呼吸道感染多重检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术提供了呼吸道感染多重检测试剂盒及检测方法，具体地，本发明专利技术对多重呼吸道病原体PCR扩增体系进行了设计及实验验证，获得了检测多种呼吸道病原体的多重荧光PCR扩增体系，单一体系可同时检测3种呼吸道病原体。本发明专利技术的试剂盒具有很高的灵敏度和特异性，通过本发明专利技术的试剂盒，能够实现对鼻咽拭子、肺泡灌洗液、痰等样本中的多重呼吸道病原体快速检测和分析。

Multiple Detection Kit and Detection Method for Respiratory Tract Infection

【技术实现步骤摘要】
呼吸道感染多重检测试剂盒及检测方法
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及一种呼吸道感染多重检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
急性呼吸道感染(acuterespiratorytractinfection，ARTI)是全球范围内人类最常见的传染性疾病之一，发病率居急性传染病的首位，平均每年下呼吸道感染导致大约4000000患者死亡。在全球范围内，呼吸道感染是导致5岁以下儿童死亡的主要原因。ARTI—般由细菌和病毒引起，其中大约90％为呼吸道病毒所导致，但死亡及重症的病例主要由细菌感染引起的。面对当前呼吸道传染病防治的复杂形势，加强传染流行病株病疫情信息的监测，可为制订相关传染病的防控策略提供依据；临床上及早明确病原体的型别，进行针对性的抗感染治疗则是控制感染的关键环节。感染呼吸道系统的病原体种类很多，同时也因季节的不同流行的病原体种类不同。引起患儿出现急性呼吸道感染的病毒主要为甲型流感病毒(InfluenceA,IVA)、乙型流感病毒(InfluenceB,IVB)、呼吸道合胞病毒(RespiratorySyncytialVirus,RSV)及腺病毒(Adenovirus,ADV)等；引起患儿出现急性呼吸道感染的细菌是肺炎衣原体(Chlamydiapneumoniae，CP)、肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae，MP)、肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,SP)、嗜肺军团菌(Legionellapneumophila，LP)及流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae,HI)等。在人群中，尤其是儿童中，急性呼吸道感染往往是病毒和细菌混合感染或者继发感染，或单一及多种病毒感染，随着病情的持续发展，混合感染成为一种普遍现象。这对于患儿病情的检测和病原体的确定增加了难度。因此进行呼吸道病原体实验室监测，最大可能地对呼吸道传染病疫情进行预测预警，以期在疫情暴发流行早期及时发现并采取快速的应对措施，减少对社会和经济发展的影响。目前常用的检测呼吸道病原体的检测方法：培养法、血清学检测、分子生物学检测方法等。培养法是诊断细菌性感染和病毒感染最可靠的方法，也是诊断的金标准。但这种方法复杂，操作繁琐，周期长，灵敏度低，对样本的要求比较高，而且易出现假阴性的结果。血清学检测是基于抗原抗体反应原理进行检测，检测周期短，但特异性和灵敏度低，易出现假阴性和假阳性的结果，具有一定的局限性。因此，本领域技术人员致力于开发准确度高、操作简单，可同时检测多种呼吸道病原体的检测技术，以快速准确的检测呼吸道病原体疫情。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高灵敏度、使用便捷的呼吸道感染多重检测试剂盒及检测方法。本专利技术的第一方面，提供了一种用于呼吸道感染多重检测的PCR引物对组，所述引物对组包括第一引物对集，所述第一引物对集包括：第一引物对，所述第一引物对包括如SEQIDNO.:20所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:21所示的反向引物；第二引物对，所述第二引物对包括如SEQIDNO.:23所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:24所示的反向引物；和第三引物对，所述第三引物对包括如SEQIDNO.:26所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:27所示的反向引物。在另一优选例中，所述引物对组还包括第二引物对集，所述第二引物对集包括：第四引物对，所述第四引物对包括如SEQIDNO.:11所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:12所示的反向引物；第五引物对，所述第五引物对包括如SEQIDNO.:14所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:15所示的反向引物。第六引物对，所述第六引物对包括如SEQIDNO.:17所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:18所示的反向引物。在另一优选例中，所述引物对组还包括第三引物对集，所述第三引物对集包括：第七引物对，所述第七引物对包括如SEQIDNO.:1所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:2所示的反向引物。第八引物对，所述第八引物对包括如SEQIDNO.:4所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:5所示的反向引物。第九引物对，所述第九引物对包括如SEQIDNO.:7所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:8所示的反向引物。在另一优选例中，所述第一引物对集任选地包括第十引物对。在另一优选例中，所述第二引物对集任选地包括第十引物对。在另一优选例中，所述第三引物对集任选地包括第十引物对。本专利技术的第二方面，提供了一种用于呼吸道感染多重检测的探针组，所述探针组包括：如SEQIDNO.:22所示的第一探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:6所示的第二探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:9所示的第三探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:10所示的第四探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:13所示的第五探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:16所示的第六探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:19所示的第七探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:3所示的第八探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:25所示的第九探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:28所示的第十探针。在另一优选例中，所述探针组还包括：如SEQIDNO.:31所示的第十一探针。本专利技术的第三方面，提供了一种用于呼吸道感染多重检测的试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术第一方面所述的PCR引物对组。在另一优选例中，所述试剂盒还包括本专利技术第二方面所述的探针组。在另一优选例中，所述试剂盒包括第一引物探针混合液，所述第一引物探针混合液包括：所述第一引物对集，和如SEQIDNO.:22所示的第一探针、如SEQIDNO.:25所示的第二探针、如SEQIDNO.:28所示的第三探针。在另一优选例中，所述试剂盒还包括第二引物探针混合液，所述第二引物探针混合液包括：所述第二引物对集，和如SEQIDNO.:13所示的第四探针、如SEQIDNO.:16所示的第五探针、如SEQIDNO.:19所示的第六探针。在另一优选例中，所述试剂盒还包括第三引物探针混合液，所述第三引物探针混合液包括：所述第三引物对集，和如SEQIDNO.:3所示的第七探针、如SEQIDNO.:6所示的第八探针、如SEQIDNO.:9所示的第九探针、如SEQIDNO.:10所示的第十探针。在另一优选例中，所述第一引物探针混合液任选地包括第十一探针。在另一优选例中，所述第二引物探针混合液任选地包括第十一探针。在另一优选例中，所述第三引物探针混合液任选地包括第十一探针。在另一优选例中，所述试剂盒还包括选自下组的一种或多种独立包装的组分：Tris-HCl、三磷酸脱氧核糖核苷、(NH4)2SO4、MgCl2、KCl、C-MMLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、热启动Taq酶。在另一优选例中，所述试剂盒还包括阴性质控品。在另一优选例中，所述试剂盒还包括阳性质控品。本专利技术的第四方面，提供了一种检测呼吸道感染的方法，所述方法包括步骤：(1)提供待检测样本，所述样本中含有呼吸道本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于呼吸道感染多重检测的PCR引物对组，其特征在于，所述引物对组包括第一引物对集，所述第一引物对集包括：第一引物对，所述第一引物对包括如SEQ ID NO.:20所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:21所示的反向引物；第二引物对，所述第二引物对包括如SEQ ID NO.:23所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:24所示的反向引物；和第三引物对，所述第三引物对包括如SEQ ID NO.:26所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:27所示的反向引物。

【技术特征摘要】
1.一种用于呼吸道感染多重检测的PCR引物对组，其特征在于，所述引物对组包括第一引物对集，所述第一引物对集包括：第一引物对，所述第一引物对包括如SEQIDNO.:20所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:21所示的反向引物；第二引物对，所述第二引物对包括如SEQIDNO.:23所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:24所示的反向引物；和第三引物对，所述第三引物对包括如SEQIDNO.:26所示的正向引物；和，如SEQIDNO.:27所示的反向引物。2.一种用于呼吸道感染多重检测的探针组，其特征在于，所述探针组包括：如SEQIDNO.:22所示的第一探针、如SEQIDNO.:25所示的第二探针、和如SEQIDNO.:28所示的第三探针。3.一种引物探针混合液，其特征在于，所述引物探针混合液包括权利要求1所述的PCR引物对组；和，权利要求2所述的探针组。4.一种用于呼吸道感染多重检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的PCR引物对组。5.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括权利要求2所述的探...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，黄桃生，李欣钰，郑若楠，
申请(专利权)人：中山大学达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44