可溶性受体酪氨酸激酶sAxl在治疗结核病中的应用制造技术

本发明专利技术提供可溶性受体酪氨酸激酶sAxl在制备治疗结核病的药物中的应用，所述药物优选为sAxl重组蛋白(货号50126‑M08H，Sino Biological有限公司)。通过实验验证可知，上述sAxl重组蛋白减少结核菌感染后TNF‑αmRNA的表达量，减轻结核菌感染小鼠肺组织的病理损伤程度、降低肺组织的荷菌量，从而为结核病的治疗提供有效的药物支持。

Application of soluble receptor tyrosine kinase sAxl in the treatment of tuberculosis

【技术实现步骤摘要】
可溶性受体酪氨酸激酶sAxl在治疗结核病中的应用
本专利技术属于药物化学
，尤其涉及可溶性受体酪氨酸激酶sAxl在制备治疗结核病的药物中的应用。
技术介绍
结核病仍然是全球十大死因之一，是高于艾滋病在内的单一传染病中的头号杀手。2017年全球范围内有估计1010万结核病新发病例，估计160万结核病死亡病例[1]。耐药结核病严重危害公众健康，我国是结核病、耐药结核病双重高负担国家，印度(24％)、中国(13％)和俄罗斯(10％)三国利福平耐药/耐多药结核病(rifampicinresistant-/multidrugresistant-TB,RR/MDR-TB)发病例数之和，占全球RR/MDR-TB发病总例数的一半。研发新的抗结核药物对控制结核病疫情、尤其是耐药结核病疫情非常重要[1]。Axl属于受体酪氨酸激酶中的TAM(Tyro3-Axl-Mer)家族。Axl作为一种跨膜受体蛋白，有胞外区、跨膜区和胞内区3部分组成，胞内区为酪氨酸激酶结构域，具有自身磷酸化的特点，可激活下游信号通路，在血管新生、细胞增殖、凋亡细胞吞噬、肿瘤形成及迁徙和炎症调节等方面发挥重要作用。Axl抑制剂在多种肿瘤模型中均有良好的抑癌效果，已报道的Axl小分子抑制剂有17余种，其中一部分已批准上市，另外部分处于临床及临床前研究阶段，它们在抗肿瘤治疗中的应用显示出了良好的前景。Axl胞外段可被金属蛋白酶水解，脱落形成可溶性Axl(solubleAxl，sAxl)，sAxl与Axl配体竞争性结合，但无法启动下游信号传导机制，对Axl受体的功能起到负向调控作用。相关报道显示血浆sAxl含量可以作为炎症性疾病诊断的生物学标记物，但是，sAxl与结核菌感染的关系尚不清楚；sAxl在结核病诊断及治疗中的应用，在现有医学类论文、著作中亦未见报道。专利技术人前期研究表明结核菌感染可诱导sAxl含量增高：(1)结核菌感染巨噬细胞可诱导上清液中sAxl含量增高；(2)肺结核患者血浆sAxl含量明显增高、且与疾病严重程度呈显著性正相关。这些结果为探索sAxl重组蛋白在结核病中的作用奠定了科学基础。
技术实现思路
为了克服现有技术中的问题，本专利技术发现sAxl重组蛋白能够减轻结核菌感染小鼠的肺部病理损伤、减少结核菌感染小鼠肺组织中的荷菌量；在此基础上，本专利技术提供了一种可用于抗结核治疗的药物。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供可溶性受体酪氨酸激酶sAxl在制备治疗结核病的药物中的应用。为了进一步优化上述技术方案，本专利技术采取的技术措施还包括：进一步地，所述药物包含由编码Axl前体的细胞外结构域的DNA序列构建的蛋白。进一步地，所述药物包含sAxl重组蛋白。进一步地，所述sAxl重组蛋白来自SinoBiological有限公司，货号为50126-M08H。进一步地，所述sAxl重组蛋白能够减轻结核菌感染患者的肺部病理损伤、减少结核菌感染患者肺组织中的荷菌量。本专利技术采用上述技术方案，具有如下技术效果：本专利技术通过一系列实验证实，使用sAxl重组蛋白(货号50126-M08H，SinoBiological有限公司)能够抑制结核菌感染巨噬细胞的炎症反应。同时，相关动物实验结果证实，结核菌感染小鼠两周后，每只小鼠滴鼻给予2ug/day剂量的sAxl重组蛋白，给药两周后，和对照组小鼠相比较，给药组小鼠肺部病理损伤明显减轻、肺部结核菌荷菌量明显降低，这表明sAxl重组蛋白能有效抑制结核菌的感染，为结核病的预防和治疗提供有效的药物支持。附图说明图1为本专利技术一实施例中结核菌感染PMA-诱导的THP1巨噬细胞，感染前sAxl重组蛋白处理细胞，检测巨噬细胞炎症因子TNF-αmRNA表达情况的结果示意图；图2为本专利技术一实施例中结核菌感染小鼠两周后，给予sAxl重组蛋白滴鼻干预，检测小鼠肺组织炎症因子TNF-αmRNA表达情况的结果示意图；图3为本专利技术一实施例中结核菌感染小鼠两周后，给予sAxl重组蛋白滴鼻干预，对小鼠肺部切片实施苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosinstaining，H&E)的结果图；图4为本专利技术一实施例中结核菌感染小鼠两周后，给予sAxl重组蛋白滴鼻干预，小鼠肺组织结核菌荷菌量的统计图。具体实施方式本专利技术涉及可溶性受体酪氨酸激酶sAxl在制备治疗结核病的药物中的应用，所述药物优选为sAxl重组蛋白(货号50126-M08H，SinoBiological有限公司)。下面结合附图和实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。实施例1本实施例验证了sAxl重组蛋白与结核菌感染巨噬细胞TNF-αmRNA表达水平的关系。实验步骤如下：1)佛波酯PMA诱导THP1细胞分化为巨噬细胞：1mg的PMA用二甲基亚砜DMSO稀释为10ml(0.1mg/ml)，分装于1.5mlEP管中(1ml/管)。10ul的PMA稀释到100ul的1640培养液中，按每ml细胞液(106/ml)加入0.5ulPMA诱导THP1细胞分化24小时，得到的贴壁细胞，即巨噬细胞。2)结核菌(H37Rv)感染PMA-诱导的THP1巨噬细胞：巨噬细胞通过台盼蓝染色计数后以2×106个/孔，铺入6孔板中(每孔2ml培养基)，24小时后换液，实验组在感染前30分钟添加sAxl重组蛋白，对照组加入双蒸水，30分钟后加入H37Rv菌进行感染实验(MOI＝5)。感染0小时、6小时分别弃上清，每孔加1mlTRIzol反复吹打，裂解细胞，收集至EP管中3)RNA提取：上述收集的细胞经室温静置10分钟后，加0.2ml氯仿、充分混匀、室温静置10分钟、4℃12000rpm离心15分钟；吸取上清置于新的EP管中(约0.5ml)，加入0.5ml异丙醇、颠倒混匀、室温静置10分钟、再4℃离心15分钟；可见RNA在管底沉淀、弃上清，加75％乙醇重悬、沉淀后离心；弃上清，室温晾干、加DEPC水，55℃水浴溶解10分钟。分光光度计检测总RNA浓度，-80℃保存。4)逆转cDNA：用DEPC水稀释RNA至每管1ugRNA体积为10ul，65℃水浴，5分钟，加入10ul反转录混合液，37℃水浴，15分钟，转移至98℃水浴，5分钟，放置冰上，每管加入80ulDEPC水稀释5倍待用。5)qRT-PCR：Green酶进行qRT-PCR，20μl反应体系包括：3.6ulddH2O+10μlGreenReal-TimePCRMasterMixes-Plus+2μlPlussolution+2.4μl上下游引物(10uM)+2μl模板。样品加至96孔板，离心，上机AppliedBiosystems7300Real-timePCRsystem,反应条件：95℃60s，进入扩增循环(95℃5s，55℃10s，72℃15s)共40个循环，解析溶解曲线，分析结果。实验结果如图1所示，给予sAxl重组蛋白明显降低结核菌感染巨噬细胞TNF-αmRNA表达水平。实施例2本实施例验证了sAxl重组蛋白与结核菌感染小鼠肺组织TNF-αmRNA表达水平的关系。实验步骤如下：结核菌(H37Rv)感染C57BL/6小鼠，感染剂量为200CFU/只小鼠，小鼠经感本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.可溶性受体酪氨酸激酶sAxl在制备治疗结核病的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.可溶性受体酪氨酸激酶sAxl在制备治疗结核病的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包含由编码Axl前体的细胞外结构域的DNA序列构建的蛋白。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物包含sAxl重组蛋白。4.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：戈宝学，刘海鹏，陈建霞，王鹏，
申请(专利权)人：上海市肺科医院，
类型：发明
国别省市：上海,31