，将所述受试者的状况指定为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。53.一种使用从疑似患有肺癌的受试者获得的生物样品确定受试者患肺癌的风险的方法，所述方法包括使用至少一种对CEA具有特异性的抗体或抗体部分，测定所述生物样品中存在的CEA的水平；和使用至少一种对CA125具有特异性的抗体或抗体部分，测定所述生物样品中存在的CA125的水平；和使用至少一种对CYFRA21-1具有特异性的抗体或抗体部分，测定所述生物样品中存在的CYFRA21-1的水平；和使用至少一种对pro-SFTPB具有特异性的抗体或抗体部分，测定所述生物样品中存在的pro-SFTPB的水平；和确定CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的水平是否指示所述受试者患有肺癌。54.一种用于确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获取生物样品；用抗CEA抗体或其抗原结合片段对所述样品进行免疫测定；用抗CA125抗体或其抗原结合片段对所述样品进行免疫测定；用抗CYFRA21-1抗体或其抗原结合片段对所述样品进行免疫测定；用抗pro-SFTPB抗体或其抗原结合片段对所述样品进行免疫测定；其中抗体的结合指示所述受试者中的肺癌，并且免疫测定能够检测早期肺癌。55.一种用于确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从所述受试者获取生物样品；用抗CEA抗体或其抗原结合片段进行免疫测定；用抗CA125抗体或其抗原结合片段进行免疫测定；用抗CYFRA21-1抗体或其抗原结合片段进行免疫测定；用抗pro-SFTPB抗体或其抗原结合片段进行免疫测定；确定CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的水平是否指示所述受试者患有肺癌。56.如权利要求49-55中任一项所述的方法，其中相对于健康受试者，CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的水平在所述受试者中升高。57.如权利要求49-56中任一项所述的方法，其中与不患肺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。58.如权利要求57所述的方法，其中所述参照受试者或组是健康的。59.如权利要求49-58中任一项所述的方法，其中至少一个表面还包括至少一种选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的生物标志物或抗原的受体分子。60.如权利要求49-59中任一项所述的方法，其中至少一个表面是固体颗粒的表面。61.如权利要求49-60中任一项所述的方法，还包括：测量所述生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；其中二乙酰精胺(DAS)的量将患者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。62.如权利要求49-61中任一项所述的方法，其中所述样品包括选自血液、血浆和血清的生物样品。63.如权利要求62所述的方法，其中所述生物样品是血清。64.如权利要求49-63中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量进行定量。65.如权利要求49-64中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的量的检测包括使用固体颗粒。66.如权利要求65所述的方法，其中所述固体颗粒是珠子。67.如权利要求49-66中任一项所述的方法，其中至少一种报告分子与酶连接。68.如权利要求49-66中任一项所述的方法，其中至少一种报告分子提供能够检测到的信号。69.如权利要求68所述的方法，其中所述能够检测到的信号能够通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法检测。70.如权利要求49-69中任一项所述的方法，其中测量CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的浓度。71.如权利要求49-70中任一项所述的方法，其中基于所测量的生物标志物的浓度，确定所述受试者是否患有肺癌。72.如权利要求71所述的方法，其中所测量的浓度用于基于表10中所列的截止值处的灵敏度和特异性值计算生物标志物得分。73.如权利要求49-72中任一项所述的方法，还包括以下步骤：将所测量的所述生物样品中每种生物标志物的浓度与统计模型的预测进行比较。74.如权利要求49-73中任一项所述的方法，其中小组选自：a.由CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB组成的小组；或b.由CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)组成的小组。75.如权利要求49-74中任一项所述的方法，其中小组包括已通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法鉴定的生物标志物。76.如权利要求49-75中任一项所述的方法，其中小组包括已通过UV-可见光谱学或质子NMR光谱学鉴定的生物标志物。77.如权利要求49-76中任一项所述的方法，其中第一报告分子选择性结合CEA。78.如权利要求49-77中任一项所述的方法，其中第二报告分子选择性结合CA125。79.如权利要求49-78中任一项所述的方法，其中第三报告分子选择性结合CYFRA21-1。80.如权利要求49-79中任一项所述的方法，其中第四报告分子选择性结合Pro-SFTPB。81.如权利要求49-80中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定基本上同时进行。82.如权利要求49-81中任一项所述的方法，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定以逐步方式进行。83.如权利要求49-82中任一项所述的方法，其包括将受试者病史信息包括在患有肺癌或不患有肺癌的指定中。84.如权利要求49-83中任一项所述的方法，其包括对指定为患有肺癌的受试者施用至少一种替代诊断测试。85.如权利要求84所述的方法，其中所述至少一种替代诊断测试包括至少一种ctDNA的测定或测序。86.一种治疗疑似患有肺癌的受试者的方法，其包括用权利要求49-85中任一项所述的方法分析所述受试者患肺癌的风险；和施用治疗有效量的对癌症的治疗。87.如权利要求86所述的治疗方法，其中所述治疗是外科手术、化学疗法、免疫疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。88.如权利要求49-87中任一项所述的方法，其中所述受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。89.如权利要求49-88中任一项所述的方法，其中与患有腺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。90.如权利要求49-89中任一项所述的方法，其中与患有鳞状细胞癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。91.如权利要求49-89中任一项所述的方法，其还包括将CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量与表10中例示的截止值进行比较。92.如权利要求91所述的方法，其中所述截止值包括至少0.83的AUC(95％CI)。93.如权利要求91所述的方法，其中所述截止值包括至少0.80的AUC(95％CI)。94.如权利要求49-93中任一项所述的方法，其中所述受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。95.如权利要求49-94中任一项所述的方法，其中所述肺癌在临界可切除阶段或之前诊断。96.如权利要求49-95中任一项所述的方法，其中所述肺癌在可切除阶段诊断。97.一试剂盒，其用于权利要求1-24中任一项所述的方法，所述试剂盒包括包含以下溶质的试剂溶液：用于检测CEA的第一溶质；用于检测CA125的第二溶质；用于检测CYFRA21-1的第三溶质；和用于检测pro-SFTPB的第四溶质。98.一试剂盒，其用于权利要求1-24中任一项所述的方法，所述试剂盒包括第一试剂溶液，其包括用于检测CEA的第一溶质；第二试剂溶液，其包括用于检测CA125的第二溶质；第三试剂溶液，其包括用于检测CYFRA21-1的第三溶质；和第四试剂溶液，其包括用于检测pro-SFTPB的第四溶质。99.如权利要求97至98所述的试剂盒，还包括：包含以下溶质的试剂溶液：用于检测CEA抗原的第一溶质；用于检测CA125抗原的第二溶质；用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；用于检测pro-SFTPB抗原的第四溶质；和用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。100.如权利要求97-99中任一项所述的试剂盒，其包括用于使所述试剂溶液与生物样品接触的装置。101.如权利要求97-100中任一项所述的试剂盒，其包括至少一个表面，所述表面具有用于结合至少一种生物标志物或抗原的手段。102.如权利要求97-101中任一项所述的试剂盒，其中所述至少一种生物标志物选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB。103.如权利要求97-102中任一项所述的试剂盒，其中所述至少一个表面包括用于结合ctDNA的手段。104.如权利要求97-103中任一项所述的试剂盒，还包括与代谢物生物标志物二乙酰精胺(DAS)结合的抗体或其抗原结合片段。105.如权利要求97-104中任一项所述的试剂盒，其中抗原结合试剂包括抗体或其抗原结合片段、RNA、DNA或RNA/DNA杂合体。106.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从患者获取生物样品；测量所述生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；其中二乙酰精胺(DAS)的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。107.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，包括血浆衍生的生物标志物组和蛋白质标志物组：其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·哈纳希，A·田口，Z·冯，
申请(专利权)人：得克萨斯大学体系董事会，
类型：发明
国别省市：美国,US