一种抗AMH特异性抗体的制备方法以及该抗体在检测AMH试剂盒中的应用技术

本发明专利技术公开了一种抗AMH特异性抗体的制备方法,首先构建包含AMH编码序列的pCMV3表达质粒，转染CHO细胞，收集细胞培养上清，通过Ni柱纯化得到纯化后的AMH重组蛋白备用；用制备的AMH重组蛋白作为免疫原对Balb/c小鼠进行免疫，ELISA间接法检测小鼠血清效价超过1/8K后，取免疫小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合，杂交瘤细胞通过ELISA间接法进行3次亚克隆筛选，得到分泌抗AMH的单克隆杂交瘤细胞；将杂交瘤细胞注射小鼠腹腔，收集腹水经过纯化后得到抗AMH的特异性单克隆抗体。本发明专利技术制备方法简单，制备得到的抗体特异性强，应用在检测人AMH含量的试剂盒中，检测结果几乎不受动物血清的影响，可为医生的临床诊断和治疗提供可靠的依据。

Preparation of a specific anti-AMH antibody and its application in the detection of AMH Kit

【技术实现步骤摘要】
一种抗AMH特异性抗体的制备方法以及该抗体在检测AMH试剂盒中的应用
本专利技术涉及体外诊断领域，尤其是涉及一种抗AMH特异性抗体的制备方法，本专利技术还涉及制备出的抗体在检测AMH试剂盒中的应用。
技术介绍
抗缪勒氏管激素（anti-Mullerianhormone,AMH）是转化生长因子-β（TGF-β）超家族成员之一，最早由ProfessAlfredJost于1947年发现。AMH由两个相同的72kD亚基通过二硫键连接组成为分子量为144kD的二聚糖蛋白，在体内会从靠近C-末端的地方水解为2个55kD的N-端前肽和2个12.5kD的C-端成熟激素。男性的AMH激素由睾丸支持细胞生成，在生命开始时就参与抑制缪勒氏管发育，引起缪勒氏管退化，形成正常的男性生殖管道；女性的AMH由生长的小卵泡颗粒细胞产生，贯穿生命始终，其浓度随着年龄增加逐渐降低，直至女性更年期，AMH激素水平下降至几乎无法检测的水平。目前对女性的生育能力评估是通过评估卵巢储备功能来确定的，卵巢储备功能是指卵泡库质量和卵泡数量，育龄期女性的卵巢储备功能随着年龄增加而下降。而临床上用来评估卵巢储备功能的指标包括年龄、卵泡本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗AMH特异性抗体的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：第一步，制备AMH重组蛋白构建包含AMH编码序列的pCMV3表达质粒，转染CHO细胞，收集细胞培养上清，通过Ni柱纯化得到纯化后的AMH重组蛋白备用；第二步，制备抗AMH特异性抗体用第一步制备的AMH重组蛋白作为免疫原对Balb/c小鼠进行免疫，ELISA间接法检测小鼠血清效价超过1/8K后，取免疫小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合，杂交瘤细胞通过ELISA间接法进行3次亚克隆筛选，得到分泌抗AMH的单克隆杂交瘤细胞；将杂交瘤细胞注射小鼠腹腔，收集腹水经过纯化后得到抗AMH的特异性单克隆抗体。

【技术特征摘要】
1.一种抗AMH特异性抗体的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：第一步，制备AMH重组蛋白构建包含AMH编码序列的pCMV3表达质粒，转染CHO细胞，收集细胞培养上清，通过Ni柱纯化得到纯化后的AMH重组蛋白备用；第二步，制备抗AMH特异性抗体用第一步制备的AMH重组蛋白作为免疫原对Balb/c小鼠进行免疫，ELISA间接法检测小鼠血清效价超过1/8K后，取免疫小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合，杂交瘤细胞通过ELISA间接法进行3次亚克隆筛选，得到分泌抗AMH的单克隆杂交瘤细胞；将杂交瘤细胞注射小鼠腹腔，收集腹水经...

【专利技术属性】
技术研发人员：代春迎，侯鹏云，胡晓彤，张跃峰，张创，赵巧辉，李桂林，付光宇，吴学炜，杨增利，
申请(专利权)人：郑州伊美诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41