【技术实现步骤摘要】
一种基于表达绿色荧光蛋白的重组寨卡病毒的药物筛选系统及其应用
本专利技术涉及一种抗病毒药物的筛选系统及其应用，特别涉及一种基于表达绿色荧光蛋白的重组寨卡病毒的药物筛选系统及其应用。本专利技术属于生物
技术介绍
寨卡病毒(Zikavirus,ZIKV)是一种主要经蚊媒传播的人兽共患病病原，其与登革热病毒(Denguevirus,DENV)，西尼罗病毒(WestNilevirus,WNV)，日本乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus,JEV)和黄热病毒(YellowFevervirus,YFV)等同属黄病毒科黄病毒属成员。1947年，Dick等研究人员在乌干达寨卡森林中的恒河猴体内将其分离出来。ZIKV感染宿主后能引起寨卡热，大多数感染者并没有明显症状或者症状较为轻微，包括结膜炎、皮疹、发热、关节和肌肉疼痛等症状，病程约2-7天。但若在妊娠期间发生ZIKV感染，则可能使新生儿患有小头症和其他先天性畸形，同时还可能造成妊娠者发生早产和流产等严重症状。研究显示，世界上约有86个国家或地区存在ZIKV，这表明ZIKV在全球范围内呈蔓延趋势...
【技术保护点】
1.一种基于表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的药物筛选系统，其特征在于，所述的药物筛选系统由表达绿色荧光蛋白的重组寨卡病毒以及表达DC‑SIGNR的BHK‑21细胞系组成。
【技术特征摘要】
1.一种基于表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组寨卡病毒(Zikavirus,ZIKV)的药物筛选系统，其特征在于，所述的药物筛选系统由表达绿色荧光蛋白的重组寨卡病毒以及表达DC-SIGNR的BHK-21细胞系组成。2.如权利要求1所述的药物筛选系统，其特征在于，所述的表达绿色荧光蛋白的重组寨卡病毒是通过以下方法制备得到的：1)根据寨卡病毒基因序列，通过分段基因合成技术合成除结构蛋白基因外的其它基因组序列以及插入缺失的结构蛋白基因位置的GFP报告基因序列基因，通过多克隆酶切位点连入哺乳动物表达载体，获得复制子重组质粒，该复制子重组质粒的开放阅读框为“CMV启动子-酶切位点-5′UTR-编码C蛋白N端20个氨基酸的核苷酸序列-GFP-FMDV2A-编码E蛋白C端22个氨基酸的核苷酸序列-NS1～5(非结构蛋白1～5基因序列)-3′UTR-HDVr(丁肝病毒核酶基因序列)-酶切位点”；2)根据寨卡病毒基因序列，通过基因合成技术分别合成结构蛋白基因序列以及GFP序列，各元件的连接顺序为5′UTR–编码ZIKVC蛋白C端38个氨基酸的核苷酸序列-GFP-FMDV2A-C-prM-E-NS1基因1-134位核苷酸序列，通过多克隆酶切位点将该片段克隆到哺乳动物表达载体上，得到含有ZIKV结构基因以及绿色荧光蛋白的质粒；3)报告型ZIKV的拯救以步骤2)的得到的质粒为模板，进行PCR扩增，扩增获得含有CMV启动子以及5′UTR–编码ZIKVC蛋白C端38个氨基酸的核苷酸序列-GFP-FMDV2A-C-prM-E-NS1基因1-134位核苷酸序列的PCR产物，PCR产物用于报告型病毒的拯救；报告型ZIKV的拯救：HEK-293T细胞于24孔板内用10％v/vFBSDMEM培养基培养至密度为70％-90％，利用TransIT-293TransfectionReagent转染试剂将得到的PCR产物和线性化的复制子重组质粒分别进行转染，转染72h后，收获细胞及上清于-70℃保存，得到表达绿色荧光蛋白的重组寨卡病毒。3.如权利要求2所述的药物筛选系统，其特征在于，所述的寨卡病毒基因序列是2015年巴西流行的ZIKV株的基因序列，Genbank登录号为：KX280026。4.如权利要求2所述的药物筛选系统，其特征在于，步骤1)中是通过多克隆酶切位点SacI和NotI连入哺乳动物表达载体pCI-neo，获得复制子重组质粒，该...
【专利技术属性】
技术研发人员：步志高，华荣虹，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23
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