一种微藻混合培养的方法技术

本发明专利技术提供了一种微藻混合培养的方法，属于微藻培养技术领域，所述方法包括以下步骤：1)分别对尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻进行纯培养获得对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液；2)将所述对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液混合获得混合藻液；所述混合藻液细胞的总初始密度为0.8～1.2×10

A Method of Mixed Culture of Microalgae

【技术实现步骤摘要】
一种微藻混合培养的方法
本专利技术属于微藻培养
，尤其涉及一种微藻混合培养的方法。
技术介绍
微藻是一种资源丰富、种类繁多，细胞形态多样，通常直径在2～200μm。微藻是地球上最早出现的生物，早在3亿年前微藻就出现在海洋之中，并且通过自身的光合作用，将大气中的CO2转换成为人和动物呼吸所需要的O2。微藻也是一种重要的初级生产者，在水域生态系统的能量流动和物质循环扮演重要的作用。微藻具有丰富的营养物质，大小合适，能通过光合作用释放水生动物所需要的氧气，是鱼虾贝重要的肥料和饵料。尖刺拟菱形藻属于硅藻门。拟菱形藻细胞壳面呈延长的线形或披针形，环面呈两端渐细的纺锤状，通常具有两个色素体，对称分布在中节的两侧。拟菱形藻种类广泛分布在两极、温带、亚热带和热带海域。拟菱形藻种类繁多，各种类的拟菱形藻分布在不同的水域之中，其分布也受外界条件所控制。亚心形扁藻属绿藻门。亚心形扁藻体内含有蛋白质、脂肪等物质，大小适合，是鱼虾贝培养过程中重要的饵料。亚心形扁藻生长繁殖迅速，能自身合成多不饱和脂肪酸等物质，具有极高的经济价值。微藻的培养方式主要分为光能自养培养、异养培养和兼性培养等方式。目前的培养方式，微藻细胞密度低，叶绿素含量低。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种微藻混合培养的方法，将尖刺拟菱形藻与亚心形扁藻混合培养获得较高的细胞密度和叶绿素含量。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：一种微藻混合培养的方法，包括以下步骤：1)分别对尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻进行纯培养获得对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液；2)将所述对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液混合获得混合藻液；所述混合藻液细胞的总初始密度为0.8～1.2×105cell/mL；3)对所述混合藻液进行12～18d混合培养。优选的，步骤2)中所述混合藻液中尖刺拟菱形藻与亚心形扁藻的细胞密度比为(2:8)～(8:2)。优选的，步骤2)中所述混合藻液中尖刺拟菱形藻与亚心形扁藻的细胞密度比为(3:7)～(7:3)。优选的，步骤1)中所述培养用培养基为f/2培养基。优选的，步骤3)中所述混合培养的温度为23～25℃。优选的，步骤3)中所述混合培养光照的光暗时间比为12L:12D。优选的，所述混合培养期间，每5～7h对所述培养的混合藻液进行一次晃动。优选的，步骤3)中所述混合培养的时间为13～17d。优选的，步骤1)中纯培养获得对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液的时间为0.5～2d。本专利技术的有益效果：本专利技术提供的微藻混合培养的方法，将对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液混合后进行12～18d混合培养，能够显著提高亚心形扁藻的细胞密度、生物量和叶绿素a含量。根据本专利技术实施例的记载，共培养16d后亚心形扁藻的细胞密度提高15.6％；生物量提高33％；叶绿素a含量提高29.0％，总氮含量提高36.3％。具体实施方式本专利技术提供了一种微藻混合培养的方法，包括以下步骤：1)分别对尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻进行纯培养获得对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液；2)将所述对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液混合获得混合藻液；所述混合藻液细胞的总初始密度为0.8～1.2×105cell/mL；3)对所述混合藻液进行12～18d混合培养。在本专利技术中，分别对尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻进行纯培养获得对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液。本专利技术对所述尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻的来源没有特殊限定，采用本领域常规的市售尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻即可，在本专利技术具体实施过程中，所述尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻购自上海光语生物科技有限公司。本专利技术在获得所述尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻藻种后，分别对获得的尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻进行纯培养。在本专利技术中，所述纯培养的时间优选为0.5～2d，更优选为1d；所述尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻优选的在培养稳定后，第2d进入对数生长期。在本专利技术中，培养所述尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻的培养基优选为f/2培养基。在本专利技术中，所述f/2培养基优选的以海水或人工海水为溶剂；所述f/2培养基优选的包括以下组分：NaNO30.075g/L；NaH2PO4·2H2O0.00565g/L；微量元素溶液1mL/L和维生素溶液1mL/L。在本专利技术中，所述微量元素溶液以水为溶剂，优选的包括表1所示组分；所述维生素溶液以水为溶剂，优选的包括以下浓度的组分：维生素B120.0005g/L，盐酸硫胺素1g/L和生物素0.0005g/L。在本专利技术中，所述f/2培养基的pH值优选为8.0；所述pH调节用试剂优选为NaOH或HCL溶液进行。在本专利技术中，所述f/2培养基制备完成后，优选的进行灭菌；所述灭菌优选的采用高温蒸汽灭菌法进行；所述灭菌的温度优选为121℃，所述灭菌的时间优选为15min。表1微量元素液组成成分浓度g/LNa2EDTA4.16FeCl3·6H2O3.15CuSO4·5H2O0.01ZnSO4·7H2O0.022CoCl2·6H2O0.01MnCl2·4H2O0.18Na2MoO4·2H2O0.006本专利技术在获得所述对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液后，将所述对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液混合获得混合藻液。在本专利技术中，所述混合藻液中尖刺拟菱形藻与亚心形扁藻的细胞密度比优选为(2:8)～(8:2)，更优选为(3:7)～(7:3)，具体可选为3:7、5:5或7:3。在本专利技术中，所述混合藻液细胞的总初始密度优选为0.8～1.2×105cell/mL，更优选为1.0×105cell/mL。在本专利技术中，所述混合培养的温度优选为23～25℃，更优选为24℃；所述混合培养光照的光暗时间比优选为12L:12D。本专利技术在所述混合培养期间，每5～7h对所述培养的混合藻液进行一次晃动，优选的每6h进行一次晃动；本专利技术中，所述晃动的目的是防止藻细胞附壁或下沉；本专利技术中所述混合藻液优选的在培养瓶中进行培养，所述晃动通过摇晃培养瓶实现。在本专利技术中，所述混合培养的时间优选为13～17d，更优选为16d。在本专利技术中，尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻混合培养过程中，两者相互作用，释放某些含氮物质，转化成促进藻细胞生长所需的氮源。本专利技术在所述混合培养结束后，优选的进行细胞密度、生物量、总含氮量和叶绿素a含量的测定；所述细胞密度的测定优选为采用血球计数板测定；所述总氮含量的测定采用过硫酸钾氧化法；所述叶绿素a含量的测定优选的采用丙酮法。下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例1藻种：尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻购自上海光语生物科技有限公司。培养基：f/2培养基包括：NaNO30.075g/L；NaH2PO4·2H2O0.00565g/L；微量元素溶液1mL/L和维生素溶液1mL/L。微量元素溶液以水为溶剂，包括表1所示组分；所述维生素溶液以水为溶剂，包括以下浓度的组分：维生素B120.0005g/L，盐酸硫胺素1g/L和生物素0.0005g/L。配制f/2培养基；用1mol/L的NaOH或HCL溶液调节pH值为8.0；然后121℃高温蒸汽灭菌15min。尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻分别进行活本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种微藻混合培养的方法，包括以下步骤：1)分别对尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻进行纯培养获得对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液；2)将所述对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液混合获得混合藻液；所述混合藻液细胞的总初始密度为0.8～1.2×10

【技术特征摘要】
1.一种微藻混合培养的方法，包括以下步骤：1)分别对尖刺拟菱形藻和亚心形扁藻进行纯培养获得对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液；2)将所述对数生长期的尖刺拟菱形藻藻液和亚心形扁藻藻液混合获得混合藻液；所述混合藻液细胞的总初始密度为0.8～1.2×105cell/mL；3)对所述混合藻液进行12～18d混合培养。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述混合藻液中尖刺拟菱形藻与亚心形扁藻的细胞密度比为(2:8)～(8:2)。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述混合藻液中尖刺拟菱形藻与亚心形扁藻的细胞密度比为(3:7)～(7:3)。4.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜宗然，郭振，
申请(专利权)人：厦门昶科生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35