一种海洋富油微藻培养基以及海洋富油微藻产油方法技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，公开了一种海洋富油微藻培养基以及海洋富油微藻产油方法。本发明专利技术通过对人工海水BG11培养基重新进行配置优化，使其更加符合富油微藻Desmodesmus sp.WC08的培养条件，实现了油脂产率的极显著提高，为后续规模化的培养奠定理论基础并提供实验依据。

【技术实现步骤摘要】
一种海洋富油微藻培养基以及海洋富油微藻产油方法
本专利技术涉及微生物
，具体的说是涉及一种海洋富油微藻培养基以及海洋富油微藻产油方法。
技术介绍
微藻是一类肉眼不可见的微小藻类的统称，其细胞微小，形态多样，适应性强，分布广泛，是地球上最古老的初级生产者之一。微藻是一种可再生资源，具有生物量大、光合效率高、生长周期短、油脂含量高和环境友好等突出特点。因而，微藻的能源化利用在解决能源问题上具有很大的潜力。其中，以微藻油脂制备生物柴油成为当前国内外生物柴油领域的研究的热点，而富油藻株的获得是发展微藻生物柴油的首要环节。理想的生物柴油微藻原料，应同时满足高含油量和高生物量这两个指标，但是高含油量与高生物量却往往不能兼顾，如微藻C.sorokiniana拥有高生物量却不能提供高含油量(GriffithsMJ,HarrisonSTL.Lipidproductivityasakeycharacteristicforchoosingalgalspeciesforbiodieselproduction[J].JournalofAppliedPhycology,2009,21(5):493-507)，微藻Botryococcus含油量为80％却生长极为缓慢(ZhilaNO,KalachevaGS,VolovaTG.InfluenceofnitrogendeficiencyonbiochemicalcompositionofthegreenalgaBotryococus[J].JournalofAppliedPhycology,2005,17(4):309-315)。为此，油脂产率成为衡量微藻能否具有生物柴油生产潜力的一个综合指标。海南大学硕士论文《热带海洋富油微藻筛选、培养及采收初步研究》(张森)公开了有关富油微藻筛选、培养以及采收的系统研究内容，其中以海水藻株Desmodesmussp.WC08的油酸含量较高，多不饱和脂肪酸含量较低，相比其他藻株的脂肪酸组成，其是最具发展生物柴油潜力的藻株。此外，文献《铁、镁及钙对微藻Desmodesmussp.WC08生长和油脂积累的影响》(张森等)和《氮、磷对热带海洋富油微藻Desmodesmussp.WC08生长及油脂积累的影响》(罗宁、张森等)分别就培养基中组分对该藻株的生长和油脂产量的影响进行详细报道，其中后者中公开了培养基BG11以及培养条件。虽然热带海洋富油微藻Desmodesmussp.WC08具有比较突出的优势，但是微藻培养条件涉及大量的交互影响因素和不可知因素，在上述文献公开的培养方式下，该藻株的油脂产率仅为57.2mg/(L·d)，尚未体现该藻株潜在的产油能力，需要进一步对其培养方式进行优化，找寻获得较高油脂产率的培养条件，以期为后续规模化的培养奠定理论基础并提供实验依据。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种海洋富油微藻培养基以及海洋富油微藻产油方法，使得所述培养基能够极显著地提高富油微藻Desmodesmussp.WC08的油脂产率，同时提供相关的产油方法。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种海洋富油微藻培养基，每升水中包括：0.6gCO(NH2)2，0.087gK2HPO4，0.0222gMgSO4·7H2O，0.00645gCaCl2·2H2O，0.006g柠檬酸，0.00976mg柠檬酸铁铵，0.0487gNa2CO3,0.001gEDTA·Na2，2.860gH3BO3，0.220gZnSO4·7H2O，1.810gMnCl2·4H2O，0.079gCuSO4·5H2O，0.049gCo(NO3)2·6H2O，0.390gNa2MoO4·2H2O，海盐16g。针对现有用于培养Desmodesmussp.WC08(在本专利技术中可简写为WC08，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.12863)人工海水BG11培养基的缺陷，本专利技术从各个组分与藻种的对应关系出发，重新优化培养基，实现油脂产率极显著提高的目的。同时，本专利技术提供了所述培养基在培养保藏编号为CGMCCNo.12863的热带海洋富油微藻Desmodesmussp.WC08中和在制备培养保藏编号为CGMCCNo.12863的热带海洋富油微藻Desmodesmussp.WC08的培养基中的应用。此外，本专利技术还提供了一种海洋富油微藻产油方法，包括：将保藏编号为CGMCCNo.12863的热带海洋富油微藻Desmodesmussp.WC08接种到权利要求1所述培养基中培养，至微藻生长进入衰亡期后对藻泥进行采收，然后提取油脂。其中，采收和油脂提取可根据现有文献的方法进行，例如采收是将藻泥清洗后冻干，以藻粉形式采收；而油脂提取可根据采用稍加修改的Folch(FolchJ,LeesM,SloaneStanleyGH.Asimplemethodfortheisolationandpurificationoflipidfromanimaltissue[J].TheJournalofBiologicalChemistry,1957,226(1):497-509.)方法进行：1、称取约0.1g藻粉于试管中，记录数据。2、加入2ml氯仿甲醇(2：1)溶液。3、室温水浴超声30min。4、4000rpm离心5min，将上清液取出收集。5、加入磁石，磁力搅拌3～6h，并注意密封。6、再加入2ml提取剂磁力搅拌3h。7、重复步骤5，6操作1～4次。直到藻泥变成灰白色或提取液颜色不变。8、向收集得到的上清液，加入0.2倍体积的0.9％NaCl溶液洗涤分层，涡旋混匀，4000rpm离心5min。9、将下层氯仿相取至已知重量的小管中，置于通风橱风干至恒重。每组重复三组平行。微藻总脂含量(％)＝提取的粗脂质量/微藻干重×％单位体积的微藻油脂产率(mg/L*d)＝(mt*Lt-m0*L0)/TMt为收获时藻粉干重；M0为接种时的藻干重；Lt为收获时藻粉的总脂含量(％)；L0为接种时藻的总脂含量(％)；T为培养时间(d)。在具体实施过程中，除培养基外，其他培养条件可参照现有文献中的记载，同时本专利技术也给出了具体的培养参数，例如：所述接种按照Desmodesmussp.WC08与培养基为1:10的体积比进行接种；其具体接种量按照Desmodesmussp.WC08的初始OD680值0.25-0.4进行控制，初始OD值可具体选择0.25、0.33或0.4；所述培养按照6000-10000lx光照强度进行培养，光照强度可具体选择6000、8000、8333(即150μmol/m2/s)或10000lx；所述培养按照12h:12h的光照周期进行培养；所述培养按照6-7的初始pH值进行培养，具体可选择6、6.8或7。所述培养按照0.2-0.3的通气比进行培养，具体可选择0.2、0.25或0.3；所述培养在25-29℃下进行培养，具体可选择25、27或29℃。参照文献《氮、磷对热带海洋富油微藻Desmodesmussp.WC08生长及油脂积累的影响》公开的人工海水BG11培养基进行配置，作为本专利技术培养基的对照，两者相同培养条件下接种Desmodesmussp.WC08进行培养产油，结本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海洋富油微藻培养基，其特征在于，每升水中包括：0.6gCO(NH

【技术特征摘要】
1.一种海洋富油微藻培养基，其特征在于，每升水中包括：0.6gCO(NH2)2，0.087gK2HPO4，0.0222gMgSO4·7H2O，0.00645gCaCl2·2H2O，0.006g柠檬酸，0.00976mg柠檬酸铁铵，0.0487gNa2CO3,0.001gEDTA·Na2，2.860gH3BO3，0.220gZnSO4·7H2O，1.810gMnCl2·4H2O，0.079gCuSO4·5H2O，0.049gCo(NO3)2·6H2O，0.390gNa2MoO4·2H2O，海盐16g。2.权利要求1所述培养基在培养保藏编号为CGMCCNo.12863的热带海洋富油微藻Desmodesmussp.WC08中和在制备培养保藏编号为CGMCCNo.12863的热带海洋富油微藻Desmodesmussp.WC08的培养基中的应用。3.一种海洋富油微藻产油方法，其特征在于，包括：将保藏编号为CGMCCNo.12863的热带...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘平怀，李昂，刘积光，牛晴，王盛林，赵震宇，王孟，马莎莎，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南,46