一种靶向HBV耐药突变基因的PCR-CRISPR检测方法技术

本发明专利技术公开了一种靶向HBV耐药突变基因的PCR‑CRISPR检测方法，所述方法包括(1)以一对特异性引物PCR扩增待测样本的核酸，所述上游引物的5’端设置有能被T7RNA聚合酶识别并转录的序列；(2)在包括有识别HBV YMDD耐药突变位点的crRNA、T7RNA聚合酶、Cas13a蛋白和RNA酶报告分子的检测体系中对待测样本核酸的扩增产物中是否存在有耐药突变基因进行检测，所述耐药突变基因靶序列为HBV基因组YMDD区的YIDD或者YVDD基因突变。本发明专利技术还公开了能够靶向HBV的YIDD或者YVDD耐药基因突变的crRNA以及含有该crRNA的试剂盒。本发明专利技术提供的方法能够简便、快速地检测HBV耐药突变基因，具有极高的灵敏度和特异性。

A PCR-CRISPR Detection Method Targeting HBV Resistance Mutant Gene

【技术实现步骤摘要】
一种靶向HBV耐药突变基因的PCR-CRISPR检测方法
本专利技术涉及一种crRNA分子及通过CRISPR-Cas13a系统对乙肝病毒耐药突变基因进行检测的技术，属于分子生物学

技术介绍
乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus，HBV)引起的严重传染性疾病。全球约有2.4亿人为乙肝病毒表面抗原携带者，每年约有一百万人死于HBV引起的肝脏相关疾病。我国是乙肝大国，现有HBV感染者约9000万人，其中慢性乙型肝炎患者约2800万例，表明乙肝病毒感染已经成为危害公众健康的重大问题。乙肝病毒的持续复制是乙肝致病的根本原因，乙肝治疗的根本目的是抑制病毒复制。常用的乙肝抗病毒治疗药物有干扰素和核苷类似物等。干扰素(Interferon,IFN)是一种广谱抗病毒药物，并不直接杀伤或抑制HBV，主要通过识别细胞表面受体使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制HBV的复制，同时还可以增强免疫细胞的活力，起到免疫调节作用。核苷类似物(NucleostideAnalogues，NAs)可通过抑制病毒DNA逆转录酶的活性从而抑制乙肝病毒的复制。抗HBV治疗的临床实践已证明核苷类似物的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种非诊断目的的靶向HBV耐药突变基因的PCR‑CRISPR检测方法，所述方法包括以下步骤：(1)以一对上下游特异性引物扩增待测样本的核酸，所述下游引物的5’端设置有能被T7 RNA聚合酶识别并转录的序列；(2)在包括有识别HBV DNA靶序列的crRNA、T7 RNA聚合酶、Cas13a蛋白和报告RNA的检测体系中对待测样本核酸的扩增产物中是否存在有靶序列进行检测，所述耐药基因靶序列为HBV基因组YMDD区的YIDD或者YVDD基因突变。

【技术特征摘要】
1.一种非诊断目的的靶向HBV耐药突变基因的PCR-CRISPR检测方法，所述方法包括以下步骤：(1)以一对上下游特异性引物扩增待测样本的核酸，所述下游引物的5’端设置有能被T7RNA聚合酶识别并转录的序列；(2)在包括有识别HBVDNA靶序列的crRNA、T7RNA聚合酶、Cas13a蛋白和报告RNA的检测体系中对待测样本核酸的扩增产物中是否存在有靶序列进行检测，所述耐药基因靶序列为HBV基因组YMDD区的YIDD或者YVDD基因突变。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述上游引物的序列如SEQIDNO.1所示，所述下游引物的序列如SEQIDNO.2所示。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述crRNA的序列如SEQIDNO.3、SEQIDNO.5和/或SEQIDNO.6所示。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述Cas13a蛋白为LwCas13a蛋白。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：李浩，宋宏彬，王珊，郝荣章，邱少富，寇志华，周育森，董雪，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，中国人民解放军疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：北京,11