一种兔病毒性出血症、巴氏杆菌病、波氏杆菌病三联灭活疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种兔病毒性出血症、巴氏杆菌病、波氏杆菌病三联灭活疫苗及其制备方法。本发明专利技术所述疫苗其有效成分包括兔病毒性出血症病毒VP60蛋白抗原、灭活的多杀性巴氏杆菌QLT‑1株和支气管败血波氏杆菌JN01株抗原，该三联灭活疫苗免疫后保护性抗体产生快，免疫攻毒保护率高，对兔病毒性出血症病毒AV‑34株、多杀性巴氏杆菌QLT‑1株、支气管败血波氏杆菌JN01株的攻毒保护率均达到80％以上。结果说明本发明专利技术的疫苗安全可靠，可用于预防兔病毒性出血症(兔瘟)、兔多杀性巴氏杆菌病(A型)、兔支气管败血波氏杆菌病的发生。

A Triple Inactivated Vaccine for Rabbit Viral Hemorrhagic Disease, Pasteurellosis and Bordetellosis and Its Preparation Method

【技术实现步骤摘要】
一种兔病毒性出血症、巴氏杆菌病、波氏杆菌病三联灭活疫苗及其制备方法
本专利技术涉及一种兔病毒性出血症、巴氏杆菌病、波氏杆菌病三联灭活疫苗及其制备方法。属于兽用生物制品领域。
技术介绍
兔病毒性出血症(viralhaemorrhagicdiseaseofrabbits)是由兔出血症病毒(rabbithaemorrhagicdiseasevirus,RHDV)感染所引起的兔的一种急性、败血性、高度接触传染性、高致死性的传染性疾病，又称兔出血性肺炎和兔出血症病毒，俗称兔瘟，全身实质器官出现水肿、淤血和出血为主要特征的传染病。兔病毒性出血症呈世界流行性分布，发病率和病死率很高，高达100％，是兔常见多发病之一，1989年，该病被世界动物卫生组织(OIE)正式列为B类传染病，我国则将其列为二类传染病。该病1984年首次暴发于我国，随着自然流行或国际贸易的发展迅速流行，陆续在亚洲、欧洲、美洲地区多个国家发现了相关病例报告，新西兰、澳大利亚等少数国家引进病毒保护原始生态环境平衡外，该病困扰着其他各国养兔业的健康发展，给养兔业带来了广泛而严重的影响。目前主要使用兔瘟组织灭活疫苗来预防该病。组织灭活疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种兔病毒性出血症、巴氏杆菌病、波氏杆菌病三联灭活疫苗，其特征在于该灭活疫苗含有重组苜蓿银粉夜蛾核型多角体病毒rBac‑HBM‑HS4‑VP60株表达的兔病毒性出血症病毒VP60蛋白、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌的灭活抗原；所述疫苗用于同时预防兔病毒性出血症、兔多杀性巴氏杆菌病(A型)、兔支气管败血波氏杆菌病。

【技术特征摘要】
1.一种兔病毒性出血症、巴氏杆菌病、波氏杆菌病三联灭活疫苗，其特征在于该灭活疫苗含有重组苜蓿银粉夜蛾核型多角体病毒rBac-HBM-HS4-VP60株表达的兔病毒性出血症病毒VP60蛋白、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌的灭活抗原；所述疫苗用于同时预防兔病毒性出血症、兔多杀性巴氏杆菌病(A型)、兔支气管败血波氏杆菌病。2.根据权利要求1所述一种兔病毒性出血症、巴氏杆菌病、波氏杆菌病三联灭活疫苗，其特征在于所述疫苗由重组苜蓿银粉夜蛾核型多角体病毒rBac-HBM-HS4-VP60株表达的兔病毒性出血症病毒VP60蛋白、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌灭活后制备获得，抗原按每毫升疫苗中含重组苜蓿银粉夜蛾核型多角体病毒rBac-HBM-HS4-VP60株细胞培养物血凝效价应不低于1:512，含多杀性巴氏杆菌菌数应不低于3.0×109CFU，含支气管败血波氏杆菌菌数应不低于6.0×109CFU标准进行配苗。3.根据权利要求1所述一种兔病毒性出血症、巴氏杆菌病、波氏杆菌病三联灭活疫苗，其特征在于所述疫苗的的生产菌毒株分别为保藏编号为CGMCCNo.8052的重组苜蓿银粉夜蛾核型多角体病毒rBac-HBM-HS4-VP60株，保藏编号为CGMCCNo.17688的多杀性巴氏杆菌QLT-1株和保藏编号为CGMCCNo.17689的支气管败血波氏杆菌JN01株，以上菌毒种已于2013年08月02日和2019年05月16日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏。4.根据权利要求1所述一种兔病毒性出血症、巴氏杆菌病、波氏杆菌病三联灭活疫苗，其特征在于所述疫苗含有氢氧化铝胶佐剂，抗原与氢氧化铝胶配苗比例为9:1。5.根据权利要求1所述一种兔病毒性出血症、巴氏杆菌病、波氏杆菌病三联灭活疫苗，其特征在于所述该疫苗的的制备方法，包括以下步骤：(1)重组苜蓿银粉夜蛾核型多角体病毒rBac-HBM-HS4-VP60株半成品制备：将重组苜蓿银粉夜蛾核型多角体病毒rBac-HBM-HS4-VP60株基础毒种接种Sf9细胞进行培养，对收获的细胞培养物采用BEI灭活剂进行灭活，灭活结束后需进行灭活检验，灭活检验方法为MTT相对效力法；(2)多杀性巴氏杆菌QLT-1株半成品制备：将多杀性巴氏杆菌QLT-1株菌种接种含0.1％裂解血球全血及0.1％小牛血清改良马丁肉汤培养基进行培养，对收获的菌液采用甲醛灭活剂进行灭活，灭活结束后，取样接种含0.1％裂解血球全血及4％小牛血清的改良马丁肉汤琼脂平板进行灭活检验，应无菌生长；(3)支气管败血波氏杆菌JN01株半成品制备：将1支气管败血波氏杆菌JN01株菌种接种含0.1％裂解血球全血及0.1％小牛血清改良马丁肉汤培养基进行培养，对收获的菌液采用甲醛灭活剂进行灭活，灭活结束后，取样接种含0.1％裂解血球全血及4％小牛血清的改良马丁肉汤琼脂平板进行灭活检验，应无菌生长；(...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈辉，张小军，宋晓飞，葛平萍，秦绪伟，张娣，李金波，贾爱琴，王蕾，徐龙涛，
申请(专利权)人：齐鲁动物保健品有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37