crRNA靶向的PCR-CRISPR系统在检测HBV DNA中的应用技术方案

本发明专利技术公开了一种PCR结合CRISPR检测HBV DNA的方法，所述方法包括：(1)以一对上下游特异性引物扩增待测样本的核酸，所述下游引物的5’端设置有能被T7RNA聚合酶识别并转录的序列；(2)在包括有识别HBV DNA靶序列的crRNA、T7RNA聚合酶、Cas13a蛋白和报告RNA的检测体系中对待测样本核酸的扩增产物中是否存在有靶序列进行检测，所述HBV DNA靶序列的区间为第803‑829nt。本发明专利技术还公开了能够靶向HBV DNA特异位点的crRNA以及含有该crRNA的试剂盒。本发明专利技术提供的方法在检测HBV DNA含量中简便、快速，具有极高的灵敏度和特异性，在PCR扩增后的15分钟内分辨出单拷贝的HBV DNA，对于低病毒载量的血清样本，显示出更高的阳性检出率。

Application of CR-CRISPR System Targeted by crRNA in Detecting HBV DNA

【技术实现步骤摘要】
crRNA靶向的PCR-CRISPR系统在检测HBVDNA中的应用
本专利技术涉及一种crRNA序列及通过CRISPR-Cas13a系统对乙肝病毒基因进行检测的技术，属于分子生物学

技术介绍
乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus，HBV)引起的严重传染性疾病。全球约有2.4亿人为乙肝病毒表面抗原携带者，每年约有一百万人死于HBV引起的肝脏相关疾病。我国是乙肝大国，现有HBV感染者约9000万人，其中慢性乙型肝炎患者约2800万例，表明乙肝病毒感染已经成为危害公众健康的重大问题。由此可见，乙肝病毒的早发现、早治疗，对于乙肝患者至关重要。HBVDNA是乙肝病毒的核心物质和病毒复制的基础。在病毒DNA携带的遗传基因作用下，HBVDNA分别复制出新的病毒外壳和DNA核心，随后重新组装，形成大量的新病毒，释放出来继续感染其他肝细胞。乙肝病毒DNA是HBV感染最直接的指标，可用于检测人体内存在乙肝病毒的多少和传染程度，同时也是判断乙肝病毒有无复制的“金指标”。HBVDNA含量越高表示病毒复制程度越高，传染性越强。乙肝病毒DNA含量的检测对于乙肝治疗过程中的监测，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于非诊断目的的PCR结合CRISPR检测HBV DNA的方法，所述方法包括以下步骤：(1)以一对上下游特异性引物PCR扩增待测样本的核酸，所述下游引物的5’端设置有能被T7 RNA聚合酶识别并转录的序列；(2)在包括有识别HBV DNA靶序列的crRNA、T7 RNA聚合酶、Cas13a蛋白和报告RNA的检测体系中对待测样本核酸的扩增产物中是否存在有靶序列进行检测，所述HBV DNA靶序列的区间为第803‑829nt。

【技术特征摘要】
1.一种基于非诊断目的的PCR结合CRISPR检测HBVDNA的方法，所述方法包括以下步骤：(1)以一对上下游特异性引物PCR扩增待测样本的核酸，所述下游引物的5’端设置有能被T7RNA聚合酶识别并转录的序列；(2)在包括有识别HBVDNA靶序列的crRNA、T7RNA聚合酶、Cas13a蛋白和报告RNA的检测体系中对待测样本核酸的扩增产物中是否存在有靶序列进行检测，所述HBVDNA靶序列的区间为第803-829nt。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述上游引物的序列由SEQIDNO.1所示，所述下游引物的序列由SEQIDNO.2所示。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述crRNA的序列由SEQIDNO.3所示。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述Cas13a蛋白为LwCas13a蛋白。5.根据权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋宏彬，李浩，王珊，郝荣章，邱少富，寇志华，周育森，董雪，
申请(专利权)人：中国人民解放军疾病预防控制中心，中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11